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三角帆蚌BPI/LBP基因cDNA的分子特征及表达分析被引量：1: 2017年; 杀菌通透性增加蛋白/脂多糖结合蛋白(bactericidal permeability-increasing protein/LPS-binding protein,BPI/LBP)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但是在三角帆蚌中未见其相关的研究。我们采用RACE法获得三角帆蚌BPI/LBP基因c DNA全长(Gen Bank KX363568),该基因序列全长为1 793 bp,5'非编码区(untranslated region,UTR)和3'UTR分别为65 bp和219 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)1 509 bp,共编码氨基酸502个。氨基酸序列包括BPI1和BPI2两个结构域,同源性分析其与一些已知物种的BPI/LBP基因氨基酸发现各物种间具有相似的结构域,属于典型的BPI/LBP基因。q RT-PCR(Quantitative Real-time PCR)分析结果表明BPI/LBP基因表达于血液、肠、肾脏、外套膜、肝、腮、闭壳肌、性腺和斧足9个正常组织,表达量最高的是血液,最低的是肝脏。利用嗜水气单胞菌诱导后检测发现,血液、外套膜变化趋势最为明显,均呈现出先升高再降低的趋势,在3 h或12 h达到最大值,之后开始逐渐下降并趋于稳定,我们推测BPI/LBP基因在三角帆蚌的免疫反应中发挥着重要的作用。; 王芹徐龙威汪桂玲徐智诚李家乐; 关键词：三角帆蚌分子特征

RNA干扰沉默三角帆蚌HcCA3基因对贝类矿化作用的影响被引量：4: 2018年; 为探究三角帆蚌基质蛋白基因HcCA3的功能,本研究根据HcCA3基因的c DNA全长序列,设计并合成特定的干扰链（siRNA）,将干扰链注射到三角帆蚌闭壳肌内,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测HcCA3基因在外套膜不同部位即前端缘膜（amp）、后端缘膜（pmp）和中央膜（mc）的表达变化。在RNA干扰预实验中,筛选了三条目的基因干扰链,其中siRNA-HcCA3-1干扰链干扰效果最好;同时筛选了4条阴性对照链,发现HcCA3基因在注射不同的阴性对照链的各个组织中的表达均呈现不同程度的显著性下降,并没有筛选到合适的阴性对照链。在RNA干扰正式实验中,随着累计注射干扰链si RNA-HcCA3-1,HcCA3基因在前端缘膜和后端缘膜内出现了相似的表达特征,12 d出现了敲降作用（分别为对照组的28%和30%）,HcCA3基因在中央膜中表达从12 d开始显著下降（为对照组的84%）,18 d为对照组的76%。本实验通过累积注射si RNAHcCA3-1,成功的抑制了HcCA3基因在外套膜不同部位的表达,推测该基因参与了贝壳和珍珠的矿化,为进一步研究HcCA3基因的功能提供了基础。; 王芹汪桂玲陈亚王雅昱徐智诚; 关键词：三角帆蚌 HC RNA干扰荧光定量

三角帆蚌HcCA3基因cDNA全序列的克隆及表达研究: 为研究三角帆蚌Hc CA3基因在珍珠形成过程中的作用,利用RT-PCR和RACE方法克隆获得了三角帆蚌Hc CA3基因c DNA全长序列,该基因全长为1653bp,包含90bp的3‘UTR,511bp的5‘UTR和105...; 王芹汪桂玲徐龙威王俊南李家乐; 关键词：三角帆蚌外套膜; 文献传递

