汪凯
- 作品数：11 被引量：39H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 新型鸡心包炎—包涵体肝炎病毒的分离及鉴定被引量：13
- 2016年
- 2015年在江苏省某养鸡场疑似心包炎-包涵体肝炎病死鸡肝脏中分离获得1株病毒,经SPF鸡胚4代纯化,并针对其hexon基因设计特异性引物进行PCR扩增,测序结果表明该分离株属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型,命名为JS7株。ORF29和fiber2基因测序分析表明,该毒株为最近在国内流行的新型突变株。JS7株以1000 ELD_(50)病毒量肌肉接种21日龄雏鸡,5 d内呈现80%死亡率,剖检可见典型的心包炎、肝炎症状,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管、法氏囊、脑、小肠、盲肠、腺胃、胸腺、胰脏中均能检测到病毒分布;H&E染色结果显示,在组织切片中,肝脏呈现典型的嗜碱性核染色,其他组织脏器也呈现不同程度的病理变化。可见JS7株在雏鸡中具有较强的致病性及广泛的组织嗜性。
- 汪凯蔡骁垚叶建强刘红梅张泉刘芹防李泽君陈鸿军
- 关键词：包涵体肝炎禽腺病毒
- 安徽地区2011年～2014年小鹅瘟的病毒分离及其流行情况被引量：6
- 2016年
- 为了解近年安徽地区小鹅瘟的流行情况，本研究对2011年-2014年安徽省11个地区的36份疑似小鹅瘟的，临床样品进行鹅胚接种、琼脂扩散试验和PCR检测，同时在分离的阳性株中选取10个分离株进行VP基因测序并绘制遗传进化树。结果共分离鉴定出31例鹅细小病毒（GPV）分离株，这些分离株几乎遍布安徽地区所有鹅的养殖品种，发生时间以春季为主，发病地区以中部和西部居多；遗传进化树分析表明GPV安徽分离株与国内大部分分离株属于同一分支，明显不同于国内疫苗株SYG61v和台湾疫苗株82—0321v，并且均属于强毒株。本研究数据显示GPV在安徽地区并未出现明显的变异。
- 王传钧汪凯韩梅杨志伟王浩王桂军祁克宗潘玲刘红梅
- 关键词：小鹅瘟病毒VP基因
- 不同禽源里氏杆菌分离鉴定及同源性比较被引量：1
- 2016年
- 对安徽部分地区疑似传染性浆膜炎的病鸭、鹅脑组织进行病原菌分离鉴定及病理学观察;经PCR鉴定,确定为鸭疫里氏杆菌。分别对5株分离菌的16S rRNA基因和Omp A基因进行核苷酸序列测定,同源性分析,构建系统进化树。结果表明：20株不同来源鸭疫里氏杆菌的16S rRNA基因和Omp A基因均分为2个群,安徽地区的5株分离株在不同群中的不同分支,同源性高达97.4%-100%。
- 刘茜汪凯卢凤英潘玲周杰刘红梅
- 关键词：鸭疫里氏杆菌RRNA基因同源性比较
- 禽大肠杆菌毒力岛主要摄铁基因及生物膜的检测被引量：1
- 2016年
- 以临床病禽分离17株E.coli为研究对象,分别检测分离菌株的毒力岛中irp2、irp3、irp4、irp5和生物膜形成能力。先用irp2 PCR扩增检出7株致病性大肠杆菌,并对其进行ERIC-PCR分型,结果分为2个类型。又对分离株进行irp3、irp4和irp5基因检测,结果分离株中irp2、irp3、irp4和irp5的阳性检出率分别为41.2%、64.7%、29.4%和35.3%;最后对分离株进行生物膜形成能力的检测,结果携带irp2的阳性菌株都有较强的生物膜形成能力。结果提示,禽致病性大肠杆菌的HPI中irp2与生物膜的形成有一定的关联。
- 汪凯王琦潘玲刘红梅周杰
- 关键词：致病性大肠杆菌ERIC-PCR生物膜
- 雁鹅小鹅瘟病毒的分离及其组织嗜性被引量：2
- 2016年
- 从安徽省某雁鹅养殖场疑似小鹅瘟死亡的雁鹅肝脏中分离获得1株病毒,经过电镜观察、琼脂扩散和PCR试验证实分离病毒株为小鹅瘟病毒(gosling plague virus,GPV),命名为Yan-2株。全基因组扩增与测序分析表明Yan-2株基因组为5 106bp;与省内番鸭源GPV Y株和大雁源GPV SHFX1201株的亲源关系最近,与国内疫苗株SYG61v以及国外B株的亲源关系较远。单抗免疫组化试验还发现,Yan-2株病毒主要分布于雁鹅的肝细胞、肠上皮细胞、神经细胞等细胞胞浆内。这些结果不仅表明雁鹅可以作为GPV的自然宿主,而且证明雁鹅的肝、肠和神经组织对GPV有明显的亲嗜性,为进一步研究GPV的宿主范围、致病机理打下了基础。
