王海勇
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸡传染性支气管炎疫苗株与广西流行野毒株鉴别方法的建立被引量：7
- 2018年
- 根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)3′端非编码区和S1基因保守区域设计两对特异性引物,对H120、Ma5和4/91、M41等常用疫苗株以及26株广西田间分离株进行二重RT-PCR扩增,并进行该方法的特异性和敏感性试验,同时进行了初步应用。结果表明,经RT-PCR扩增后,M41毒株得到约160bp的目的片段,Mass型毒株得到约370bp的目的片段,4/91型IBV毒株得到约480bp和345bp 2条目的片段,其他24株广西分离株得到1条大小在260bp^345bp的目的片段。特异性试验表明此二重RT-PCR方法不能扩增NDV、AIV、MDV、IBDV、ALV等,敏感性试验表明最低检测量达到100pg。该方法的临床应用表明,攻毒鸡病料阳性率达90%。研究结果表明了所建立的二重RT-PCR方法可以鉴别IBV疫苗株与广西流行野毒株,且特异性强,敏感度高。
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- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒疫苗株野毒株敏感性特异性
- C型禽偏肺病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用被引量：4
- 2018年
- 根据GenBank发表的禽偏肺病毒(aMPV)F基因序列,设计一对特异性引物,建立C亚型aMPV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。对该反应体系进行条件优化,建立了标准曲线,并进行特异性、敏感性及重复性试验,然后将建立的方法应用于临床样品和攻毒样品的检测。结果显示:标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系;建立的方法只能检测出C亚型aMPV,最低可以检测到0.8×10~1拷贝/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于4%。应用建立的方法对43份临床样品检测,结果显示均为阴性;对42份35日龄SPF鸡人工感染后1～21 d的气管和肺脏样品进行检测,结果显示攻毒样品均为阳性。因此,研究建立的特异、灵敏、重复性好的C型aMPV实时荧光定量PCR方法,既可适合于该病的早期诊断和流行病学调查,又为该病毒的致病机制研究提供技术支撑。
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- 关键词：基因SYBR荧光实时定量PCR
- IBV商品疫苗株与广西流行野毒株鉴别方法的建立
- 根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)3'端非编码区和S1基因保守区域设计两对特异性引物,对H120、Ma5和4/91、M41等常用疫苗株以及26株广西田间分离株进行二重RT-PCR扩增,并进行该方法的特异性和敏感性试验,同...
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- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒疫苗株野毒株
- 广西优势血清西优势血清型IBV代表株M基因在杆状病毒系统中的表达被引量：4
- 2017年
- 采用RT-PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西优势血清型代表性毒株GX-YL5的膜(M)蛋白基因,将其克隆至pFastBac^(TM)/HBM-TOPO杆状病毒转移载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rHBM-M;将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒;利用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)鉴定表达的M蛋白。IFA检测可见重组杆状病毒感染后72h细胞出现特异性荧光,Westernblot检测可见大小约为26ku的特异性蛋白带,表明该重组M蛋白在Sf9昆虫细胞中成功获得表达。研究为IBVM蛋白的生物学功能、IBV诊断试剂和新型疫苗制备等奠定基础。
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- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒M基因杆状病毒
- 禽偏肺病毒SYBR GREEN I的实时荧光定量PCR方法的建立与应用
- 引言禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus,aMPV)是火鸡鼻气管炎的病原以及鸡肿头综合征的主要诱因,aMPV感染临床特征为咳嗽、打喷嚏、流鼻涕、眶下窦肿胀、头部肿胀、角弓反张和产蛋下降等。鸡群单一感染a...
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- 禽偏肺病毒SYBR GREEN I的实时荧光定量PCR方法的建立与应用
- <正>引言禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus,aMPV）是火鸡鼻气管炎的病原以及鸡肿头综合征的主要诱因[1],aMPV感染临床特征为咳嗽、打喷嚏、流鼻涕、眶下窦肿胀、头部肿胀、角弓反张和产蛋下降等[2...
