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抗犬瘟热高免卵黄抗体的制备及效价的检测被引量：11: 2012年; 为了制备出抗犬瘟热高免卵黄抗体并进行抗体效价检测,以便为抗犬瘟热高免卵黄抗体用于患病犬的临床治疗奠定基础。本研究用自行设计的免疫程序对健康产蛋鸡用犬瘟热和犬细小病毒二联疫苗进行免疫,同时使用卡介苗和白介素-16(IL-16)作为佐剂,用石河子地区患犬瘟热的病犬做组织灭活苗对产蛋鸡进行了强化免疫注射,用IHA(间接血凝)方法进行了卵黄抗体检测,对检测出效价最高的批次用盐析法粗提制备了抗犬瘟热卵黄抗体。结果显示:从疫苗开始注射后第20-102天收集的鸡蛋,其卵黄抗体效价均在1:64以上,可以用于临床治疗,其中第77-84天卵黄抗体效价最高(1:8192)。结论:本研究设计的免疫程序合理,用IHA方法检测出的高效价卵黄抗体可以用盐析法制备出抗犬瘟热高免卵黄抗体。; 王建梅杨娇罗继芬王静梅剡根强刘贤侠高树郭秉娇; 关键词：犬瘟热卵黄抗体

抗犬瘟热高免卵黄抗体IHA检测方法的建立被引量：1: 2012年; 目前检测卵黄抗体的方法很多,但IHA方法具有简便快速的优点,本研究的目的是为了建立抗犬瘟热高免卵黄抗体检测方法。采用犬瘟热病毒和犬细小病毒二联疫苗处理作为疫苗抗原,用犬瘟热病死犬的肝脏部分处理后作为组织抗原,制备敏化绵羊红细胞,用IHA方法确定了犬二联疫苗抗原和犬瘟热病毒组织抗原的最适含量。二联疫苗提取抗原的含量为0.7 mg/mL致敏红细胞时,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶256;而患犬瘟热松狮犬的肝脏组织抗原蛋白浓度为0.5mg/mL,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶128。经过IHA验证,制备的松狮犬瘟热肝组织抗原,蛋白含量0.5 mg/mL 1%致敏红细胞,对应的单抗、鸡血清均出现了凝集,阳性对照也出现凝集,阴性对照未出现凝集。建立的IHA抗体检测方法,为准确检测制备抗犬瘟热高免卵黄抗体的效价奠定了基础。; 王建梅杨娇罗继芬王静梅剡根强刘贤侠高树郭秉娇; 关键词：犬瘟热卵黄抗体 IHA

TALENs和CRISPR／Cas9诱导绵羊成纤维细胞基因组定点双链断裂提高Rad51基因表达量: 2015年; 为检测不同限制性人工核酸内切酶对绵羊成纤维细胞Rad51基因m RNA转录和蛋白表达的影响,本实验将有效切割MSTN(myostatin)基因位点的TALENs和CRISPR/Cas9人工核酸酶电转染到体外培养的绵羊成纤维细胞中诱导产生DNA双链定点断裂,与正常和电转染p Max绿色荧光蛋白报告基因质粒的绵羊成纤维细胞进行对照,采用实时荧光定量PCR和Western Blot方法对不同处理的绵羊成纤维细胞Rad51基因m RNA转录和蛋白质的表达情况进行研究。结果表明:TALENs和CRISPA/Cas9人工核酸酶诱导产生的MSTN基因组DNA双链定点断裂能提高绵羊成纤维细胞Rad51基因表达量。; 杨娇皮文辉周平李炜杰何高明; 关键词：同源重组

三种检测内源性基因修饰方法比较: 2016年; 为获得准确的突变信息,除直接测序外,实验初步确定了3种人工核酸酶生物学活性检测方法。利用Surveyor nuclease、T7E1(T7 Endonuclease 1)和HRM(High resolution melt),均以变性退火突变型和野生型DNA序列形成扭曲的双螺旋DNA(distorted duplex DNA)为基础的3种人工核酸酶生物学活性检测方法,确定目标位点是否发生突变。实验成功检测出作用于绵羊MNST基因第一外显子的CRISPR/Cas9和第三外显子的TALEN目标位点发生突变,并对3种检测方法的结果和特点进行了分析比较,得出3种检测方法的优缺点,为实验室分析确定细胞利用非同源末端连接修复DNA双链断裂结果提供参考。; 李炜杰杨娇何高明王立民皮文辉周平; 关键词：T7 ENDONUCLEASE

电转液L对绵羊成纤维细胞电转染条件优化被引量：3: 2015年; 【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染效率。【结果】通过测定细胞转染效率,得到较佳电转方案:L电转液100μL悬浮绵羊成纤维细胞,采用CZ-167电转程序,质粒浓度4 g,2×106个细胞,电击一次,电转后37℃放置10 min可获得理想的转染效率。; 李炜杰杨娇王聪慧罗健周平黄威姚建龙何高明皮文辉; 关键词：细胞转染转染效率

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杨娇