褚仲梅
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Pyrococcus furiosus小分子热休克蛋白Pfu-sHSP的克隆表达和纯化
- 2009年
- 用PCR扩增嗜高温菌Pyrococcus furiosus的小分子热休克蛋白基因后,克隆于质粒pT7473中.该小分子热休克蛋白Pfu-sHSP含有较多的稀有密码子,在大肠杆菌BL21(DE)3几乎无表达,而在带有大肠杆菌稀有密码子AGA(arg)AGG(arg),AUA(ile)和CUA(leu)的BL21—Codonplus(DE)3—RIL中能大量表达.大量表达Pfu-sHSP蛋白的细胞用超声波破碎后,离心沉淀用85℃水浴20 min,再离心,上清液再以Q Sepha-rose Fast Flow阴离子交换和S-200凝胶过滤层析进一步纯化,可以得到90%以上的蛋白.
- 陈华友谭小力张志燕褚仲梅
- 关键词：小分子热休克蛋白PYROCOCCUS分子伴侣
- Pyrococcus furiosus耐热淀粉酶工程菌的构建及直链麦芽寡糖的制备被引量：1
- 2013年
- 为了制备特定长度的直链麦芽寡糖,利用PCR方法得到了极端耐热古生菌激烈热球菌Pytococcus furiosus的耐热淀粉酶基因pfta,对其进行序列分析表明,其编码区含有1938 bp,编码含645个氨基酸残基的蛋白质。将该基因系列与表达载体pT7473连接,构建重组质粒pT7473-pfta,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主表达。重组菌株经诱导表达后SDS-PAGE电泳结果显示有明显的分子量约76 kD的特异蛋白条带出现。表达的蛋白经过金属镍离子亲和层析纯化后电泳鉴定出现的条带与预期相符。以环糊精为原料,利用获取的PFTA的单点水解开环反应活性,在90℃、pH5.0、10 min的条件下,能够生产出特定长度的直链麦芽寡糖。
- 凡建刚褚仲梅张毅
- 关键词：PYROCOCCUS淀粉酶环糊精
- 一种促进靛蓝生物合成转化产量的方法
- 本发明涉及一种促进靛蓝生物合成转化产量的方法。本发明首次揭示将Prefoldin蛋白与细胞色素P450酶在细胞内共表达，Prefoldin蛋白能够极为显著地促进以吲哚为底物、以细胞色素P450催化的靛蓝的生物合成,为靛蓝...
- 张毅彭帅英褚仲梅
- 链球菌蛋白G的构建、重组表达及鉴定被引量：2
- 2012年
- 化学合成链球菌蛋白G的C3D基因片段,通过分子生物学的方法对蛋白G(proteinG)的C3片段进行PCR扩增,拼接形成含有两个和三个重复C3片段的重组链球菌蛋白G,C3片段间以链接区D连接,即形成C3DC3和C3DC3DC3的形式,进而克隆到质粒pET21中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。重组表达的蛋白经过DEAE-Sepharose和IgG-Sepharose纯化,得到纯化的重组蛋白。采用非竞争性酶免疫法对重组蛋白与不同来源IgG的结合常数进行测定,实验结果显示两种重组链球菌蛋白G均可有效地与小鼠、兔及山羊等多种不同来源抗体特异性结合。这些实验结果为下一步研究奠定了基础。
- 安明岩褚仲梅张毅
- 关键词：PROTEIN纯化
- 共表达极端菌伴侣蛋白prefoldin提高P450 BM3突变体催化效率（英文）
- 2017年
- P450 BM3来源于巨大芽孢杆菌,其突变体(A74G、F87V、L188Q、D168H)能够在大肠杆菌细胞内催化吲哚合成靛蓝.然而在常规的培养条件下(37℃,250 r/min),大肠杆菌细胞内靛蓝的生物转化量极低.本文将极端嗜热古菌Pyrococcus furiosus的分子伴侣蛋白与P450 BM3突变体在大肠杆菌进行共表达,以研究分子伴侣蛋白是否能够提高靛蓝的生物转化量.实验结果表明,极端嗜热古菌的分子伴侣蛋白prefoldin能够显著提高靛蓝的产量.同时,实验结果发现prefoldin能够明显提高大肠杆菌细胞内的NADPH/NADP^+比率.鉴于NADPH是参与靛蓝生物转化过程的重要因素,靛蓝生物转化量的显著增加可能与该比率的提高有关.
- 彭帅英褚仲梅陆坚峰陆坚峰王永红杨胜利李东晓
- 关键词：细胞色素P450靛蓝PREFOLDINPYROCOCCUS
