柴梦音
- 作品数：11 被引量：32H指数：3
- 供职机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金首都卫生发展科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ASPP2重组腺病毒通过调控NF-κB信号通路抑制DEN诱导的小鼠肝细胞癌发生
- 2024年
- 目的研究ASPP2重组腺病毒(ASPP2-ad)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠肝细胞癌(HCC)发生的抑制作用及其可能的作用机制。方法采用DEN腹腔注射联合0.005%DEN饮水方法构建小鼠HCC模型。将动物分为DEN处理组和DEN-ASPP2-ad处理组,每组10只。使用小动物超声成像系统动态观察小鼠HCC形成情况,大体记数肝脏肿瘤数量,采用免疫组化法检测肿瘤组织Ki67表达,采用流式多重蛋白定量技术检测小鼠血清IL-1β、IL-6、KC、IL-2和TNFα水平,采用Western blot法检测组织AFP、caspase3、cyclinD1、PCNA、p-IKK、IKK、p-IκB、IκB、p-p65和p65蛋白表达,采用实时定量PCR法检测Nfatc1 mRNA水平。结果DEN诱导24周后,DEN组小鼠肝脏肿瘤数为(9.9±1.9)个,显著多于DEN联合ASPP2-ad组[(3.9±1.2)个,P<0.05];DEN组小鼠Ki67阳性细胞数为(91.4±9.1)个,显著多于DEN联合ASPP2-ad组[(56.6±10.5)个,P<0.05];在实验40周末,DEN组小鼠生存率为65.2%,显著低于DEN联合ASPP2-ad组的90.0%(P<0.05);DEN组小鼠血清ALT和AST水平分别为(271.5±143.8)U/L和(299.3±221.4)U/L,均显著高于DEN-ASPP2-ad干预组[分别为(101.7±44.6)U/L和(124.1±75.0)U/L,P<0.05];DEN联合ASPP2-ad组血清IL-6和TNFα水平分别为(8.1±1.6)MFI和(8.1±1.0)MFI,均显著低于DEN组[分别为(16.3±0.4)MFI和(26.3±5.3)MFI,P<0.05];DEN/ASPP2-ad处理组AFP、Cyclin D1和PCNA表达减弱,而caspase-3表达增强,NF-κB信号通路蛋白(p-IKK、p-IκB和p-p65)表达减弱,p-IKK/IKKα、p-IκB/IκB和p-p65/p65比值也降低,NF-κB下游癌基因Nfatc1表达减弱(P<0.05)。结论ASPP2-ad可能通过调控NF-κB通路显著抑制DEN诱导的炎性增殖反应,阻抑HCC的发生,值得深入研究。
- 高明慧柴梦音寇卜心豆双双刘晓霓
- 关键词：二乙基亚硝胺核因子ΚB小鼠
- p53基因敲除小鼠生长发育和繁殖性能的调查
- 2013年
- 目的观察p53基因敲除小鼠与BALB/c小鼠在生长发育和繁殖性能方面的差异。方法 p53基因敲除小鼠和BALB/c小鼠各34只,雌雄各半,观察其2周龄至12周龄的体质量和体长,并随机选取30笼一雌一雄所产第2胎仔鼠进行幼仔个数的统计。结果在生长发育方面,3周龄时p53基因敲除小鼠与BALB/c小鼠体质量无明显差异,P=0.846>0.05;6周龄时p53基因敲除小鼠体质量明显低于BALB/c小鼠,P=0.000<0.05;体长在3周龄和6周龄时p53基因敲除小鼠体长明显低于BALB/c小鼠,P=0.000<0.05。在繁殖性能方面,p53基因敲除小鼠同样明显低于BALB/c小鼠,P=0.000<0.05。结论初步研究了p53基因敲除对小鼠的繁殖与发育的影响,与BALB/c小鼠比较均有显著差异。
- 徐萌柴梦音绳波陈德喜
- 关键词：生长发育繁殖性能
- shASPP2 H22稳转肝癌细胞系的构建及ASPP2敲低对H22移植瘤小鼠血管生成的影响
- 2024年
