李秀男
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院战略性先导科技专项内蒙古自治区科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 蒙古羊双羔性状基因ADAMTS-1作用机制研究
- 2023年
- 【目的】以产单、双胎蒙古羊为动物模型初步探究双羔主效基因含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)的作用机制,为蒙古羊高效繁育及其相关研究提供理论依据。【方法】选取具有产单、双胎记录的雌性蒙古羊各12只,采用自然发情方式,通过阴道黏膜涂片和公羊爬跨确定雌性蒙古羊的发情期和间情期,分别取产双羔发情期(DE)、产双羔间情期(DD)、产单羔发情期(SE)、产单羔间情期(SD)蒙古羊卵巢,利用HE染色的方式观察卵巢有腔卵泡形态差异。取蒙古羊卵巢颗粒细胞进行培养,运用免疫荧光技术确定ADAMTS-1表达位置。通过实时荧光定量PCR技术检测ADAMTS-1、孕酮受体(PGR)、丝裂原活蛋白激酶4(MAPK4)、雄激素受体(AR)、丝氨酸蛋白酶抑制剂2(SERPINE2)、多功能蛋白聚糖蛋白聚糖(Versican)在不同组别中的mRNA相对表达水平,并通过Western blotting技术检测ADAMTS-1前体蛋白(pro-ADAMTS-1)和成熟蛋白(MP-ADAMTS-1)在不同组别中的蛋白相对表达水平。【结果】通过HE染色结果可以确定产单、双胎蒙古羊卵巢组织内有腔卵泡形态无表观差异,运用免疫荧光方法检测到ADAMTS-1在蒙古羊卵巢颗粒细胞上表达。通过荧光定量PCR及Western blotting结果可知,DE组蒙古羊中ADAMTS-1在卵巢组织中基因及蛋白表达量显著高于其他3组(P<0.05),而在SE与SD组无显著差异(P>0.05);SE组蒙古羊卵巢组织内AR和PGR基因表达量最高,且显著高于其他3组(P<0.05),DE组显著高于DD组(P<0.05),且在同一发情阶段产单羔蒙古羊卵巢组织内AR、PGR基因表达量显著高于产双羔蒙古羊卵巢组织;SE组蒙古羊卵巢内MAPK 4基因表达量最高,且显著高于其他3组(P<0.05),其他3组间无显著差异(P>0.05);DD组蒙古羊卵巢组织内Versican、SERPINE2基因表达量最高,且显著高于DE和SD组(P<0.05);SE组这两个因子显著高于SD组(P<0.05)。【结论】ADAMTS-1于蒙古�
- 赵梦瑶陈晓良李秀男李秀男田瑛菅瑞珍杨燕燕李海军
- 关键词：蒙古羊ADAMTS-1卵巢
- 获能前后绵羊精子的差异蛋白质组学分析
- 2023年
- 为了探索获能前后绵羊精子蛋白质的动态变化,通过串联质谱标签结合液质联用分析技术,对获能前后绵羊精子的总蛋白进行定量分析。结果显示:获能前后绵羊精子的差异表达蛋白共有203个,获能后表达上调蛋白质27个,表达下调蛋白质176个。差异表达参与解剖结构发育、生殖等生物学进程;从细胞组分看,差异表达蛋白定位在细胞溶质、质膜中;从分子功能看,主要参与氧化还原等过程。差异表达蛋白也参与蛋白酶体、Hedgehog和cAMP等信号通路。通过差异蛋白表达结合文献分析,筛选出乳铁蛋白。Western blot结果表明,乳铁蛋白在绵羊精子中存在,且在获能后表达量极显著降低(P<0.0001);RT-qPCR结果表明,乳铁蛋白在获能前后绵羊精子中均存在,且差异极显著(P<0.001),说明乳铁蛋白对绵羊精子获能有一定的影响。
- 毛飞杨燕燕苏杰赵高平李秀男王大清巴音吉日嘎拉巴音吉日嘎拉曹贵方
- 关键词：蛋白质组学精子获能乳铁蛋白绵羊
- 雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白表达的影响
- 2022年