三角帆蚌KSPI cDNA的分子特征及表达分析: 2016年; Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(KSPI)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但在三角帆蚌中尚未进行其相关研究与报道,为研究KSPI对三角帆蚌免疫过程的影响,采用RACE法克隆了三角帆蚌KSPI c DNA全序列(登录号:KT901291),获得了1029 bp的全长,其中包含5'、3'端非翻译区分别为61 bp、206 bp,开放阅读框762bp,共编码氨基酸253个,分子质量为27 397.5 u,氨基酸序列包含5个Kazal结构域,与一些已知物种的KSPI编码的氨基酸序列进行同源性分析后发现,与各种物种间具有相似的结构域,属于典型的KSPI。实时荧光定量PCR分析结果表明KSPI在外套膜、血液、肝、腮、闭壳肌、性腺、斧足7个组织中均存在一定的表达量,表达量最高的是外套膜,表达量最低的是肝脏。利用嗜水气单胞菌诱导后检测发现,各个组织呈现出先升高再降低的趋势,在12或24 h达到最大值,之后开始逐渐下降并趋于稳定,推测出KSPI对三角帆蚌的免疫反应发挥重要作用。; 徐龙威王芹汪桂玲李家乐; 关键词：三角帆蚌荧光定量

三角帆蚌碳酸酐酶Ⅳ基因的克隆及表达分析: 2019年; 三角帆蚌碳酸酐酶Ⅳ(carbonic anhydraseⅣ, HcCA4)基因属于α-CA家族,这是一类含Zn2+的金属酶。α-CA家族加速了CO2和HCO3-之间的相互转化,并对软体动物碳酸钙(CaCO3)的形成、酸碱平衡、钙化和生物矿化起重要作用。本研究通过RACE的方法得到了HcCA4的全长cDNA,共3 043 bp,其中3'与5'端的UTR分别为137 bp、2 021 bp和885 bp的ORF (Open reading frame)区,共编码294个氨基酸,分子量为34.086 kD。对HcCA4的氨基酸序列进行同源性分析之后,发现一个完整的α-CA Superfamily结构域,证明HcCA4属于α-CA家族的基因。qRT-PCR结果表明:CA4基因在前端缘膜、中央膜、后端缘膜、斧足、肝、鳃、性腺和肾脏都有表达,在外套膜的前缘膜和中央膜,鳃中具有高表达。鳃是三角帆蚌呼吸器官,推测CA4参与呼吸作用;外套膜是三角帆蚌分泌矿化物质的关键组织,推测HcCA4参与珍珠层形成。; 郭鹏飞吴丛迪王芹汪桂玲李家乐; 关键词：三角帆蚌 QRT-PCR

三角帆蚌碳酸酐酶基因与珍珠颜色和珍珠形成相关初步研究: 三角帆蚌是我国广泛用于育珠的淡水蚌，探索珍珠的形成机理具有重要的生产实践意义。本实验从其转录组库中筛选获得一个碳酸酐酶基因的部分序列，通过RT-PCR和RACE法获得了HcCA3(carbonic anhydrase3 ...; 王芹; 关键词：三角帆蚌碳酸酐酶基因 RNA干扰; 文献传递

三角帆蚌LRR基因的分子特征及表达分析被引量：1: 2018年; 近年来珠蚌养殖业一直饱受病害困扰,现有资料表明富亮氨酸重复序列（leucine-rich repeat,LRR）蛋白在无脊椎动物的蛋白互作、识别过程和免疫反应中都起到至关重要的作用,本实验通过RACE法克隆并表达了三角帆蚌LRR基因,全长为3 492 bp,其中开放阅读框2 142 bp,编码713个氨基酸,其中5个氨基酸组成信号肽,而其余688个氨基酸则形成成熟肽,氨基酸序列经相关软件预测存在跨膜结构。运用荧光定量PCR技术分析LRR在正常组织中及受到嗜水气单胞菌侵染后相关组织表达量的变化,分析发现,在非胁迫状态下,LRR基因在斧足中高表达,在其他组织中几乎不表达。嗜水气单胞菌刺激侵染后可以看到斧足和肝胰腺中LRR基因表达显著下调,而其他组织表达量在不同时间点均出现表达峰值,显示能被显著诱导,说明LRR基因表达可能与抵挡病原体入侵有关。; 徐智诚王芹汪桂玲李家乐; 关键词：三角帆蚌

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王芹