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- 文献传递
- 三黄鸡MAVS基因克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】掌握三黄鸡线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)基因的生物信息学,为MAVS基因诱导表达及禽类固有免疫相关机制研究打下基础。【方法】根据Gen Bank中已公布的原鸡MAVS基因序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR扩增三黄鸡MAVS基因,并应用相关生物软件进行序列分析及其蛋白结构预测。【结果】三黄鸡MAVS基因编码区(CDS)全长1926 bp,编码641个氨基酸,与Gen Bank中已发表的原鸡MAVS氨基酸序列(NP_001012911.1)比对,三黄鸡MAVS氨基酸序列在第440、488、506和606位存在4个氨基酸差异,分别为440A→T、488P→L、506I→L和606E→K。三黄鸡MAVS基因与原鸡的相似性最高,达99.0%;与日本鹌鹑的相似性次之,为91.0%;与斑马鱼的相似性最低,仅37.6%。三黄鸡MAVS蛋白分子质量为67.79 ku,理论等电点(p I)为5.04,属于跨膜蛋白,无信号肽序列;其二级结构中折叠占0.5%,无规则卷曲占88.7%,螺旋占10.8%。【结论】三黄鸡MAVS基因序列表现出高度的保守性,可作为今后研究三黄鸡抗病毒机制的重要指标之一。
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- 关键词：三黄鸡克隆生物信息学
- 三黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达
- 2016年
- 【目的】克隆鸡干扰素基因刺激蛋白(STING)胞外区基因并进行原核表达,为了解STING蛋白的生物学功能及探讨禽类的固有免疫机制打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增鸡STING胞外区基因,与原核表达载体p GEX-4T-1连接构建重组表达质粒,再转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行12%SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。【结果】三黄鸡STING胞外区基因全长951 bp,与原核表达载体p GEX-4T-1可成功构建重组表达质粒p GEX-4T-1-STING,转化BL21(DE3)感受态细胞后经1.0 mmol/L IPTG诱导表达4 h,12%SDS-PAGE电泳检测得到一个带GST标签约62 ku的融合蛋白,采用抗GST多克隆抗体进行Western blotting鉴定,约在62 ku处可见一条明显的蛋白印迹条带,表明目的蛋白原核表达正确,且特异性较高。【结论】从三黄鸡外周血淋巴细胞中克隆获得的STING胞外区基因片段可在原核细胞中高效表达,且纯化后的融合蛋白可用于制备鸡STING多克隆抗体。
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- 关键词：三黄鸡克隆原核表达
- 桔百颗粒(乐康宁)对雏鸡感染鸡传染性支气管炎的防治效果被引量：4
- 2016年
- 【目的】评价桔百颗粒(乐康宁)对鸡传染性支气管炎(Ⅲ)的临床防治效果,为利用中药防治IB提供新思路。【方法】将130羽1日龄非免疫雏鸡随机分为桔百颗粒预防组、治疗组、药物对照组、免疫组、模型对照组和健康对照组,免疫组30羽,其他组均为20羽。除健康对照组外,其他组均于15日龄时滴鼻点眼感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41毒株,预防组在感染前5 d(10日龄)饮水给药;治疗组和药物对照组均在发病超过半数时给药治疗;免疫组则在7日龄免疫H120疫苗(免疫后一部分给药,另一部分不给药)。统计感染后各组雏鸡的发病率、保护率、治愈率及呼吸道症状评分,同时统计感染后其体重增长及免疫器官指数,并测定血清IBV特异性抗体。【结果】感染IBV后第8 d(23日龄)统计发现,预防组的保护率为50.00%,免疫不给药组的保护率为45.00%;治疗组的治愈率为66.67%,药物对照组为58.82%;免疫不给药组的呼吸道症状评分最低,预防组和治疗组次之。停药后第12 d(36日龄),治疗组雏鸡的脾脏指数显著高于其他组(P<0.05,下同);感染IBV后第14 d(29日龄),治疗组雏鸡的IBV抗体水平达峰值,感染IBV后第21 d(36日龄)仍维持在较高水平,免疫并给药组的抗体水平显著高于免疫不给药组。【结论】桔百颗粒有效降低IB发病率及治愈患病雏鸡,是通过促进脾脏等免疫器官发育,进而促使机体抗体生成、延长抗体维持时间、增强机体免疫力来实现,尤其对于呼吸理IB具有良好的临床预防和治疗效果。
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- 关键词：鸡传染性支气管炎免疫应答
- 广西地区规模化鸡场禽偏肺病毒感染情况的血清学调查被引量：11
- 2017年
- 为了调查广西禽偏肺病毒(aMPV)的感染情况,本研究于2015年7月~12月期间采集广西南宁(A和B鸡场)和玉林(C和D鸡场)4个规模化鸡场的不同品种、不同周龄的种鸡和肉鸡血清共480份,进行aMPV抗体检测。检测结果显示这4个规模化鸡场的种鸡群在雏鸡阶段aMPV抗体阳性率为15%~66.67%,并且整个产蛋期aMPV抗体阳性率均为90%~100%;所调查的南宁和玉林地区3个鸡场的肉鸡群均存在aMPV感染,玉林地区C场肉鸡群的aMPV抗体阳性率和平均抗体滴度均高于南宁地区A和B场;检测的6个不同品种的种鸡群均存在aMPV感染,其中aMPV抗体阳性率以灵山土鸡和清远麻鸡最高(100%),铁脚麻鸡相对较低,但也高达78%。本研究表明在所调查的广西规模化鸡场鸡群中,aMPV感染普遍,种鸡感染尤为严重,尤其是玉林地区。本研究为aMPV感染的研究和防治积累了数据资料。
- 张丽华李和鸣袁园董志华王海勇唐宁韦平韦天超黄腾磨美兰
- 关键词：血清学调查鸡群
