董佳慧
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人源α-烯醇化酶B细胞表位鉴定及其与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应预测被引量：5
- 2015年
- 目的:预测鉴定人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,探讨人源α-烯醇化酶与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶之间的交叉反应性。方法:以人源α-烯醇化酶蛋白序列为基础,综合应用多个软件预测B细胞线性表位;再以人源α-烯醇化酶的蛋白晶体结构为基础,采用4个生物信息学软件综合预测B细胞构象表位;利用原核表达系统对人源α-烯醇化酶蛋白进行表达、亲和层析法进行,纯化抗原免疫BALB/c小鼠,化学合成预测的线性表位片段检测抗体反应,确定人源α-烯醇化酶蛋白B细胞表位。利用Clustal X进行蛋白质序列比对和Swiss-Model进行同源模建,研究人源α-烯醇化酶和牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应性。结果:人源α-烯醇化酶线性B细胞表位优势区域为9-25aa,28-43aa,70-85aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;构象性B细胞表位优势区域为:1-4/24-30/77-86/124aa,9-16/51-59aa,250-254/262-268/271-274aa;合成的线性表位片段中9-25aa免疫应答反应最强烈,其次是70-85aa,再次为28-43aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶氨基酸序列同源性高达50.11%,两者在线性B细胞表位优势区域的9-24aa和32-42aa序列高度相似;空间构象比对结果显示牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶之间的RMSD值为1.055,且两者在3个构象性B细胞表位优势区域的空间构象高度相似,推测二者可能在上述区域发生交叉反应。结论:预测并鉴定了人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,比较其与牙龈卟啉单胞菌的烯醇化酶可能发生交叉反应的位点,为研究人源α-烯醇化酶蛋白的自身抗原性和类风湿性关节炎发病机制提供了理论基础。
- 揭瑞董佳慧韩冬王瑞玲韩魏巍杜戎耿辉
- 关键词：抗原表位
- 抗人软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体的研制及表位鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的:为了揭示循环血液中存在的软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途径及机制,需制备高效、专一的识别COMP不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达系统对人COMP进行了一系列的表达、并用亲和层析法结合离子交换层析法进行纯化。纯化的COMP为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术结合有限稀释传代法筛选得到稳定分泌抗人COMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用COMP单结构域片段结合生物信息学方法分析鉴定单克隆抗体结合表位。用不同种属来源的COMP分析单克隆抗体结合表位的保守性。结果:COMP及单结构域片段为分泌到细胞外的可溶性分子利于蛋白的纯化,筛选获得4株稳定分泌抗人COMP单克隆抗体细胞株,4株单克隆抗体的亚型为IgG1,经COMP单结构域片段检测证明4株单克隆抗体识别不同的表位,表位预测软件初步确定4株单克隆抗体识别表位所在区域,间接ELISA及免疫组化证实其中3株单克隆抗体与不同种属来源的COMP有较好的结合特性。结论:成功制备了4株识别不同表位的抗COMP单克隆抗体,为揭示血液中存在的COMP片段和进一步研究COMP逃避自身免疫耐受机理提供了研究工具。
- 董佳慧揭瑞余金辉韩冬王瑞玲邓灵福熊丽刘德立耿辉
- 关键词：软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体表位类风湿性关节炎
