常英英 作品数:19 被引量:41 H指数:4 供职机构: 中国林业科学研究院林业研究所 更多>> 发文基金: 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 水利工程 更多>>
欧洲黑杨‘N46’组培再生体系的建立 被引量:4 2015年 以欧洲黑杨N46无性系(Populus nigra‘N46’)的腋芽无菌萌发的幼嫩叶片为试验材料,对影响其不定芽分化和生根的关键因子进行了研究,建立了高效稳定的不定芽诱导和植株再生体系。结果表明:欧洲黑杨N46无性系幼嫩叶片进行不定芽分化诱导的最适培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA0.03 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉5 g·L-1,诱导最佳温度为27℃,每个叶片平均分化不定芽数量可达45.20个;不定芽生根的最佳培养基为1/2MS+IBA0.01 mg·L-1+NAA0.01 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉5 g·L-1,生根最佳温度为25℃,生根率可达93.33%,生根小植株移栽成活率达98%。 王颜波 常英英 梁立雄 苏晓华 张冰玉 杨帆 刘秀华 王建革关键词:欧洲黑杨 不定芽分化 植株再生 核桃不定根发生阶段内参基因筛选与关键基因表达分析 被引量:12 2019年 通过荧光定量PCR技术和geNorm、NormFinder软件对8个候选内参基因(18S、ACT、ACT2、TUB、H2B、UBI、EF-2α和UBQ)在核桃(Juglans reiga)不定根发生过程中的表达稳定性进行评估。利用筛选出的最佳内参基因ACT2进行校正,对核桃不定根发生过程中的12个重要功能基因(YUC4、PIN6、AUX/IAA8、SAUR24、WOX11、WOX5、LBD16、WRKY14、SHR、SCL、CYCA和CYCD)的表达水平进行定量分析。结果显示,YUC4在扦插过程中持续显著下调表达,其余11个基因均在不同时期显著上调表达。结合基因功能推测:PIN6等基因介导的生长素极性运输对于不定根发生初期所需的高浓度IAA富集具有重要作用;SHR、WOX11、LBD16、WRKY14和SCL主要参与形成层细胞向根原基原始细胞的转化过程,SAUR24、WOX5、CYCA和CYCD主要参与根原基原始细胞向根原基细胞转变的调控;同时,细胞周期蛋白相关基因(CYCA、CYCD)可以作为插穗中根原基原始细胞向根原基细胞转变的标志基因。 宋晓波 常英英 刘昊 徐慧敏 裴东关键词:核桃 不定根 核桃JrWOX4b基因的克隆和功能分析 被引量:1 2022年 [目的]为探索WOX4b基因在核桃不定根发生过程中的调控作用提供理论支撑。[方法]以核桃品种‘林早香’(Juglans regia‘Linzaoxiang’)的cDNA为模板克隆该基因CDS全长序列;利用生物信息学技术对其进行多重序列比对和系统进化分析;构建该基因与黄色荧光蛋白(Yellow Fluorescent Protein,YFP)标签的融合表达载体进行亚细胞定位分析;通过对银腺杨‘84K’的遗传转化,分析其功能。[结果]JrWOX4b基因的编码序列(Coding sequence,CDS)长度为678 bp,编码226个氨基酸,分子量为25.42 KDa。所编码氨基酸序列的多重比对及系统进化分析结果显示:核桃JrWOX4b与山核桃属的长山核桃同源蛋白遗传关系最近,与壳斗科栎属白栎次之,而与禾本科的黍稷和二穗短柄草的亲缘关系最远。JrWOX4b基因过表达植株的表型分析结果显示:JrWOX4b的过表达和对照植株生长发育均正常,但在相同培养条件下,JrWOX4b基因的过表达能够显著增加杨树的不定根数量,2周龄过表达植株不定根数量为对照植株的3~4倍,不定根长度是对照植株的1/2。[结论]从核桃中成功克隆了WOX基因家族成员JrWOX4b基因,其过表达可显著增加转基因植株的不定根数量。研究结果不仅能够为不定根发生调控机制的研究提供理论支撑,同时也为其他难生根木本植物的快速繁殖提供优良基因资源。 雷夏烁 常英英 张普 宋晓波 宋晓波 裴东关键词:核桃 不定根 功能分析 核桃芽接愈合的组织学机制 被引量:6 2019年 【目的】通过对核桃芽接愈合过程的组织学观察,研究不同嫁接时期砧穗在愈伤组织形成、增殖和输导组织连接过程中的组织学变化机制,旨在为核桃和其他木本植物嫁接提供理论指导。