李旻
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 茶树咖啡碱合成酶基因原核表达、及其抗体制备与鉴定被引量：3
- 2015年
- 克隆出茶树咖啡碱合成酶基因,对其进行原核表达,并制备TCS1抗体,旨在从蛋白水平研究茶树体内TCS1的表达情况。根据Gen Bank登陆的TCS1基因的全长c DNA序列,找出其完整的ORF(开放阅读框),从茶树叶片c DNA中克隆了TCS1基因的开放阅读框,连接到p GEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达重组蛋白p GEX-4T-2-TCS1。进行体外酶活检测后,亲和层析纯化重组蛋白,作为抗原免疫家兔,制备TCS1多克隆抗体。用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性。通过优化诱导条件,得出重组蛋白的最佳表达条件为:30℃、4 h。诱导后的总蛋白、可溶性蛋白与包涵体蛋白均出现一条明显的外源蛋白条带。抗体经ELISA检测,效价为1∶2 000,Western blot检测表明抗体具有相对较好的特异性。构建了TCS1原核表达质粒,同时成功制备了抗TCS1的多克隆抗体。
- 邓威威金阳李旻马林龙张正竹
- 关键词：茶树咖啡碱原核表达多克隆抗体
