郭政
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：石河子大学医学院更多>>
- 发文基金：新疆生产建设兵团博士基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 毕赤酵母表达人Neuritin蛋白的条件优化、纯化及鉴定被引量：4
- 2008年
- 对毕赤酵母表达重组Neuritin蛋白的产物进行了纯化和鉴定,并进行了细胞毒性的量效关系的研究,为进一步应用于动物模型的实验研究奠定基础。应用甲醇诱导毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-rhNeuritin表达Neuritin蛋白,对甲醇诱导的浓度和时间进行了优化。表达产物经Ni-NAT纯化和透析浓缩,进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定,将纯化产物用于体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,对Neuritin蛋白与细胞存活的量效关系进行了研究。条件优化的结果显示,1%甲醇浓度诱导表达96h时,Neuritin蛋白表达量最大,可达0.48mg/mL。SDS-PAGE确定了表达产物分子量的大小,约为11kda;Western-blot证实表达产物为Neuritin;进一步的细胞毒性实验显示,纯化后的Neu-ritin蛋白在2.5μg/mL的浓度比较适合细胞生存。毕赤酵母高效分泌性表达了人Neuritin蛋白,经过镍柱亲和层析得到了有效的纯化,其发挥生物学作用的蛋白浓度为2.5μg/mL。
- 李新丽郭二兵于娜罗星郭政崔丽娟杨磊郑志红黄瑾
- 关键词：毕赤酵母NEURITIN纯化鉴定