【方法】以12年生核桃品种‘香玲’半木质化新梢中部芽片为接穗,2年生本地核桃实生苗为砧木,采用方块芽接法分别于砧木萌芽后40~47天和100~107天2个时间进行芽接试验,采用本课题组建立的非均质化材料切片方法对芽接愈合过程进行组织学观察。【结果】核桃萌芽后40~47天的砧穗愈合方式与前人报道一致,即形成层细胞在嫁接体愈合过程中起主导作用,愈合过程中主要组织学变化包括:隔离层的产生(3天)→砧穗形成层细胞分化产生愈伤组织(4天)→愈伤组织连接(6天)→砧穗原有形成层的修复与连接(12天),完成愈合需要12~15天,成活率达95.6%。而在萌芽后100~107天的砧穗愈合过程中,发现了与上述常规愈合不同的嫁接愈合新方式。此过程中木射线细胞起主导作用,愈合过程依次历经隔离层的产生(3天)→木射线细胞分化产生愈伤组织(4天)→砧穗愈伤组织连接(9天)→导管分化形成(15天)→新的形成层产生以及木射线的连接(25天),需要25~30天才能完成愈合,成活率为61.7%;在木射线细胞主导的砧穗愈合过程中砧木一侧的隔离层要先于接穗发生溶解,在砧穗愈伤组织完成连接时消失,而接穗表面隔离层在愈伤组织分化时依然存在,直至新的形成层产生后才完全溶解消失。【结论】核桃芽接过程中,除了常见的由形成层细胞主导的砧穗愈合方式外,还存在由木射线细胞主导的砧穗木质部的愈合新方式,木射线细胞脱分化产生愈伤组织,并进一步分化出导管、形成层和木射线等组织完成最终的砧穗连接;在此过程中愈伤组织主要来自于砧木木射线细胞且砧木隔离层要先于接穗发生溶解。 周乃富 宋晓波 张俊佩 常英英 裴东关键词:核桃 芽接 愈合方式 转多基因1年生库安托杨对溃疡病的抗性分析 2019年 [目的]本研究对转多基因库安托杨株系的溃疡病抗病性检测及抗病相关基因的表达分析,为通过基因工程手段培育抗病林木新树种提供有价值的参考。[方法]以转JERF36等多个外源基因的1年生库安托杨株系D5-9、D5-20、D5-21及非转基因受体D5-0为材料,对主干人工接种溃疡病菌的各株系病情指数进行了测定,同时对接种5 d后树皮组织中5个抗病基因的表达情况进行了实时定量PCR(qPCR)分析。[结果]在溃疡病菌胁迫下,3个转基因株系对溃疡病菌的抗性显著优于非转基因受体株系,转基因株系间抗病性也具有一定差异,D5-21的病情指数显著低于其它2个转基因株系;肉桂醇脱氢酶基因在3个转基因株系树皮中表达量均高于对照,类甜蛋白基因仅在D5-19树皮中的表达量高于对照,其他3个基因在转基因株系中的表达量或与对照相当或低于对照。[结论]转多基因库安托杨株系的溃疡病抗性与非转基因对照相比均有显著提高,且转基因株系间差异显著;同时转基因株系中不同抗病基因的表达模式也有很大差异,说明溃疡病菌胁迫下转多基因库安托杨抗病调控的复杂性,其分子调控机制还有待深入研究。 常英英 梁立雄 高亚南 吴晓娟 鲁俊倩 王庆灵 丁昌俊 张伟溪 苏晓华 张冰玉关键词:转基因杨 ERF转录因子 杨树溃疡病 AtMET1基因在84K杨中的遗传转化及诱导表达分析 2020年 [目的]研究拟南芥甲基化转移酶基因AtMET 1在银腺杨84K(Populus alba×P. glandulosa ‘84K’)中的诱导表达特性,为建立杨树甲基化诱导变异体系、进而实现杨树品种改良等奠定基础。[方法]以白杨派优良品种84K杨的无菌苗叶片为受体材料,采用农杆菌介导法将化学诱导启动子与AtMET1基因导入84K杨基因组中;经潮霉素筛选获得抗性植株,通过常规PCR检测、DNA测序等方法对抗性植株进行鉴定。通过化学诱导剂17-β-雌二醇对随机挑选的1个转基因株系离体叶片进行诱导处理,处理时间为0、3、6、12、24、48、96、144 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外源基因AtMET1表达量变化。[结果]本研究共获得了潮霉素抗性芽648个,经生根筛选获得18株抗性植株,经分子检测证实全部为转基因植株,分别标号为AM-1~18#。qRT-PCR结果显示:化学诱导剂17-β-雌二醇处理3 h时,目的基因AtMET1的表达量即达到最大值,随后在处理6 h时表达量下降,处理12 h时有所回升,处理24 h后表达量降低至不足12 h时的一半。