王钰
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：江苏省教育厅自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程更多>>
- 酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究
- 2015年
- 本研究将酿酒酵母穿梭质粒p ESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子,构建了组成型双启动子表达载体p ESCD,再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到p ESCD的Sal I和Xho I酶切位点之间,构建了组成型表达UGT76G1的重组质粒p ESCD-UGT。将p ESCD-UGT转化到酿酒酵母YPH499中进行表达,结果确定该重组酵母在SD-L液体培养基培养24h达到稳定期,菌体培养8h蛋白表达量高,选用1%的甲苯作为重组菌全细胞催化的通透剂时,催化15h产生288mg/L的莱鲍迪甙A,其产量是对照组的5倍。
- 王钰陈量量杜婷李艳严明郝宁许琳
- 关键词：酿酒酵母组成型启动子全细胞催化莱鲍迪甙A
- 拟南芥蔗糖合酶基因合成、重组表达及其在酶催化合成莱鲍迪甙A中的初步应用
- 2015年
- 本研究采用两步PCR的方法,合成拟南芥蔗糖合酶At SUS1的编码基因,并将其亚克隆到携带糖基转移酶UGT76G1基因的表达质粒p ET28a-UGT上,构建了双酶共表达质粒p EUGT-SUS。将质粒p EUGT-SUS转化到大肠杆菌Rossetta(DE3)中,在自诱导培养基中培养12 h,收集细胞超声破碎取其上清液为粗酶液用于催化甜菊甙合成莱鲍迪甙A的反应,结果确定重组酶At SUS1获得了活性表达,在双酶反应体系中,蔗糖和UDP在At SUS1作用下生成UDP-葡萄糖,供给UGT76G1所催化的糖基转移反应。考察了UDP初始浓度、反应pH、温度及反应时间对酶催化RA甙合成的影响。当UDP初始浓度为0.01 mmol/L,pH7.2和35℃反应条件下,反应12 h,10 g/L甜菊甙转化为莱鲍迪甙A的收率最高可达56.2%。为建立高效、经济的合成莱鲍迪甙A的酶催化工艺奠定了基础。
- 杜婷王钰陈量量成采虹李艳陈可泉
- 关键词：基因合成酶催化
