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灭蚊真菌-贵阳腐霉Pythium sp.GY1938菌株cDNA文库的构建及鉴定被引量：2: 2017年; 目的构建灭蚊真菌-贵阳腐霉Pythiumsp.GY1938菌株cDNA文库,为进一步筛选和克隆GY1938菌株特异表达基因奠定基础。方法以GY1938菌丝体为材料,液氮研磨法制备总RNA并分离纯化mRNA,应用SMARTer技术将LD-PCR法合成并分级纯化的ds cDNA连接至pSMART2IFD载体,电穿孔法转化至大肠埃希菌HST08,构建GY1938菌株cDNA文库,进行滴度、重组率和重组片段大小等文库质量检测。结果检测GY1938菌株cDNA文库滴度达1.36×106 cfu/ml,重组率为98%,插入片段长度约为300~2 500bp。结论成功构建了较为理想的贵阳腐霉GY1938菌株cDNA文库,该文库可用于新基因的筛选、克隆和功能研究。; 杨平李艳张坤余赟杨亚琼黄世梅李敏惠; 关键词：CDNA 文库真菌

纳豆激酶检测体系的建立及其跨膜转运途径初探: 2016年; 目的建立纳豆激酶（nattokinase,NK）酶联检测体系,探讨其跨膜转运机制。方法采用杂交瘤技术筛选抗NK的单克隆抗体,竞争抑制法鉴定单抗识别的抗原表位,Western Blot测定单抗特异性,双抗夹心ELISA法进行单抗灵敏度测定,Caco-2细胞模型探讨NK跨膜转运机制,生物信息学预测NK穿膜相关序列。结果筛选得到稳定分泌抗体且特异性识别NK的杂交瘤细胞6株,其中3株单抗识别相近的抗原表位,其余单抗识别不同的抗原表位;6株单抗检测NK的最小灵敏度分布为0.78~20.00ng/mL;Caco-2细胞模型显示,胞吞作用不是NK跨膜转运的主要途径;生物信息学提示,NK中含有3段穿膜相关序列。结论基于NK单抗建立的酶联检测体系,可有效监控NK跨膜转运过程,NK可能是依据蛋白转导结构域直接介导而实现其肠道吸收转运。; 李敏惠陈瑜蒋玉亮李艳余赟毛明星林定彪杨亚琼杨平; 关键词：纳豆激酶单克隆抗体跨膜转运蛋白转导结构域

一种基于OmpA的分泌型原核表达载体的构建及应用被引量：1: 2016年; 目的构建大肠杆菌周质分泌型表达载体并验证其表达效果。方法以pUC18-lpp为基础载体,构建含有核糖体结合元件(RBS)、信号肽(OmpA)、多克隆位点(MCS)的分泌型表达载体pUC-OmpA;通过分子克隆获得含有密码子优化的人生长激素(hGH)编码序列的pUC-OmpA-hGH,转化大肠杆菌JM109菌株并验证周质分泌性质。结果经IPTG诱导后,SDS-PAGE、Western印迹分析结果显示周质空间有hGH重组表达产物,分子量约为22kD,大小与预期一致,周质hGH约占菌体总hGH的43%。结论成功构建了基于OmpA信号肽的周质分泌型表达系统,为实现生物活性蛋白的原核表达奠定了基础。; 蒋玉亮兰萍李艳余赟毛明星杨亚琼杨平; 关键词：原核表达信号肽

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在B淋巴瘤细胞株中的敏感性及诱导细胞凋亡机制被引量：2: 2016年; 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在B淋巴瘤细胞株中的敏感性及TRAIL通过线粒体信号通路诱导人B淋巴瘤细胞株Ramos凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,流式细胞术分析细胞线粒体膜电位、细胞表面受体DR4/DR5表达及细胞凋亡率变化,并用Western Blot测定Ramos细胞经TRAIL作用24h后相关凋亡蛋白的表达水平。结果供试的4株B淋巴瘤细胞中,Ramos细胞为TRAIL敏感株,Ramos细胞表面受体DR4/DR5表达水平明显高于TRAIL耐药株;TRAIL抑制Ramos细胞增殖通过诱导细胞凋亡介导;细胞调亡伴随线粒体膜电位明显变化;Western Blot免疫印迹结果显示,药物作用后,细胞内相关凋亡信号分子包括Caspase-9,Caspase-3,PARP蛋白等均明显活化。结论 4株B淋巴瘤细胞株对TRAIL敏感性不同,并与DR4/DR5表达相关;TRAIL抑制Ramos细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起线粒体膜电位明显下降,活化Caspase-9及下游凋亡蛋白;线粒体调亡途径是介导TRAIL诱导Ramos细胞凋亡的途径之一。; 卿晓玲陈自敏陈瑜王洪李艳余赟余小凤尹春莉姚双群田茂岑杨平李敏惠; 关键词：TRAIL B淋巴瘤线粒体途径

细胞焦亡的分子机制及其在感染性疾病中的作用被引量：7: 2017年; 细胞焦亡是一种特异性依赖于caspase-1和/或caspase-11活化的致炎性、程序性细胞死亡方式。模式识别受体识别胞内外致病相关的微生物成分,进而启动机体炎性体信号应答,激活细胞焦亡信号通路,释放IL-1β、IL-18等炎症因子,最终诱导细胞炎性死亡。细胞焦亡与微生物感染所致多种疾病的发生发展相关联,细胞焦亡信号通路相关分子的确定,为相关疾病的治疗提供全新的药物靶点。本文就细胞焦亡的分子机制及其在微生物感染相关疾病中的作用作一综述。; 陈瑜李艳余赟杨亚琼黄世梅王佳杨平李敏惠; 关键词：信号通路感染性疾病

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李艳