[结论]化学诱导剂17-β-雌二醇能迅速有效地调控转基因杨树中AtMET1基因的表达,为进一步研究MET1基因在杨树基因组甲基化调控方面的作用机制奠定基础,也为今后杨树化学诱导表达研究及品种改良提供新思路、新方法。 吴晓娟 鲁俊倩 常英英 钟姗辰 苏晓华 张冰玉关键词:84K杨 转基因植株 17-Β-雌二醇 AtDME1化学诱导表达载体的构建及其瞬时表达 被引量:4 2016年 以拟南芥去甲基化转移酶基因DME1为目的基因,采用酶切、连接和重组反应的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-DME1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明,较低浓度的17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-DME1中目的基因的表达,诱导处理后目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高,之后缓慢下降。该载体的成功构建为深入研究DNA去甲基化与植物的生殖发育调控奠定了基础。 常英英 高亚南 梁立雄 丁昌俊 苏晓华 张冰玉关键词:17-Β-雌二醇 早实核桃体细胞胚发生和植株再生的影响因素研究 被引量:3 2019年 [目的]建立2种早实核桃高效和稳定的体胚发生体系,为离体快繁技术及其基础研究提供技术和理论支撑,也为核桃遗传转化体系的构建奠定基础。[方法]分别以实生核桃‘林早香’和嫁接核桃‘中林6号’花后4277d的幼胚为试材进行离体培养,通过统计体胚诱导率,筛选体胚的最佳诱导时期;统计多次继代的体胚畸变率,并筛选最适ABA调节浓度;选取发育成熟的体胚进行饱和NH4NO3溶液脱水处理,分别处理0、24、48、72、96和120h后统计失水量和转株率,探讨脱水程度对体胚植株再生的影响。[结果]外植体的发育时期对体胚发生至关重要,以‘林早香’和‘中林6号’幼胚为外植体进行体胚诱导,最佳诱导时期分别为花后约49d和56d,体胚诱导率分别为88.32%和86.67%。体胚经多次继代培养后产生较高畸变率,适量ABA处理不仅降低体胚畸变率,且提高体胚发生率,最佳ABA调节浓度为1.0mg·L^-1。随着体胚脱水时间的延长,体胚失水量逐渐增加,植株再生率先升高后降低,脱水72h时,‘林早香’和‘中林6号’的体胚萌发率达到最高,分别为56.67%和53.33%,此时失水量分别为38.73%和40.56%。[结论]早实核桃幼果发育过程中,合子胚的体胚发生率随着发育时期变化,适宜发育时期是提高体胚诱导发生的关键;适量ABA在体胚多次继代培养过程中对畸形胚起重要调节作用;适度的脱水处理对核桃体胚再生具有良好的促进作用。 常英英 张启香 宋晓波 査巍巍 裴东关键词:早实核桃 体细胞胚 植株再生 一种培养表面多脂植物外植体的方法 本发明属于生物技术领域,尤其是植物组织培养技术领域,公开了一种用于对表面多脂植物的外植体进行处理的溶脂混合液、采用该溶脂混合液对表面多脂植物的外植体进行处理的方法、以及一种培养杨树等表面多脂植物外植体的方法。本发明将溶脂... 张冰玉 苏晓华 常英英 黄秦军文献传递 复幼促进核桃不定根发生的DNA甲基化机制探讨 被引量:1 2020年 该研究以核桃的复幼和成龄插穗为材料,通过甲基化修饰依赖性内切酶测序技术(MethylRAD-Seq),在全基因组水平上检测成龄与复幼插穗中DNA甲基化位点分布特征,进一步对复幼处理前后插穗中差异甲基化位点相关基因的表达情况进行分析。结果显示:(1)复幼处理可显著降低核桃插穗的DNA甲基化水平。(2)功能富集分析结果显示,差异甲基化位点相关基因主要参与油菜素内酯信号转导、次级代谢产物生物合成和木质素生物合成等功能,参与光合作用、MAPK(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、果糖和甘露糖代谢、cAMP(cyclic AMP,CAMP)信号途径和苯丙烷生物合成等代谢通路。(3)qRT-PCR分析结果显示,复幼处理前后,不定根发生的关键调控基因NAC1、ARF5、ARF6和WRKY22在复幼和成龄材料中具有不同的表达模式。研究认为,复幼处理降低了核桃插穗中基因组DNA的甲基化水平,进而影响不定根发生过程关键功能基因的表达,可能是复幼调控核桃不定根发生能力的重要途径。 李莉 宋晓波 宋晓波 常英英 张俊佩 裴东关键词:核桃 不定根