袁克华
- 作品数：8 被引量：25H指数：3
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- 植物自交不亲和性的分子研究被引量：2
- 2008年
- 介绍了植物界中广泛存在的自交不亲和性的遗传控制及其2种主要类型:孢子体自交不亲和性与配子体自交不亲和性;综述了2种类型的代表性植物近年来在分子水平上的研究。
- 程萍冯仁军袁克华张银东
- 关键词：自交不亲和性S基因分子研究
- 香蕉叶片低温胁迫下差异表达cDNA消减文库的构建被引量：2
- 2010年
- 为了解析香蕉寒害的分子机理,应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractivehy bridization,SSH)成功构建了香蕉叶片在低温胁迫下与未处理的差异表达的cDNA消减文库,并通过经蓝、白斑筛选,克隆测序及序列分析,以及应用半定量PCR技术对随机选取的No.28基因片段进行表达分析等方法,初步分析了实验所构建的cDNA消减文库。结果表明,实验所构建的cDNA消减文库为低温胁迫特异表达的cDNA消减文库;测序及序列分析的结果暗示可能有相当多的未知功能基因参与了香蕉抗寒的过程;随机选取的No.28的表达分析检测结果证实,通过对构建的cDNA消减文库的全面分析,有可能获得一批低温胁迫诱导特异表达的新基因,尤其对其功能的深入了解,将为全面解析香蕉寒害的分子机理、寒害过程中的信号转导打下理论基础。
- 祁君凤冯仁军程萍袁克华张丽丽张银东
- 关键词：香蕉叶片低温胁迫
- 香蕉NBS-LRR类抗病基因同源序列的克隆与分析被引量：11
- 2009年
- 根据已知植物抗病基因的保守区域设计引物，从香蕉基因组DNA扩增出一条与植物抗病基因同源的序列，命名为BRGAl，该同源片段含有典型的NBS—LRR类抗病基因所拥有的保守性结构p-loop、Kinase-2a、Killase-3a和疏水结构域HD，它与部分已知NBS-LRR类抗病基因的氨基酸序列同源性为23．8％-42．7％。Northern杂交表明BRGA1在香蕉中受水杨酸调控，属诱导型表达。
- 袁克华冯仁军程萍张银东
- 关键词：抗病基因同源序列水杨酸
- 香蕉红素氧还蛋白酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 结合改良的BDSMARTTMPCRcDNASynthesisKitUserManualcDNA合成试剂盒，反转录合成带有目的接头cDNA第一链．通过LD—PCR，扩增双链cDNA（dscDNA）．产物经双酶切后回收，与经同样双酶切的酵母双杂交系统中pGADT7载体连接转化，并进行了鉴定．结果表明：提取的RAN的A200／A200=1．82，表明所提RNA纯度高；双链cDNA文库大于0．2kb，且弥散较长，成瀑布条带状；根据生长菌落计数，文库舍有1．2×10^6转化子。重组子不同插入片段在0．3—2kh之间。表明该文库达到建库要求，为下一步进行酵母双杂交试验奠定基础．此方法用于构建cDNA文库与酵母双杂交系统相结合的研究目前尚未见过相关报道．
- 程萍冯仁军袁克华张银东
- 关键词：CDNA文库酵母双杂交
- RNA干扰的研究进展被引量：4
- 2009年
- RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制,广泛地存在于真菌、植物和动物中。主要介绍了RNAi的发现、分子机制、转基因载体构建策略以及RNA i在生命科学中广阔的应用前景。
- 袁克华冯仁军程萍张银东
- 关键词：RNA干扰双链RNA小干扰RNA
- 烟草红素氧还蛋白基因NtRD1的克隆及其RNAi载体构建被引量：1
- 2008年
- 采用RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术进行烟草红素氧还蛋白基因NtRD1(Nicotiana tabacum rubredoxin1)全长cDNA的克隆,获得了全长808bp的cDNA,该cDNA具有完整的开放阅读框架,编码204个氨基酸,其中包含一个保守的红素氧还蛋白结构域。同源分析结果表明,NtRD1与其它植物已克隆的RDs具有较高的一致性。系统发育分析结果表明,NtRD1与其它物种RDs的亲缘关系由近及远依次是马铃薯、水稻、葡萄、拟南芥和藻类。根据RNAi(RNA interference)载体构建原则,成功地构建了干扰NtRD1的RNAi植物表达载体pCAMBIA1301-NtRD1-RNAi,为进一步探明该基因在烟草中的功能奠定了基础。
- 冯仁军卢利方程萍袁克华张银东
- 关键词：烟草RACE全长CDNARNAI
- 香蕉红素氧还蛋白基因在酵母双杂交系统中的自激活检测
- 2010年
- 利用PCR方法扩增香蕉红素氧还蛋白基因的保守结构域序列CdRD和开放性阅读框序列FRD,并在其上下游分别引入NdeⅠ和SalⅠ酶切位点,双酶切后与同样经NdeⅠ和SalⅠ双酶切的诱饵质粒载体pGBKT7连接,构建重组诱饵质粒pGBKT7-CdRD和pGBKT7-FRD,并将此两重组诱饵质粒转入酵母菌株AH109中进行营养缺陷型分析检测毒性及自激活。结果表明,成功构建了重组诱饵质粒pGBKT7-CdRD和pGBKT7-FRD,并且其无自激活报告基因作用,对酵母菌株也无毒性作用。这说明此两个重组诱饵质粒可用于酵母双杂交系统,为从香蕉叶片cDNA文库中筛选获得与香蕉红素氧还蛋白基因的保守结构域序列CdRD和开放性阅读框序列FRD相互作用的受体蛋白基因奠定了基础。
- 程萍冯仁军袁克华张丽丽祁君凤张银东
- 关键词：酵母双杂交自激活作用
- 巴西橡胶树谷氨酸脱氢酶基因cDNA片段克隆及表达分析被引量：4
- 2008年
- 谷氨酸脱氢酶[Glutamatedehy drogenase,(GDH;E.C.1.1.4.2)]在植物处于逆境或胁迫时,发挥着重要的作用,主要功能可能是解除逆境或胁迫条件下高浓度的铵毒害.该研究通过同源克隆从巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)中获得谷氨酸脱氢酶基因(HbGDH)的部分cDNA片段(GeneBank登录号:DQ672585),其蛋白包含一个谷氨酸脱氢酶保守结构域.BLAST比对表明HbGDH基因与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryzasativa)GDH基因分别有82%、79%的同源率;系统进化树分析发现HbGDH蛋白与拟南芥、水稻GDH蛋白聚为一簇;不同组织的表达分析表明HbGDH基因在胶乳中表达较高,叶片中次之,树皮中最低.
- 冯仁军卢利方程萍袁克华张银东
- 关键词：巴西橡胶树谷氨酸脱氢酶同源克隆RT-PCR
