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胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响及可能机制被引量：3: 2016年; 目的观察胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响,研究该过程中可能机制。方法利用酶消化法获得原代大鼠关节软骨细胞。软骨细胞分为不同pH处理组(pH7.4、pH 7.0、pH 6.5和pH 6.0)以及pH6.0酸化不同时间组(0、6、12、24、48 h),经ROS还原剂NAC预处理的酸化组和正常组,Real-time PCR和Western blot观察各组促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达情况,ELISA检测各组细胞培养基中的IL-1β、IL-18含量,AO/EB染色和LDH细胞毒性检测试剂盒分析细胞的死亡情况,ROS测定试剂盒观察细胞内ROS荧光强弱。结果与pH 7.4组比较,酸化组的促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达明显增加,荧光显微镜观察到ROS荧光明显增强,AO/EB染色和LDH检测实验发现酸化可以诱导软骨细胞死亡,且pH 6.0酸化处理组效果最明显;ROS还原剂NAC预处理可以明显下调IL-1β、IL-18、ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达,并且明显减弱软骨细胞内ROS荧光,同时明显下调细胞死亡率。结论胞外酸化可能通过上调细胞内ROS的含量,促使软骨细胞发生焦亡。; 吴小山陈飞虎葛金芳周仁鹏祖胜芹朱传君; 关键词：关节炎关节软骨细胞 ROS NAC

肝纤维化小鼠模型研究现状被引量：7: 2022年; 肝纤维化是肝病领域研究的热点问题,其模型的制备有助于探究发病机理。本论文综述了目前报道的十种常用的肝纤维化小鼠模型,讨论了各自模型的成模原理、造模途径、模型效果、优缺点和用途,比较不同小鼠模型的异同,旨在为模型的选择提供依据,为肝纤维化的研究方向提供参考。; 王娟王娟杨晶晶胡伟周仁鹏; 关键词：肝纤维化小鼠动物模型

钙络合剂BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响及其可能机制被引量：3: 2015年; 目的观察BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外使用胰酶-Ⅱ型胶原酶消化法分离提取大鼠关节软骨细胞,分为正常组(p H 7.4)、酸化组(p H 6.0)、以及分别经BAPTA-AM处理的正常组和酸化组,激光共聚焦技术检测软骨细胞胞内钙离子变化,实时荧光定量PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3的表达,吖啶橙染色分析细胞自噬溶酶体形成情况。结果与p H 7.4正常组比较,p H 6.0酸化刺激明显增加大鼠关节软骨细胞内Ca2+的浓度,且自噬标志物Beclin-1、ULK1 mRNA及LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高,酸性自噬溶酶体形成增多,同时酸化刺激能引起Ca MKKβ及pAMPK蛋白表达水平增高,磷酸化蛋白p-m TOR水平明显降低。BAPTA-AM酸化组自噬水平和Ca MKKβ及p-AMPK表达明显降低,p-m TOR表达明显升高。结论 BAPTA-AM能明显减弱胞外酸化诱导软骨细胞自噬作用,其机制可能与抑制胞内Ca2+有关。; 高文凡陈飞虎葛金芳邓子云雷静周仁鹏王志森; 关键词：BAPTA-AM 关节软骨细胞 CA2+

酸敏感离子通道在类风湿关节炎中作用的研究进展被引量：7: 2015年; 酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是一类胞外H+激活的阳离子通道,属于阿米洛利敏感的上皮钠通道/退变素(epithelial Na+channels/degenerin,ENa C/DEG)超家族中的一员,该通道广泛分布在周围和中枢神经系统中,并且具有重要的生物学功能。近来研究表明,ASICs在类风湿关节炎发病过程中发挥着重要作用。该文对ASICs的细胞生物学特点以及ASICs在类风湿关节炎中对炎症、疼痛和软骨损伤等方面的作用进行综述。; 周仁鹏陈飞虎; 关键词：酸敏感离子通道类风湿关节炎酸中毒钙炎症靶点

YTHDF2对肝星状细胞活化增殖与迁移能力的影响: 2023年; 目的探究YTHDF2对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化增殖与迁移能力的影响。方法使用5μg·L^(-1)TGF-β1诱导HSC-T6细胞活化,使用YTHDF2-siRNA构建YTHDF2沉默模型,实验分为Control组、TGF-β1组、si-NC组和si-YTHDF2组。Dot blot方法检测N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)水平的变化;Western blot和RT-qPCR方法检测活化HSCs中YTHDF2的表达变化和纤维化关键指标α-SMA、CollagenⅠ的表达变化;CCK-8、Edu染色方法检测HSCs增殖能力;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测HSCs的迁移能力。结果在TGF-β1诱导活化的HSCs中YTHDF2的表达明显增高,而在si-YTHDF2组中水平明显下降;与Control组相比,TGF-β1组中m^(6)A水平以及α-SMA、CollagenⅠ的水平明显升高,且HSCs的增殖和迁移能力也明显增高;而与si-NC组比较,沉默YTHDF2后,m^(6)A水平、α-SMA和CollagenⅠmRNA和蛋白水平均明显降低,同时HSCs的增殖和迁移能力明显被抑制。结论YTHDF2可促进α-SMA和CollagenⅠ的表达,同时可促进HSCs的增殖和迁移能力,进而促进HSCs活化和肝纤维化的进展,这一过程可能是与m^(6)A甲基化修饰有关。; 孙峰王娟王娟杨晶晶周仁鹏鲁超; 关键词：HSCS 增殖迁移肝纤维化