- [目的]利用雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞进行刺激,检测与分析绵羊输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白表达的变化。[方法]以5代内的绵羊输卵管上皮细胞作为研究对象,通过qPCR及Western blot检测添加10-8 mol/L的雌二醇(以等量培养基替代雌二醇作为对照组)作用0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 h后输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白的表达情况。[结果]在绵羊输卵管上皮细胞中添加10-8 mol/L雌二醇后,随着作用时间的延长,pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白的表达量整体呈先升高、后降低趋势。与作用0 h相比,pik3r3基因的mRNA表达量(P<0.01)及蛋白表达量(P<0.05)在雌二醇作用1.5 h时达到最高峰,Akt、mapk3基因的mRNA表达量(P<0.01)及蛋白表达量(P<0.05)在雌二醇作用2.5 h时达到最高峰。雌二醇作用3.0 h时,pik3r3、Akt、mapk3基因的mRNA表达量相比0 h都显著(P<0.05)提高。[结论]输卵管上皮细胞中pik3r3、Akt、mapk3基因的表达受到雌二醇调控。高浓度雌激素促进pik3r3、Akt、mapk3基因的高表达,这可能与生殖道的天然防御有关,并可能通过该途径提高机体自身免疫应答能力。
- 李秀男李秀男曹贵方田瑛何亭漪李彩新杨燕燕
- 关键词：雌二醇输卵管上皮细胞AKT基因
- 羊口疮病毒强毒株与传90代毒株毒力相关基因的序列比较被引量：4
- 2018年
- 为比较羊口疮病毒(ORFV)强弱毒株毒力相关基因序列,将分离自山东省某发病羊场的强毒株ORFV/QD/2015,在山羊皮肤成纤维细胞上连续传90代,然后将ORFV/QD/2015强毒株和传90代后毒株的质粒测序结果与已经公布的9组ORFV全基因序列中的ORF020、ORF112、ORF117、ORF127基因进行比对。结果显示:ORFV/QD/2015强毒株与公布毒株毒力相关基因的同源性高,而传90代毒株与其同源性有所降低。将强毒株与传90代毒株4组毒力相关基因的核苷酸进行比对,发现其基因编码氨基酸均发生了多处变异,其中ORF020发生了7处,ORF112发生了52处,ORF117发生了14处,ORF127发生了15处。比对后发现,核苷酸与编码氨基酸变异最多的为ORF112基因,最少的为ORF020基因。两毒株间的抗原指数也有明显变异。研究认为,ORFV毒力相关基因的变异可能与其毒力有很大联系,这个变化可能与传代过程中基因发生多处变异有关,也可能是这些毒力基因共同作用的结果。
- 张静仲亮李智李秀男范峻豪刘春羽张七斤
- 关键词：羊口疮病毒毒力相关基因
- 乌珠穆沁羊早期胚胎转录组测序分析
- 2023年
- 试验旨在分析乌珠穆沁羊16 d胚胎和25 d胚胎的差异表达基因,探究以乌珠穆沁羊为代表的蒙古绵羊的早期胚胎发育过程和分子机制。通过对乌珠穆沁羊16 d胚胎和25 d胚胎进行mRNA测序,共富集到7171个差异表达基因,尤其显著的差异表达基因包括参与到肌动蛋白细胞骨架调控、紧密连接、AMPK信号通路、PI3K-Akt信号通路和MAPK信号通路的基因,如ROCK1、ROCK2、TJP1、TJP3、ADIPOR2、ACACA、PDGFRβ、PDPK1等,以及参与核糖体信号通路的RPL家族和RPS家族的部分基因,参与帕金森病、氧化磷酸化等通路中的多个NDUF家族基因。在通路分析中,E16发育阶段突出了那些与神经、血管、胰岛β细胞和胰腺发育相关的通路。而使器官和身体结构更为复杂,比如调控大脑、肝脏、心脏活动的基因,在E25发育阶段被显著富集。综合来说,在16 d胚胎阶段,神经、血管以及胰岛β细胞和胰腺正在快速发生;在25 d胚胎阶段,心脏、大脑和肝脏正处于活跃的生理时期。