- 目的:构建小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系,观察ASPP2敲低对血管生成的影响。方法:针对小鼠ASPP2基因设计了3个不同的shRNA干扰序列(Y18421,Y18422,Y18423)及1个对照序列(GL427NC2),采用双酶切(AgeⅠ和EcoRⅠ)及质粒连接构建重组质粒,使用菌落PCR和测序比对进行鉴定;使用293T细胞将各重组质粒包装慢病毒并测定滴度;将shASPP2和对照慢病毒质粒转染H22细胞,采用流式细胞术测定转染效率;采用qRT-PCR、Western Blot法观察shASPP2慢病毒对H22细胞ASPP2的干扰效果;采用CCK8法观察ASPP2敲低对H22细胞增殖的影响;采用Western Blot法观察ASPP2敲低对H22细胞及上清VEGF表达和分泌的影响;采用细胞注射法建立小鼠ASPP2敲低H22细胞皮下移植瘤模型,游标卡尺法观察肿瘤体积大小,采用活体激光共聚焦观察肿瘤血管生成情况,采用Western Blot法观察肿瘤组织VEGF的表达。结果:双酶切、菌落PCR和测序鉴定结果表示各重组质粒构建成功;各重组质粒经慢病毒包装后,测定显示Y18421、Y18422、Y18423和GL427NC2慢病毒质粒的滴度分别为3.40×10^(8)TU/mL、4.08×10^(8)TU/mL、5.49×10^(8)TU/mL和1.7×10^(9)TU/mL;Y18421、Y18422、Y18423及GL427NC2慢病毒质粒转染效率分别为:86.2%、69.6%、60.8%和76.9%。与GL427NC2 H22细胞相比,Y18421 H22细胞的ASPP2 mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.01,P<0.05);Y18421细胞在培养24,48,72 h后增殖速率显著增加(P<0.0001,P<0.001,P<0.01);Y18421细胞及上清的VEGF表达显著升高(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。与GL427NC2细胞移植瘤相比,Y18421细胞移植瘤体积明显增大(P<0.05),总血管长度显著增加(P<0.05),VEGF蛋白的表达明显上调(P<0.05)。结论:小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系构建成功,ASPP2敲低可能通过上调VEGF的表达促进小鼠H22细胞移植瘤血管生成。
- 高明慧霍云飞寇卜心柴梦音李全维豆双双庞丽君刘晓霓
- 关键词：H22细胞血管生成
- p53基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定被引量：11
- 2012年
- 目的为了繁育和鉴定p53基因敲除小鼠,将引进的杂合子小鼠进行饲养繁殖,杂合子用于继续保种。方法对其幼鼠剪尾提取基因组DNA,采用PCR方法进行基因型鉴定。结果对引进小鼠已成功饲养和繁殖,并得到纯合基因缺失型小鼠。结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对于基因敲除小鼠的获得和保种具有重要的意义。
- 乔录新徐萌柴梦音乔欣陈德喜
- 关键词：P53基因敲除小鼠PCR
- 体外靶向TP53BP2基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定被引量：1
- 2023年
- 目的 本研究旨在构建靶向肿瘤蛋白p53结合蛋白2(TP53BP2)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,以抑制肝癌细胞TP53BP2的表达。方法 设计了2对针对TP53BP2基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列。shRNA退火形成双链oligo序列后,应用基因重组技术构建重组质粒,经菌落PCR和测序鉴定,将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定,并采用Western Blot、qRT-PCR和激光共聚焦技术观察慢病毒Lenti-shTP53BP2对HepG2细胞TP53BP2基因的干扰效果。结果 测序比对结果显示,各重组慢病毒载体与设计参考序列一致,提示各重组慢病毒体构建成功;重组慢病毒载体经慢病毒包装后,显示pHS-ASR-LW429、pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513的滴度分别为9.7×108TU/mL、6.1×108TU/mL和6.4×108TU/mL;用慢病毒Lenti-shTP53BP2(pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513)感染HepG2细胞后,与对照慢病毒(pHS-ASR-LW429)比,经Western Blot、qRT-PCR和激光共聚焦结果显示两个Lenti-shTP53BP2均能显著下调HepG2细胞TP53BP2基因水平和蛋白表达量。结论 本研究成功构建了靶向TP53BP2基因shRNA慢病毒载体,其能有效下调HepG2细胞TP53BP2的表达,为进一步研究TP53BP2在肝癌发生发展过程中的机制研究奠定了基础。
