李慧萍
- 作品数：13 被引量：19H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学更多>>
- 内蒙古包头市1例绵羊肺腺瘤病的诊断与病毒env基因分析被引量：1
- 2022年
- 绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的慢性、进行性、接触性绵羊肺肿瘤疾病。本研究通过尸体剖检、病理组织学、PCR、免疫组织化学和蛋白免疫印迹等方法确诊了1例绵羊肺腺瘤病,用病毒env基因测序结果进行基因结构和遗传进化分析。病理诊断结果显示,尸体剖检见肺肿大且质地坚实,肺表面有大量白色结节,肺叶上有数个有光泽的实变区,肺切面可见大面积实变区;光镜下可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增生明显,呈立方状或柱状生长形成典型的“菜花样”腺瘤灶,肺泡腔内可见巨噬细胞。在病原(JSRV)的env和U3区分别设计两对引物的PCR检测结果显示,所扩增的目的条带大小与预期扩增片段大小一致,同时序列分析结果显示JSRV env与本实验室上传至GenBank中的参考序列JQ837489同源性为97.7%,JSRV env与JQ837489和新疆株KP691837聚为一支,亲缘关系较近;采用本实验室制备的JSRV的囊膜蛋白(Env)的多克隆抗体为一抗进行免疫组织化学检测,结果显示在增生的肺泡Ⅱ型上皮细胞中出现棕黄色深染的阳性信号;蛋白免疫印迹实验检测肺组织中JSRV Env相对表达量的结果显示,在80 kDa处表达特异性条带。研究结果表明,内蒙古包头地区已存在JSRV感染病例,这为今后OPA的诊断提供参考依据。
- 段续接杜晓悦张培王金玲丁玉林张良李慧萍刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒病理学PCR
- 内蒙古绵羊梅迪-维斯纳病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：4
- 2021年
- 为建立一种检测内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan荧光定量PCR方法,根据高度保守的gag基因序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件和反应体系的优化,建立了快速检测MVV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示,扩增相关系数为0.999,对重组标准质粒的最低检测量为1.0×100 copies/μL,对羊的其他肺炎表现常见病原核酸无扩增反应;利用该方法对内蒙古地区12份疑似病例的肺组织进行检测,其中3份为MVV阳性。结果表明,本研究建立的实时荧光定量PCR方法在MVV的快速、准确诊断中具有良好的应用前景,也将为内蒙古地区防控梅迪-维斯纳病提供可靠的检测手段。
- 李慧萍张良徐斯日古楞王多智刘淑英
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起绵羊绒毛膜滋养层细胞的恶性转化被引量：5
- 2018年
- 为了明确绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)的致瘤作用,将重组真核表达质粒pEGFP-C1/exJSRVenv和pEGFP-C1/enJSRV-env分别转染到永生化绵羊绒毛膜滋养层细胞(STCs)中,筛选最佳转染条件并利用软琼脂集落形成试验检测是否引起细胞的恶性转化;用平板克隆试验检测囊膜蛋白的表达对细胞增殖的影响。结果显示:在STCs中转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒后细胞在软琼脂中生长并产生集落,同时表现细胞接触抑制性消失;转染pEGFP-C1/enJSRV-env质粒的STCs则表现为不能在软琼脂中产生集落;平板克隆试验结果经SPSS软件分析,转染pEGFP-C1/exJSRV-env的绵羊绒毛膜滋养层细胞的克隆形成率显著高于转染pEGFP-C1/enJSRV-env细胞、pEGFP-C1空载体的细胞以及未转染的细胞(P<0.01)。exJSRV-Env的表达可以诱导STCs发生恶性转化以及细胞增殖。本试验可以为进一步探讨绵羊肺腺瘤逆转录病毒囊膜蛋白的功能提供理论依据,并为研究绵羊肺腺瘤病的致瘤机制提供新思路。
- 赵娟徐斯日古楞李慧萍刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白恶性转化细胞增殖
- 绵羊梅迪-维斯纳病毒CA蛋白可溶性表达、多克隆抗体制备及鉴定被引量：1
- 2022年
- [目的]制备绵羊梅迪-维斯纳病毒(maedi-visna virus,MVV)衣壳蛋白(capsid protein,CA)多克隆抗体,并鉴定其特异性。[方法]根据MVV内蒙古分离株CA基因序列设计特异性引物,扩增CA基因,构建重组质粒;对CA重组蛋白进行原核表达及纯化,制备兔源MVV CA重组蛋白多克隆抗体,采用间接ELISA方法测定其抗体效价,利用Western blot和免疫组化方法对其进行特异性鉴定。[结果]成功构建MVV CA重组蛋白原核表达系统,纯化后的目的蛋白大小约27 kDa;间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价为1∶8192;Western blot检测感染MVV绵羊的病肺组织,在25 kDa处出现特异性条带;免疫组化结果显示感染MVV绵羊的病肺中巨噬细胞的胞浆内有明显棕黄色阳性信号。[结论]利用获得的可溶性重组MVV CA蛋白制备的多克隆抗体具有较好特异性,可为MVV血清学诊断技术提供检测抗体。
