郝凤霞
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 新疆艾比湖中度嗜盐菌A6的16SrDNA分析被引量：5
- 2007年
- 从新疆艾比湖分离得到中度嗜盐菌A6,该菌能够在0%~20%NaCl的条件下生长,为有芽孢的杆状菌。采用真细菌16SrDNA通用引物PCR扩增A6菌株的16SrDNA,得到的片段长度为1512bp。使用NCBI^Blast软件在Gen-bank数据库中对其进行同源性检索,A6的16SrDNA序列与多种地衣芽孢杆菌16SrDNA序列同源性高达99%。使用MEGA3.1软件构建系统发育树,A6菌株与地衣芽孢杆菌的亲缘关系最近。由此判断A6菌株属于芽胞杆菌属。结合生理生化分析及对A6菌株的甜菜碱醛脱氢酶基因和Ⅲ型乙醇脱氢酶基因的序列同源性分析,初步确定A6菌株有可能是地衣芽胞杆菌的1个新种。
- 胡文革赵建朋康壮丽郝凤霞
- 关键词：同源性分析系统发育
- 抗冻蛋白AFPⅢ的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2009年
- 采用基因重组技术将AFPⅢ基因与原核表达载体pET32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过PCR、单双酶切及测序鉴定构建结果。用IPTG诱导蛋白表达,将融合蛋白纯化后,免疫6-7周龄的小白鼠,制备AFPⅢ多克隆抗体,采用Western印迹法检验抗体特异性。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定多克隆抗体滴度。成功地构建了AFPⅢ的原核表达载体,经在大肠杆菌中诱导表达、镍柱亲和层析纯化,得到较纯的相对分子质量约26 000 Da的融合蛋白,免疫小白鼠后得到多抗血清,Western印迹结果显示此多克隆抗体与AFPⅢ蛋白特异性结合。该试验为进一步研究AFPⅢ在转基因鱼中的定点表达以及作用机制奠定了基础。
- 郝凤霞胡文革付伟超康庄丽张桂玲
- 关键词：抗冻蛋白原核表达重组融合蛋白纯化抗体
- 中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05α-淀粉酶基因的克隆和原核表达被引量：4
- 2009年
- 本实验室从新疆盐湖分离得到一株产α-淀粉酶中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05,根据已报道的α-淀粉酶基因(α-AMY)序列的保守区域设计引物,从中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05基因组中扩增出α-淀粉酶基因片段,将α-淀粉酶基因纯化后克隆到pGM-T载体上测序,结果表明α-淀粉酶基因片段长约1500bp,与地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的α-淀粉酶基因序列的同源性为95%,两种序列具有一定的同源性。按正确的阅读框架将α-淀粉酶基因片段定向克隆到表达载体pET-32a上,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,α-淀粉酶基因能在大肠杆菌BL21中成功表达,确定表达蛋白的相对分子量为61kD左右,与理论推导的分子量相一致;构建的大肠杆菌工程菌,所产生的α-淀粉酶是包涵体,通过超声波粉碎仪粉碎后,测α-淀粉酶酶活为原菌的1.8倍。
- 康壮丽郝凤霞胡文革赵建朋
- 关键词：中度嗜盐菌Α-淀粉酶克隆
- 中度嗜盐菌产α-淀粉酶发酵条件优化和酶活性质研究被引量：4
- 2009年
- 实验室从新疆盐湖分离得到1株产α-淀粉酶中度嗜盐菌Bacillus sp．XJ1-05，对该菌株进行发酵条件优化和酶活性质研究，发现该菌株适宜的液态发酵工艺条件为：培养基碳源为酵母浸粉，氮源为大豆分离蛋白，两者比例1：1，培养温度33％，发酵时间72h，初始pH值7．0。最大酶活为98U，最佳反应温度为75℃，pH值为6．0-9．0。
- 康壮丽郝凤霞胡文革赵建朋
- 关键词：中度嗜盐菌Α-淀粉酶发酵条件酶活性
- Bacillus sp.XJ1-05菌株GbsA基因的克隆及其生物信息学分析被引量：2
- 2008年
- 根据地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformisATCC 14580的GbsA基因(GeneID:3027576)的核甘酸序列设计1对特异性引物。通过PCR的方法扩增由本实验室分离的中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05的GbsA基因,经T/A克隆,插入到pBS-T载体上进行序列测序,结果表明得到的GbsA基因的开放阅读框(ORF)全长为1473bp。在Genbank数据库中进行同源性检索,结果表明:其与Bacillus licheniformisATCC 14580的GbsA基因的氨基酸序列同源性高达97%。生物信息学分析表明:该GbsA基因编码蛋白无信号肽,无跨膜区域,高亲水性,有2个醛脱氢酶作用位点。
