纪淑芳
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 骨形态发生蛋白4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用。方法取出生3d的雌性昆明小鼠卵巢,采用两步酶消化法,分离纯化卵母细胞,进行原代培养。将卵母细胞分为3组:正常对照组(Con组)、添加重组人BMP4组(BMP4组)、添加BMP4和BMP4抑制剂6-{4-[2-(1-呱啶基)乙氧基]苯基}-3-(4-吡啶基)吡唑并(1,5-A)嘧啶(dorsomorphin)组(BMP4+抑制剂组)。采用TUNEL法,检测BMP4对卵母细胞凋亡的影响;采用免疫组织化学染色与实时定量PCR,检测BMP4对卵母细胞中p-Smad1/5/8、sohlh2、ckit及foxo3a表达的影响。采用RNA干扰技术、转染sohlh2质粒和LY294002处理,探讨BMP4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控机制。结果 TUNEL结果显示,BMP4组凋亡卵母细胞比例明显低于Con组(P<0.05)和BMP4+抑制剂组(P<0.05);加入BMP4可明显促进细胞Smad入核,上调sohlh2和c-kit表达,抑制foxo3a入核;转染sohlh2 siRNA后,可明显阻断BMP4抑制卵母细胞凋亡的作用;转染sohlh2质粒后,p-foxo3a表达量显著增加,LY294002可明显抑制sohlh2促进foxo3a磷酸化的作用。结论激活BMP4/Smad信号通路可抑制小鼠原始卵泡卵母细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调sohlh2和c-kit基因表达,进而调控foxo3a入核而实现的。
- 张海玉张晓丽纪淑芳邴鲁军郝晶
- 关键词：骨形态发生蛋白4SMAD信号通路卵母细胞原位缺口末端标记小鼠
- 脂多糖所致小鼠睾丸支持细胞GDNF表达减少对精原干细胞的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨脂多糖(LPS)处理后的小鼠睾丸支持细胞(SCs)中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的变化及该变化对精原干细胞(SSCs)的影响。方法取5～6周龄昆明小白鼠睾丸组织,分离纯化并培养SCs,将其分为4组:正常对照组(Con组),添加LPS处理1 d组(1 d组)、2 d组(2 d组)和3 d组(3d组),收集4组培养液作为条件培养液,采用RT-PCR和Western blot检测各组SCs GDNF表达的变化;取5～7 d龄昆明小乳鼠睾丸组织,筛选SSCs后分为4组:Con组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,分别用前面的4组培养液培养96 h。通过免疫荧光染色和RT-PCR检测细胞中PLZF、oct4、PCNA和c-kit、sohlh2的表达变化,并通过RT-PCR检测SSCs中Gfrα1、c-ret和Bcl6b、Etv5的表达变化。结果 RT-PCR与Western blot结果显示,SCs GDNF表达按Con、1 d、2 d、3 d组的顺序降低;RT-PCR和免疫荧光染色结果显示,SSCs PLZF、oct4和PCNA的表达按Con、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组顺序降低,而c-kit和sohlh2的表达按Con组、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组顺序升高;SSCs中Gfrα1、c-ret、Bcl6b与Etv5的表达Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组均低于Con组。结论 LPS处理导致小鼠SCs GDNF表达减少,该变化可使SSCs分化加速而其自我更新受到抑制,其机制可能与Bcl6b和Etv5的表达下调有关。
- 史琨张晓丽张海玉纪淑芳郝晶
- 关键词：脂多糖睾丸支持细胞胶质细胞源性神经营养因子精原干细胞