金雀根通过阻断TRPM7抑制Erastin诱导的软骨细胞铁死亡: 2024年; 目的:探讨金雀根(Caragana sinica root,CSR)对Erastin诱导的软骨细胞铁死亡模型中铁死亡的影响及可能的机制。方法:培养C28/I2软骨细胞系,构建Erastin诱导铁死亡的细胞模型。采用MTT法检测细胞活力;Calcein/PI染色观察细胞活性;通过试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)及总谷胱甘肽(GSH)水平;荧光探针BODIPY 581/591 C11标记检测活性氧(ROS)水平;Rh123和JC-1染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;Western blot检测铁死亡相关蛋白(ACSL4、GPX4)和TRPM7蛋白的表达。结果:Erastin处理可降低软骨细胞活力,增加细胞毒性,诱发氧化应激,破坏ΔΨm,并上调ACSL4蛋白表达,同时下调GPX4蛋白表达,诱导软骨细胞铁死亡。相反,金雀根可以使细胞活力恢复,降低氧化应激反应,从而抑制软骨细胞铁死亡。此外,金雀根能降低Erastin引起的TRPM7蛋白表达水平的升高。结论:Erastin诱发了C28/I2软骨细胞脂质过氧化反应,引起线粒体损伤及铁死亡;金雀根可能通过阻断TRPM7抑制软骨细胞铁死亡,从而发挥保护软骨细胞的作用。; 朱仁弟屈彪周仁鹏胡伟; 关键词：金雀根软骨细胞

ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定被引量：3: 2015年; 饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法鉴定子代小鼠基因型。ASIC1基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子(ASIC1+/-)、纯合子(ASIC1-/-)和野生型(ASIC1+/+)。; 周仁鹏吴小山王志森葛金芳陈飞虎; 关键词：基因敲除小鼠 PCR

ASIC1基因敲除对佐剂性关节炎小鼠关节软骨损伤的影响: 2023年; 目的利用ASIC1基因敲除小鼠构建佐剂性关节炎(AA)模型,探讨敲除ASIC1对关节炎发病程度及关节软骨损伤的影响。方法将野生型小鼠和基因敲除小鼠分别分为:正常组、模型组。通过观察足爪炎症情况进行关节炎评分,并测定继发侧足爪肿胀度;通过HE染色、免疫组化、TUNEL法、ELISA法检测关节软骨损伤及关节炎炎症情况。结果基因敲除小鼠模型组的关节炎评分及足爪肿胀度低于野生型小鼠模型组;HE结果显示敲除ASIC1可减轻AA小鼠关节软骨的破坏情况;免疫组化结果显示敲除ASIC1可提高AA小鼠关节软骨中Ⅱ型胶原的表达;TUNEL法结果显示基因敲除小鼠模型组中软骨细胞的凋亡水平低于野生型小鼠模型组;ELISA法结果表明,敲除ASIC1可下调AA小鼠血清中高表达的促炎细胞因子IL-1β、TNF-α的水平。结论敲除ASIC1可降低佐剂性关节炎发病程度及关节软骨的破坏水平。; 代贝贝祖胜芹周仁鹏陈飞虎; 关键词：佐剂性关节炎关节软骨类风湿性关节炎

大鼠ASIC1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其功能鉴定: 2016年; 目的构建大鼠酸敏感离子通道1(ASIC1)基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-ASIC1-promoter,并进行功能的鉴定。方法设计、合成ASIC1启动子引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术从大鼠全基因组DNA中扩增出ASIC1启动子片段;NheⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pGL3-Basic报告载体上;构建的pGL3-ASIC1-promoter重组质粒和pRLTK内参质粒瞬时共转染293T细胞检测ASIC1启动子活性。结果 PCR扩增得到大鼠ASIC1基因启动子片段;成功构建pGL3-ASIC1-promoter报告基因载体,菌落PCR和测序结果表明启动子DNA序列正确。与空质粒pGL3-Basic转染组相比,pGL3-ASIC1-promoter质粒转染组的荧光素酶活性明显增加(P<0.01)。结论成功构建了大鼠ASIC1基因启动子报告基因载体,为探究ASIC1转录表达的调控机制奠定基础。; 周仁鹏吴小山王志森谢亚亚李悦代贝贝王志强葛金芳陈飞虎; 关键词：启动子荧光素酶报告基因

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周仁鹏

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