- 李慧萍陈思旭张良史晓娜史晓娜
- 关键词：绵羊衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 基于CA-TM融合蛋白的梅迪-维斯纳病毒胶体金免疫层析检测方法的建立与应用
- 2024年
- 旨在建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒(MVV)抗体的胶体金免疫层析检测方法。利用本实验室的重组CA-TM融合蛋白(r CA-TM)标记检测线,以鸡Ig Y抗体标记质控线,以重组链球菌蛋白(r-SPG)与鸡Ig Y用于胶体金标记。经各条件优化建立MVV胶体金免疫层析快速检测方法,并通过特异性、敏感性、稳定性以及临床应用对其检测效果进行评价。结果显示,成功表达、纯化并获得了r CA-TM;成功建立的胶体金免疫层析法特异性试验结果显示不能检测除MVV以外的如口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊肺炎支原体、布鲁菌等绵羊常见病原;敏感性试验结果显示最低可检出2400倍稀释的MVV阳性血清;稳定性试验结果显示在模拟6个月避光常温密封保存后的试纸条仍具有良好的检测性能。利用建立的MVV胶体金检测法和广泛应用于MVV检测的进口商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒对40份疑似病例血清样品进行对比检测,结果显示:用胶体金检测方法检出MVV抗体阳性血清17份,阴性血清23份;用进口商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒检出阳性血清16份,阴性血清24份,二者相比整体符合率为97.5%。综上,成功建立了MVV胶体金免疫层析快速检测方法,该方法研制的检测试纸条性能良好、便于储存、适合现场快速检测和批量检测,对MVV的监测、防控有重要意义,为内蒙古地区MVV的净化提供了新的检测方案。
- 陈思旭包磊李慧萍张良刘淑英
- 关键词：原核表达融合蛋白胶体金免疫层析
- 绵羊SUN2基因生物信息学分析及其在A549细胞中的表达被引量：1
- 2021年
- 本研究旨在克隆绵羊SUN2(Sad1 and UNC84 domain containing 2)基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达。根据绵羊SUN2基因序列(GenBank登录号:XM_015095026.2)设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆绵羊SUN2基因CDS序列,测序鉴定后对其进行生物信息学分析,并构建pEGFP-C1-SUN2重组质粒。利用脂质体转染方法将pEGFP-C1-SUN2重组质粒转染至A549细胞并检测其表达。结果显示,绵羊SUN2基因CDS区序列全长2187 bp,编码728个氨基酸,理论分子质量为81.06 ku,分子式为C_(3593)H_(5639)N_(1031)O_(1110)S_(14),等电点(pI)为6.20,总原子数为11387,不稳定系数为56.88,属于不稳定蛋白。绵羊SUN2基因序列与山羊、牛、猪、马、家犬、大鼠、小鼠及人的相似性分别为98.9%、97.2%、91.6%、90.6%、87.1%、82.4%、82.1%和86.1%,不同物种间基因相似性较高,进化过程中相对保守。系统进化树分析表明,绵羊SUN2基因与山羊、牛、猪、马和家犬等哺乳动物的遗传距离相对较近,与鸡的遗传距离较远。结构域及跨膜结构域预测显示,绵羊SUN2蛋白含有1个高度保守的SUN结构域,且存在跨膜结构域。信号肽预测显示其不存在信号肽位点,疏水性分析为亲水性蛋白,氨基酸序列二级结构主要为α-螺旋(51.65%),其余为无规则卷曲(31.46%)、延伸链(12.36%)和β-转角(4.53%)。试验成功构建了绵羊SUN2基因真核表达载体pEGFP-C1-SUN2,将其转染至A549细胞并检测到蛋白表达。本试验结果为绵羊SUN2基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究SUN2基因在绵羊肺腺瘤病中的作用奠定了基础。
- 杜晓悦张良李慧萍刘淑英
- 关键词：绵羊生物信息学分析转染
- 磷酸二酯酶在金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的表达分析
- 2024年