- 霍云飞寇卜心柴梦音豆双双高明慧石英刘晓霓
- 关键词：HEPG2细胞短发夹RNA慢病毒体外
- 黄芪超微粉对环磷酰胺致免疫失衡小鼠免疫功能的影响被引量：8
- 2022年
- 目的:观察黄芪超微粉对环磷酰胺免疫失衡小鼠免疫功能的影响。方法:将5~6周龄昆明种小鼠60只随机分为对照组、模型组、黄芪饮片组(HQY,10g/kg)、黄芪超微粉高剂量组(HQFH,10g/kg)、黄芪超微粉中剂量组(HQFM,2g/kg)、黄芪超微粉低剂量组(HQFL,0.4g/kg),每组10只,雌雄各半。模型组和各药物治疗组小鼠采用80mg/kg环磷酰胺腹腔注射建立小鼠免疫失衡模型,连续注射4天,然后每周强化1次,共强化2次,各药物治疗组小鼠于环磷酰胺腹腔注射当日开始灌胃给药,所有小鼠于末次强化后第1天取材,进行指标检测。采用器官重量法测胸腺指数和脾指数;采用MTT法测脾淋巴细胞增殖能力;采用Elisa法测量脾细胞上清IL-2和INF-γ细胞因子含量;采用流式细胞仪检测外周血和脾脏免疫细胞分群。结果:与对照组比较,模型组小鼠的胸腺指数明显降低(P<0.05),脾指数增高(P<0.05),脾细胞刺激指数降低(P<0.05),脾细胞细胞因子含量降低(P<0.05),外周血和脾脏CD3^(+)细胞增多(P<0.05),CD19^(+)、CD314^(+)细胞减少(P<0.05);与环磷酰胺组比较,黄芪饮片及黄芪超微粉各剂量组小鼠的胸腺指数明显升高(P<0.05),脾指数降低(P<0.05),脾细胞刺激指数升高(P<0.05),脾细胞细胞因子含量增高(P<0.05),外周血和脾脏CD3^(+)细胞减少(P<0.05),CD19^(+)、CD314^(+)细胞升高(P<0.05)。结论:黄芪超微粉可以对抗环磷酰胺所致小鼠的免疫失衡,调节小鼠免疫功能。
- 寇卜心柴梦音柴梦音刘晓霓
- 关键词：免疫功能中药超微粉环磷酰胺
- 超声造影观察小鼠两种皮下移植瘤的血管生成被引量：2
- 2020年
- 目的应用高频小动物超声观察人BT-B膀胱癌和人Huh7肝癌两种皮下移植瘤的血管生成情况,探讨超声造影评价肿瘤血管生成情况的价值。方法采用皮下注射建立人BT-B膀胱癌和人Huh7肝癌两种皮下移植瘤模型,采用高频小动物超声成像系统的多种超声模式观察两种肿瘤内部结构和血管特性;采用探头式活体激光共聚焦观察肿瘤的小血管数量和大小;采用免疫组化法观察肿瘤的血管标志物CD31表达,计算微血管密度。结果两组裸鼠均成功荷瘤。B超模式显示Huh7与BT-B皮下瘤均为不均质低回声结节;彩色多普勒模式及频谱多普勒模式显示BT-B皮下瘤血流信号和血流速度多于Huh7皮下瘤;超声造影显示Huh7肝癌组血管分布紊乱,BT-B膀胱癌组血管分布呈“分支状”,与探头式活体激光共聚焦结果及病理结果一致。超声造影参数峰值强度(PI)与MVD呈正相关(r=0.844,P<0.05)。结论超声造影可以更好地显示肿瘤血管的分布情况,且PI与病理MVD呈正相关,可提示肿瘤血管的增殖情况,可以作为无创评价肿瘤血管生成的可靠方法。
- 李爱静林雪君尹玲寇卜心柴梦音柴梦音刘晓霓陈德喜
- 关键词：裸鼠皮下移植瘤超声微泡肿瘤血管
- 黄芪超微粉抗急性肝损伤、抗疲劳作用及黄芪甲苷含量的变化被引量：6
- 2022年
- 目的观察黄芪超微粉的抗急性肝损伤、抗疲劳作用及黄芪甲苷含量的变化,为黄芪超微粉的应用提供科学依据。方法采用低温超微粉碎技术将黄芪饮片粉碎成超微粉,利用显微镜和激光粒度仪观察其显微表征和粒度表征,采用高效液相法检测黄芪饮片和黄芪超微粉中黄芪甲苷的含量。取昆明种小鼠,随机分为对照组(Con)、模型组(M)、黄芪饮片组(HQY,10 g·kg^(-1))、黄芪超微粉高剂量组(HQFH,10 g·kg^(-1))、黄芪超微粉中剂量组(HQFM,2 g·kg^(-1))、黄芪超微粉低剂量组(HQFL,0.4 g·kg^(-1))。除对照组和模型组,各药物组提前给药7 d,对照组给予相同体积生理盐水。末次给药后,模型组和各药物组腹腔注射0.1%四氯化碳(CCl 4)橄榄油10 mL·kg^(-1),18 h后眼眶采血,分离血浆,检测AST、ALT;取部分肝组织观察组织病理学改变。另取昆明种小鼠,分组与给药同前,末次给药后,按照体重10%负重,将小鼠置入水中游泳(25℃),并开始计时。当小鼠沉入水中不再浮出水面5 s,停止计时,计算小鼠游泳时间,自眼眶取血,检测血中乳酸含量。对照组不进行游泳,实验终点取血检测乳酸含量。结果显微镜和粒度仪显示黄芪饮片被粉碎成大小不等的细小颗粒,粒径分布范围为0.45~709μm,小于80μm的颗粒累积大于80%。黄芪超微粉(0.4~10 g·kg^(-1))可以减少0.1%CCl_(4)所致的肝坏死和AST,ALT的升高(P<0.05)。黄芪超微粉(0.4~10 g·kg^(-1))可以明显提高小鼠游泳时间(P<0.05),减少小鼠血中乳酸含量(P<0.05)。0.4 g·kg^(-1)黄芪超微粉的保肝作用和抗疲劳作用与10 g·kg^(-1)的黄芪饮片相当。高效液相显示黄芪超微粉的黄芪甲苷含量明显升高。结论与黄芪饮片相比,黄芪超微粉具有更好的保肝耐疲劳的作用,可能与黄芪超微粉中黄芪甲苷成分含量增高有关。
