孙一凡
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：上海交通大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 百子莲茎尖分生组织蛋白双向电泳体系的建立被引量：2
- 2015年
- 以‘蓝色大花’百子莲（Agapanthus praecoxssp.orientalis‘Big blue’）茎尖分生组织为材料,对比研究了不同提取与裂解方法制备蛋白样品以排除多酚、多糖及核酸物质对蛋白双向电泳体系（Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）的干扰。提取过程采用TCA/丙酮沉淀法和超声波破碎法;蛋白裂解过程中分别使用苯甲基磺酰氟（Phenylmethanesulfonyl Fluoride,PMSF）和乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA）、Cocktail（广谱性）蛋白酶抑制剂、核酸酶Nuclease Mix和2-D Clean-Up蛋白纯化试剂盒。制备的各蛋白样品经过7cm IPG（pH 3~10）胶条上样、电泳后发现,使用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白,裂解液中加入Cocktail蛋白酶抑制剂裂解后,用2-D Clean-Up试剂盒所制备的样品其双向凝胶电泳图谱效果最好,获得蛋白点数量最多,且蛋白等电点pI主要分布于4~8之间。随后,应用分辨率更高的24cm IPG（pH 4~7）胶条进行电泳效果的验证,蛋白点在凝胶的2个方向上均得到了较好地分离,经过ImageMaster 2-D Platinum5.0软件分析后共检测到有效蛋白点820个。本研究初步建立了百子莲茎尖分生组织蛋白双向凝胶电泳体系,为后续开展百子莲属植物蛋白质组学研究提供了重要的技术保障。
- 张洁孙一凡张荻申晓辉
- 关键词：百子莲茎尖分生组织蛋白提取双向凝胶电泳