- 为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定量PCR技术检测了金黄色葡萄球菌刺激下这些PDE家族亚型的表达差异及PDE4抑制剂RO-20-1724对金黄色葡萄球菌诱导的炎症因子表达的影响。结果表明:在bMECs中,PDE3B、PDE5A、PDE8B、PDE9A基因呈高表达;在mMECs中,PDE2A基因呈高表达;而在mMG中,PDE2A、PDE3A基因呈高表达。金黄色葡萄球菌刺激8 h后bMECs中PDE1C、PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A基因的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1B、PDE7A、PDE7B基因相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);mMECs中PDE1B、PDE1C、PDE2A、PDE3A、PDE4A、PDE4C、PDE4D、PDE5A基因相对表达量极显著升高(P<0.01),而PDE7A基因相对表达量极显著降低(P<0.01);mMG中PDE1B、PDE3A、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A、PDE8B基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1C、PDE4B、PDE7B基因相对表达量极显著降低(P<0.01)。加入PDE4抑制剂RO-20-1724孵育8 h后可极显著降低金黄色葡萄球菌诱导的mMECs中IL-1β基因的相对表达量。说明乳腺上皮细胞中PDE家族的一些亚型表达存在种属差异,金黄色葡萄球菌感染后可引起不同PDE亚型表达发生改变。
- 张良万凯陈灰李慧萍刘淑英
- 关键词：乳腺炎磷酸二酯酶MRNA表达上皮细胞
- 动物生理学课程思政元素探索——以内蒙古农业大学为例被引量：3
- 2022年
- 本文以内蒙古农业大学为例,基于动物生理学的课程特点,通过对理论、实验教学内容和教学过程的分析和延展,探索和挖掘了10个思政元素。通过课程设计将思政元素贯穿于动物生理学的日常教学中,并对学生的满意度进行调查。结果显示,学生对10个元素的完全满意度平均为81.6%。本文初步挖掘动物生理学课程中的思政元素,为建设动物生理学的课程思政体系提供一定参考。
- 李慧萍张良徐斯日古楞刘淑英
- 关键词：动物生理学教学设计
- 自然感染绵羊肺腺瘤病毒羊肺组织线粒体自噬分子表达分析
- 2024年
- 为分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)羊肺组织中线粒体的质量及自噬相关蛋白表达的变化,本研究将自然感染JSRV羊的肺组织作为研究对象,利用病理组织学、PCR和免疫组化法对自然感染JSRV羊肺组织进行鉴定。利用透射电镜技术观察病羊肺组织中线粒体形态结构变化,分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(WB)检测感染组羊肺组织中线粒体相关因子线粒体外膜蛋白20(Outer membrane translocase 20,TOMM20)、线粒体内膜蛋白(Inner membrane translocase 23,TIMM2(3)、热休克蛋白60(Heat shock proteins 60,HSP60)的mRNA和蛋白水平的相对表达量,利用WB检测病羊肺组织线粒体蛋白中自噬相关因子Beclin1、LC3和选择性自噬受体p62蛋白水平的相对表达量。结果表明:(1)PCR扩增的目的条带与JSRV env预期扩增片段大小一致。光镜下可见肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞呈乳头状生长,且伸入肺泡中,同时免疫组化结果显示在增生的肺泡Ⅱ型细胞中检测到JSRV Env大量表达,而阴性对照组未检出。(2)与健康对照组相比,透射电镜观察到感染组羊组线粒体大量损伤,并且出现双层膜结构的线粒体自噬体包裹损伤的线粒体,TOMM20、TIMM23和HSP60的mRNA相对表达水平和蛋白相对表达水平(P<0.01)均极显著下降。(3)自噬因子Beclin1(P<0.05)和LC3(P<0.01)蛋白相对表达水平显著升高,p62相对表达显著下降(P<0.001)。综上,本研究发现自然感染JSRV羊肺组织中线粒体损伤严重并出现线粒体自噬现象,为JSRV的致病机制提供新的研究方向。
- 梁浚哲段续接杜晓悦张良李慧萍刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒线粒体损伤
- 自然感染绵羊肺腺瘤病毒病肺组织中凋亡相关因子的表达分析
- 2023年
- 绵羊肺腺瘤(ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是一种由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的慢性、接触传染性肺脏肿瘤疾病。为了探究细胞凋亡在OPA发展过程中的作用,本研究利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等方法检测了凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3及其对应的凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3在健康和自然感染JSRV绵羊肺组织中的表达情况。结果显示:与对照组相比,OPA肺组织中Bcl-2基因和蛋白表达量均显著上调,而Bax和Caspase-3基因和蛋白表达量均显著下调。此外,免疫组织化学显示,Bcl-2、Bax、Caspase-3主要表达于腺瘤灶内增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞中。结果表明,细胞凋亡在OPA肺组织中的活动受到抑制,提示绵羊肺腺瘤病毒可能通过调节细胞凋亡活动影响OPA的发生发展。
- 张良黄家荣孙志伟李慧萍刘淑英
- 关键词：绵羊绵羊肺腺瘤病毒BCL-2