- 苏红陈陆李秀男王大清赵霏霏张越李勇曹贵方
- 关键词：乌珠穆沁羊胚胎发育
- 绵羊子宫内膜上皮细胞与基质细胞培养方法的建立被引量：7
- 2016年
- 为建立一种经济、简便的分离纯化培养绵羊子宫内膜上皮细胞及基质细胞的方法,采用传统组织块培养法、胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶消化+组织块培养法,分别对绵羊子宫内膜上皮细胞与基质细胞进行了原代培养比较研究。结果表明:3种方法均可以获得原代绵羊子宫内膜上皮细胞与基质细胞。混合生长的细胞经胰蛋白酶差时消化可获得较纯上皮细胞和基质细胞,且其生长曲线均呈S型。经比较分析,胰蛋白酶消化+组织块培养法为最佳培养方法,操作简便、经济实用,获得的绵羊子宫内膜上皮细胞呈铺路石状可传3代,角蛋白18免疫细胞化学染色阳性,纯度达90%以上;基质细胞呈长梭形、漩涡状生长可有限传代,波形蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,纯度达95%以上。
- 郑欣欣曹贵方李琦李秀男
- 关键词：子宫内膜上皮细胞基质细胞免疫细胞化学
- 17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞Ghrelin表达量的影响被引量：1
- 2017年
- 为了研究17β-雌二醇对Ghrelin表达量的影响,根据绵羊Ghrelin基因mRNA的保守序列设计特异性引物,通过体外培养绵羊输卵管上皮细胞,提取经17β-雌二醇处理的绵羊输卵管上皮细胞总RNA,并反转录成cDNA,以β-actin基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料法进行实时荧光定量PCR检测。结果显示,绵羊输卵管上皮细胞经17β-雌二醇处理后,Ghrelin基因的表达量有显著性增加,在处理后第6小时表达量达到最高。结论,17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞表达Ghrelin有显著的促进作用,这为后续试验研究打下了良好基础。
- 李秀男高甜智达夫王鑫刘默凝魏薇张钰堃宝淑英曹贵方
- 关键词：绵羊输卵管上皮细胞17Β-雌二醇GHRELIN
- 雌激素受体在间情期绵羊输卵管上皮细胞中的表达被引量：1
- 2017年
- 为探讨膜性雌激素受体GPER(G protein-coupled estrogen receptor 1)及雌激素核受体ERα、ERβ在绵羊输卵管上皮细胞中的表达和定位,探讨三种受体在间情期绵羊输卵管中的表达规律,通过RT-qPCR方法和免疫印迹方法分别检测了三种受体基因mRNA水平和蛋白水平的表达差异;运用免疫组化法对输卵管组织中三种受体基因进行定位并对结果进行光密度值分析。结果,输卵管上皮细胞中GPER相对表达量高于ERα、ERβ(P<0.01),ERα的相对表达量高于ERβ(P<0.05)。免疫组化结果显示,GPER广泛分布于绵羊输卵管上皮细胞中,主要定位于细胞膜及细胞质。而ERα及ERβ主要分布于绵羊输卵管上皮细胞的细胞核。阳性细胞光密度分析结果与荧光定量RT-qPCR的分析结果相一致。上述结果表明,间情期绵羊输卵管上皮细胞中同时存在GPER、ERα、ERβ三种雌激素受体表达,且GPER的平均光密度、mRNA相对表达量最高,ERβ的平均光密度、mRNA相对表达量最低。
- 高甜曹贵方常福厚李秀男
- 关键词：绵羊输卵管上皮细胞雌激素受体蛋白质印迹荧光定量PCR