- 柴梦音寇卜心寇卜心刘晓霓
- 关键词：急性肝损伤游泳实验中药超微粉黄芪甲苷
- 索拉非尼通过调控Runt相关转录因子3-血管内皮生长因子通路抑制肝癌血管生成被引量：3
- 2022年
- 目的探讨索拉非尼抗肝癌的分子机制。方法应用肝癌人源肿瘤异体移植(PDX)模型进行索拉非尼药效筛选和验证;采用小动物B型超声和活体激光共聚焦观察PDX血管生成;采用免疫组化观察PDX组织增殖、血管生成相关蛋白的表达;采用实时定量PCR技术观察PDX组织Runt相关转录因子3(RUNX3)基因表达;采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析。结果用4例PDX进行索拉非尼药效筛选,PDX1对索拉非尼有明显应答,抑制率为68.07%;与对照组相比,索拉非尼明显抑制PDX1相对肿瘤体积(5.76±2.14比11.71±2.87,P<0.05);细胞分裂指数(39.50±7.72比67.10±9.14,P<0.05)以及Ki67表达明显降低(288.60±43.40比531.70±55.60,P<0.05);小动物超声可以检测到PDX1肿瘤有明显血流信号;活体激光共聚焦结果显示索拉非尼能明显减低PDX1肿瘤的总血管长度(1573.00±236.21比2675.03±162.00,P<0.05)和面积(11145.33±1931.97比20105.37±885.93,P<0.05);免疫组织化学结果显示索拉非尼显著下调CD34(27.55±3.76比45.47±5.57,P<0.05)和血管内皮生长因子(VEGF)(16.33±2.86比22.77±3.20,P<0.05)蛋白表达以及减少微血管密度(38.75±6.01比55.50±8.61,P<0.05);Real-time PCR结果显示索拉非尼明显上调RUNX3基因表达(2.14±0.71比1.00±0.36,P<0.05),索拉非尼组RUNX3基因表达量与VEGF阳性细胞比率呈负相关(R^(2)=0.5097)。结论索拉非尼可能通过调控RUNX3-VEGF通路抑制肝癌PDX血管生成进而抑制肝癌生长。
- 柴梦音寇卜心寇卜心魏飞力伏志魏飞力刘晓霓
- 关键词：索拉非尼肝癌血管生成RUNT相关转录因子3
- 靶向RelA(p65)基因shRNA慢病毒载体构建及功能鉴定
- 2023年
- 目的构建靶向RelA(p65)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,并对其功能进行验证。方法设计3对针对RelA基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列。shRNA退火形成双链oligo序列后应用基因重组技术构建重组质粒,经菌落聚合酶链式反应(PCR)及测序鉴定,将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定,通过Western blot实验筛选出对HepG2细胞株中RelA基因干扰效果最好的慢病毒,并通过CCK-8检测Lenti-shRelA对细胞增殖活性的影响。结果测序结果显示重组慢病毒载体与设计参考序列一致,提示重组慢病毒载体构建成功。重组慢病毒Y4056、Y21318、Y21319、Y21320的滴度分别为3.13×10^(8)TU/ml、2.97×10^(8)TU/ml、2.51×10^(8)TU/ml、3.40×10^(8)TU/ml。用慢病毒Lenti-shRelA(Y21318、Y21319、Y21320、Y4056)感染HepG2细胞,Western blot实验结果显示Y21320对HepG2细胞株中RelA基因的干扰效果最好。CCK-8实验结果显示RelA的敲降可显著抑制细胞增殖活力。结论该研究成功构建了靶向RelA基因shRNA慢病毒载体,其能有效下调HepG2细胞RelA的表达并抑制细胞增殖,为进一步研究RelA在肝癌发生、发展中的机制奠定了基础。
- 霍云飞高明慧豆双双寇卜心柴梦音刘晓霓石英
- 关键词：短发夹RNA慢病毒