- 赵建朋顾立军胡文革康壮丽郝凤霞
- 关键词：中度嗜盐菌甜菜碱醛脱氢酶基因克隆生物信息学分析
- 准噶尔雅罗鱼β-肌动蛋白基因启动子克隆及序列分析被引量：2
- 2010年
- 利用PCR方法克隆了准噶尔雅罗鱼(Leuciscus merzbacheri)的β-actin基因启动子片段SZ21,大小是2398bp。对克隆的启动子序列进行了转录调控元件的生物信息学预测分析,同时,基于启动子中包含的开放阅读框和内含子序列,探讨了准噶尔雅罗鱼与鲤鱼(Cyprinus carpio)、草鱼(Ctenopharyngodon idella)、青鱼(Mylopharyngodon piceus)、团头鲂(Megalobrama amblycephala)、泥鳅(Misgurnus mizolepis)间的系统进化关系。结果显示,该启动子序列的3个核心启动子转录元件:CAAT-box、CArGmotif和TATA-box分别在转录起始位点(+1)上游的-89、-59、-26处,序列中还含有MEF2、SATB、CHRF、INRE、MTEN、E-box、RU49、ZBPF、CREB、Enhance region、CEBP位点等多种转录调控元件。在剪接体内含子中,剪接位点遵循GT…AG法则。启动子SZ21序列含有3个内含子和155个氨基酸。内含子1、内含子2、内含子3的系统发育分析表明,团头鲂与草鱼和青鱼的亲缘关系要比与准噶尔雅罗鱼的更近一些,这与传统分类中的亲缘关系显示不一致,其原因尚需探讨。
- 胡文革陈创夫王远志郝凤霞曹旭东盛金良
- 关键词：准噶尔雅罗鱼转录调控元件内含子系统发育
- 准噶尔雅罗鱼β-肌动蛋白基因启动子的克隆及其活性功能初步检测被引量：2
- 2009年
- 以开发利用新疆濒危鱼类准噶尔雅罗鱼(Leuciscus merzbacheri)基因资源为研究目的,利用PCR技术克隆准噶尔雅罗鱼的β-actin基因,得到的β-actin基因片段SZ21包含启动调控区,大小为2398bp。SZ21的启动调控区包括β-actin基因上游调控序列、第1、第2、第3和第4外显子部分序列。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT框、TATA框和CArG框等元件。对启动子序列在线分析表明,获得的启动子含有E-box、RU49、ZBPF、CEBP、CREB等多个重要转录因子结合位点。用AatⅡ破坏真核表达载体pEGFP-N1-AFPⅢ中的CMV启动子,将准噶尔雅罗鱼的SZ21启动调控区克隆到载体pEGFP-N1-AFPⅢ(CMV坏)上,构建成重组表达载体β2pEGFP-N1-AFPⅢ。脂质体转染BHK-21细胞。结果表明,克隆的准噶尔雅罗鱼β-actin基因启动子SZ21具有启动EGFP报告基因在哺乳动物细胞中表达的活性。通过BHK-21绿色荧光细胞的传代证实,克隆的启动子具有持续启动蛋白基因表达的活性,在细胞传代中可以遗传。PCR检测传代的BHK-21绿色荧光细胞基因组DNA,均能检测到SZ21目的片段。文章成功分离了具有活性功能的准噶尔雅罗鱼β-actin基因启动子。
- 胡文革郝凤霞陈创夫王远志任艳
- 关键词：准噶尔雅罗鱼脂质体转染BHK-21细胞
- 中度嗜盐菌GbsB基因的克隆、序列分析及生物信息学分析
- 2008年
- 为构建耐盐的转基因植物提供材料,根据地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformisATCC 14580的GbsB基因的核甘酸序列设计1对特异性引物,通过PCR的方法扩增由分离的中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05的GbsB基因,经T/A克隆,插入到pBS-T载体上进行序列测序,采用NCBI-BlastX软件在Genbank数据库中进行同源性检索,结果表明:得到的GbsB基因的开放阅读框(ORF)全长为1209bp,编码1个由402个氨基酸残基组成的蛋白质;其与Bacillus licheni-formisATCC 14580的GbsB基因的氨基酸序列同源性高达96%。生物信息学分析表明:该GbsB基因编码蛋白无信号肽,无跨膜区域,高亲水性,有2个乙醇脱氢酶作用位点。
- 赵建朋康壮丽郝凤霞胡文革
- 关键词：中度嗜盐菌乙醇脱氢酶基因克隆
- 鱼源Ⅲ型抗冻蛋白的生物学活性
- 2009年
- 为了通过细菌低温保护实验测定鱼源Ⅲ型抗冻蛋白(AFPⅢ)对大肠杆菌的低温保护效果,利用前期构建的原核表达质粒pET32a(+)-AFPⅢ转化大肠杆菌,目的蛋白以融合his标签的形式在大肠杆菌中表达,经NI柱亲和层析得到较高纯度的AFPⅢ-his融合蛋白。细菌抗冻实验的结果表明,外加一定浓度范围内的纯化的AFPⅢ融合蛋白对细菌有明显保护作用,但是抗冻蛋白的浓度对细菌的保护力不成一致的线性关系。鱼源Ⅲ型抗冻蛋白的浓度在50μg/mL时抗冻效果最好,并且随着温度的下降,抗冻蛋白对细菌的保护能力与Glycerol对细菌的保护能力的差距逐渐减少,在-80℃时基本可以代替甘油用于菌种保存。
- 郝凤霞胡文革康壮丽付伟超陈创夫
- 关键词：抗冻蛋白菌落计数
