胡志敏
- 作品数：5 被引量：20H指数：2
- 供职机构：山东大学齐鲁医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人PDLIM4基因启动子报告基因载体的构建及其在人类肿瘤细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建人PDLIM4基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-promoter,检测其在不同肿瘤细胞中的表达。方法据Genebank中人PDLIM4基因启动子序列分别设计上下游引物,扩增其启动子片段,并插入到pGL3-Basic报告基因载体,分别得到含有3kb和1.2kb的PDLIM4基因启动子的两个报告基因质粒pGL3-PD-LIM4-3kb和pGL3-PDLIM4-1.2kb。序列为1.2kb的启动子利用Erase-a-base试剂盒,经外切酶Ⅲ从5'端逐步酶切得到5个含不同长度启动子序列的报告基因载体:pGL3-PDLIM4-1.2D1、pGL3-PDLIM4-1.2D2、pGL3-PDLIM4-1.2D3、pGL3-PDLIM4-1.2D4、pGL3-PDLIM4-1.2D5。将构建的报告基因载体分别瞬时转染以下细胞株:Hela、MDA-MB231、KB、PC-3、LNCaP,检测其荧光素酶表达活性。结果所构建质粒经酶切、测序鉴定,其片段长度及序列均正确。转染结果显示,长片段的3kb和1.2kb启动子序列在所测试的细胞株中均有表达,但在人激素非依赖前列腺癌PC-3细胞株、人激素依赖前列腺癌LINCaP细胞株中表达较低。而不同长度的启动子报告基因质粒转染PC-3、LNCaP的结果显示,pGL3-PDLIM4-1.2kb表达活性最强,pGL3-PDLIM4-970bp表达活性最弱。结论成功构建了7个分别含有不同长度的PDLIM4启动子报告基因载体,其在不同的肿瘤细胞株中均有不同程度的表达,而在前列腺癌细胞中表达较低。
- 蒋慧慧胡志敏李先哲席广民蒋汉明苑辉卿
- 关键词：启动子荧光素酶
- 前列腺组织特异性启动子介导的TAT-EGFP的靶向表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建由前列腺特异抗原(PSA)启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列(TAT)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白pPSA-TAT-EGFP表达载体,使TAT所携带的目的蛋白能够在靶组织中高效表达,提高其特异性及表达效率。方法以pEGFP-1载体为模板,设计包含TAT序列的引物,PCR技术扩增含有酶切位点的小片段SalI-TAT-EGFP-Not I,经胶回收纯化,连接到T克隆载体。双酶切及测序鉴定后,提取质粒、双酶切后胶回收得到目的小片段。含有PSA启动子的pPSA-EGFP载体经Sal I和Not I双酶切后,胶回收含有PSA启动子序列的大片段。过夜连接目的小片段与PSA启动子大片段,得到pPSA-TAT-EGFP表达载体。转化、筛选阳性克隆后酶切与测序鉴定。将构建载体分别转染前列腺癌细胞和大肠癌细胞检测其表达情况。结果成功构建pPSA-TAT-EGFP表达载体。转染结果显示其能够在前列腺癌细胞中特异性表达。结论引入了PSA组织特异性启动子的TAT所携带的目的蛋白能够在前列腺癌组织中表达。
- 吉恺王小玲许爱辉胡志敏苑辉卿
- 关键词：蛋白转导结构域增强型绿色荧光蛋白
- 地钱素M抗前列腺肿瘤活性的初步探讨被引量：2
- 2010年
- 目的检测苔藓植物联苄类化合物地钱素M的抗肿瘤活性,并初探其对前列腺癌细胞的作用机制。方法 MTT法检测地钱素M对人白血病细胞株(K562)、人肝癌细胞株(HepG2)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)、人前列腺癌细胞株(LNCaP、DU145及PC-3)和人正常视网膜色素上皮细胞株(hTERT-RPE1)的增殖影响;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测地钱素M对PC-3细胞增殖的作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Westernblot-ting检测细胞周期相关蛋白的表达;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测PC-3细胞核的变化。结果地钱素M可抑制K562、HepG2、MCF-7、LNCaP、DU145、PC-3细胞的增殖,其对PC-3细胞增殖的抑制作用尤为显著,而对hTERT-RPE1细胞增殖的抑制作用较弱。BrdU结果显示,地钱素M能够降低BrdU在PC-3细胞中的掺入;流式细胞术示,地钱素M将PC-3细胞阻滞在G0-G1期,且出现明显的subG1峰,并伴随周期相关蛋白的变化;DAPI示,细胞核发生凋亡的特征性变化。结论地钱素M具有抑制肿瘤细胞增殖的活性,并引起PC-3细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。
- 许爱辉潘喆蒋汉明孔峰胡志敏苑辉卿
- 关键词：细胞周期前列腺癌细胞
- 新鲜全血在不同血细胞分析仪比对试验中的评价被引量：11
- 2009年
- 目的验证不同血细胞分析仪检测结果之间的可靠性和可比性,规范操作血细胞分析仪的比对试验。方法参照国际血液学标准化委员会(ICSH)及美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件,在仪器正常运行的情况下,评价各比对仪器的携带污染率、精密度和总精密度、差异百分率;分析比较20份抗凝新鲜全血中各项指标在不同血细胞分析仪之间的差异;每日取高、中、低3份新鲜血,在各仪器上平行检测,连续比对7日,观察各项指标与参考样机之间的相关性;分析比较仪器分类与手工分类的相关性;通过直线回归方程计算相对偏差,估计每台仪器各检测指标的试验误差。结果除白细胞分类外,各比对仪器携带污染率正常;各检测指标的变异系数以及在不同血细胞分析仪上的总体变异系数均<5%;各检测项目的差异百分率符合ICSH制定的标准;20份样品在不同血细胞分析仪上检测的各项指标经两两比较的q检验(Newman-Keuls法),各配伍组总体均数无统计学差异(P>0.05);连续7日测得的各项指标与参考样机之间的相关系数均大于0.97,其相对偏差在实验允许误差范围内。白细胞分类中,中性粒细胞和淋巴细胞在各比对仪器之间以及仪器与手工分类之间的相关性较好,而嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞和单核细胞,不论在各仪器还是仪器与手工分类之间,都存在较大的试验误差(P<0.05,P<0.01)。结论不同血细胞分析仪检测结果之间的比对试验急需规范化,同一科室的多台血细胞分析仪应定期进行比对,以保证检验结果的准确性。
- 王谦展凤霞郑桂喜王传新胡志敏王洪春
- 关键词：新鲜全血血细胞分析仪
- 没药倍半萜诱导的p21^(WAF/CIP1)蛋白参与抑制前列腺癌细胞增殖被引量：5
- 2008年
- 目的探讨没药的两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法应用细胞增殖实验噻唑蓝(MTT)法检测化合物对人前列腺癌细胞株LNCaP的影响;流式细胞术进一步分析前列腺癌细胞经化合物处理后细胞周期时相的变化;Western blot检测化合物对细胞周期相关蛋白p21WAF/CIP1(p21)和cyclin D表达的影响;利用细胞转染技术检测化合物对cyclin D启动子表达活力的影响。结果两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活力,使细胞停滞于G0/G1期;且能在蛋白水平诱导p21WAF/CIP1的表达,同时降低cyclinD的表达。结论没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞的增殖,可能是通过上调p21WAF/CIP1的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的。
- 王小玲孔峰吉恺蔡捷任凯龚磊胡志敏苑辉卿
- 关键词：没药前列腺癌P21