- 汪凯王传均王浩邵红霞潘玲祁克宗秦爱建刘红梅王桂军
- 关键词：雁鹅小鹅瘟病毒组织嗜性
- 鸡SP-A在293T细胞中的表达及免疫学检测
- 2016年
- 为表达鸡肺表面活性蛋白A(chicken palmonary surfactant protein A,c SP-A)基因,本研究扩增去除终止子的c SP-A,通过Nhe I和Apa I双酶切,连接进入真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(-)A中,构建获得重组载体pc SP-A;同时,将c SP-A和gfp基因按Nhe I-Bam H I和Bam H I-Apa I分别连接至pc DNA3.1/myc-His(-)A载体中,构建获得融合表达载体pc SP-A-GFP。通过脂质体法将这两类真核载体瞬时转染293T细胞,48 h后用4%多聚甲醛固定细胞,利用c SP-A特异性鼠多抗进行间接免疫荧光,于倒置荧光显微镜下观察c SP-A表达和亚细胞定位情况,然后收获细胞进行Western blot检测。结果发现,c SP-A在细胞质中表达,pc SP-A和pc SP-A-GFP融合蛋白的相对分子量分别约为30 k Da和55 k Da。上述研究结果为进一步研究c SP-A的功能奠定了基础。
- 黄琪汪凯涂健潘玲祁克宗李泽君陈鸿军刘红梅
- 关键词：真核表达
- Neddylation修饰与病毒感染调控研究进展
- 2018年
- Nedd8是一类结构上与泛素相似的分子,广泛参与蛋白质翻译后修饰,这一过程被称为Neddylation。Neddylation修饰已经被证实参与几乎所有细胞内的调控过程,并在病毒感染过程有着重要的调控作用,但对于其具体的调控机制研究还十分匮乏。深入开展Neddylation修饰与病毒感染之间的分子调控机制研究将有助于阐明病毒的致病机理。
- 孙海伟姚威汪凯陈鸿军
- 关键词：NEDDYLATION病毒感染
- 鸡肺表面活性蛋白A的可溶性表达及活性检测被引量：2
- 2015年
- 利用RT-PCR扩增鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)基因,将其连接pMD19-T Simple载体,经测序正确后,扩增成熟肽基因片段并酶切克隆入pCold-TF原核表达载体中,转化到感受态宿主菌BL21(DE3)中,加入不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃诱导表达24h,超声波裂解,通过His·Tag纯化试剂盒纯化,分别进行SDS-PAGE检测。结果扩增得到615bp的成熟肽基因片段;SP-A蛋白获得可溶性表达,融合蛋白的大小为80ku。Western-blot结果显示,该蛋白可被特异性多克隆抗体识别。抑菌试验结果显示,与纯化的天然cSP-A蛋白不同,cSP-A原核表达产物并不具备抑菌活性。
- 黄琪汪凯潘玲祁克宗李泽君陈鸿军刘红梅
- 关键词：原核表达可溶性表达活性检测
- 基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立被引量：8
- 2019年
- 为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。
- 梅楠孙海伟孙海伟汪凯汪凯王桂军
- 关键词：原核表达间接ELISA
- 血清4型鸡腺病毒AHHN分离株全基因组测序及其致病性研究被引量：7
- 2019年
- 为明确一株I群C亚群鸡腺病毒血清4型(FAdV-4)AHHN分离株基因组特征及其致病性,本研究对该病毒的全基因组序列进行测定,结果显示:AHHN分离株的基因组全长为43723bp,G+C含量为54.87%,ORF29序列具有FAdV-4变异株29aa缺失的特征。0.1mL/羽(1×10^5TCID50)病毒量肌肉注射3周龄SPF鸡2d后,感染鸡出现急性感染症状,5d内全部死亡;剖检可见其肝脏变黄,表面大量出血灶,伴有心包积液、胸腺萎缩、法氏囊萎缩等眼观病变;病理组织学观察显示,感染鸡肝脏呈现典型的嗜碱性包涵体肝炎病变;病毒载量测定结果显示,各脏器均有不同程度的病毒复制。上述结果表明,FAdV-4AHHN分离株对鸡具有高致病性及广泛的组织嗜性。本研究为进一步研究FAdV-4功能基因对病毒毒力的影响奠定了基础。
- 李允章梅楠汪凯汪凯杨志伟刘红梅王桂军
- 关键词：鸡腺病毒全基因组
