- hUMSCs向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch1和神经元素3的表达
- 2020年
- 目的:探讨人间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch信号通路受体Notch1与神经元素3(Ngn3)变化。方法:分离培养并鉴定hUMSCs,采用分阶段联合诱导法(前10 d用含EGF低糖培养基诱导,后11 d用含激活素A和尼克酰胺高糖培养基诱导)诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化,设单独培养的hUMSCs作为对照;观察诱导分化前后细胞的形态变化,免疫细胞化学法检测诱导后细胞Ngn3、胰高血糖素(Glucagon)表达鉴定胰岛前体细胞,电镜下观察诱导后胰岛前体细胞改变;采用免疫细胞化学法、real-time PCR法及Western blot法检测诱导第7天、第14天及第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达;Western blot法检测诱导并加入γ分泌酶抑制剂(DAPT)后第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达水平。结果:诱导后Glucagon免疫组化染色呈阳性,出现胰岛前体细胞集落,电镜下可见胞体内有分泌颗粒;real-time PCR和Western blot结果显示,Notch1水平在诱导后第7天时最高,Ngn3水平至第14天时达到峰值;添加Notch信号通路抑制剂后Ngn3表达水平升高。结论:Notch信号通路可能通过激活Notch1受体与下游基因Ngn3共同调控体外诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化过程。
- 韩晶洪艳王琪檀梦天
- 关键词：间质干细胞NOTCH1人脐带间充质干细胞
- 骨髓间充质干细胞来源的外泌体对小鼠肝库普弗细胞极化的影响被引量：2
- 2022年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体(exosomes)对肝库普弗(Kupffer)细胞极化的影响。方法体外分离培养BMSCs后,经流式细胞术鉴定其表面分子表达,通过成骨和成脂诱导培养基诱导鉴定其分化潜能,通过外泌体提取试剂盒从BMSCs培养上清提取外泌体,电子显微镜观察其形态,并用流式细胞术鉴定表面分子表达。体外培养Kupffer细胞随机分为正常培养组、脂多糖(LPS)刺激组、LPS共培养组,光学显微镜下观察体外培养3组Kupffer细胞形态的变化。60只小鼠腹腔注射CCl_(4)复制急性肝损伤模型,并随机分为PBS对照组和外泌体治疗组,HE染色观察体内两组肝组织病理学变化、眼球取血检测肝功能谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的表达。Western blotting分别检测体外培养的3组Kupffer细胞和体内两组肝脏组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(ARG1)的表达,Real-time PCR法检测其iNOS、ARG1、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和C-X-C基序趋化因子(CXCL)-10的表达。结果成功分离出BMSCs,具有成骨细胞和成脂细胞分化能力,并表达CD105、CD45;电子显微镜观察到分离的外泌体呈囊泡状,并表达CD63和CD81;光学显微镜观察显示,BMSCs的外泌体能减弱Kupffer细胞活化,BMSCs的外泌体注射后能减弱肝脏组织的病理性改变(P<0.05),降低肝功能ALT和AST的表达(P<0.05);Western blotting显示,体外实验LPS和外泌体共培养组与体内实验外泌体治疗组的ARG1的表达均增加(P<0.05),iNOS均降低(P<0.05);Real-time PCR显示,体外LPS和外泌体共培养组与体内外泌体治疗组的iNOS、IL-1β、TNF-α和CXCL-10的表达下降(P<0.05),ARG1的表达增加(P<0.05)。结论BMSCs来源的外泌体抑制肝Kupffer细胞向M1型极化。
- 秦阳阳许龙飞王琪韩晶洪艳
- 关键词：外泌体库普弗细胞极化小鼠
- Hes1在hUMSCs向胰岛前体细胞诱导过程中的表达改变被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨Notch信号节点分子Hes-1以及神经元素3(neurogenin 3,Ngn3)在人脐带间充质干细胞(human umbilicalcord mesenchyreal stem cells,h UMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的表达变化.方法:(1)分离培养并鉴定h UMSCs;(2)采用联合分阶段诱导法,取P5代h UMSCs向胰岛前体细胞分化,倒置相差显微镜观察诱导前后细胞形态变化,免疫组织化学技术检测诱导后Insulin、Ngn3、胰高血糖素的表达;(3)诱导后7、14、21 d分别取细胞进行免疫组织化学法、Western blot检测Hes1以及Ngn3的表达变化.结果:h UMSCs经诱导后,细胞胞体呈现宽大形态,并出现胰岛前体细胞的集落,免疫组织化学技术检测诱导后细胞Ngn3、Insulin、胰高血糖素呈阳性表达;Western blot检测Ngn3在诱导过程中逐渐升高,诱导14 d(E2组)达到峰值,21 d(E3组)下降;Hes1的表达7-14 d与空白对照组(CG组)无明显差异,与21 d(E3组)下降.结论:在h UMSCs向胰岛前体细胞诱导过程中Notch信号通路节点分子Hes1表达改变可能参与诱导后细胞进一步分化的调节过程.
- 檀梦天洪艳韩晶蒋鑫
- 关键词：人脐带间充质干细胞HES1NOTCH信号通路
