- 核糖核酸干扰抑制生存素表达诱导小鼠结肠癌细胞凋亡被引量:4
- 2006年
- 目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Sur- vivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响。方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框;将siRNA表达框与Survivin-绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒(pSurvivin-EGFP)共转染293T细胞,24~48 h后根据荧光强度筛选强效siRNA;再制备其表达质粒转染小鼠结肠癌CT26细胞,应用实时荧光定量(FQ)-聚合酶链反应和蛋白印迹(Western blot)法分析Survivin基因的表达;DNA末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪(FCM)Annexin V/丙化碘锭(PI)双染色法检测细胞凋亡。结果筛选出1段高效抑制Survivin表达的siRNA,可使CT26细胞内Survivin mRNA拷贝数明显减少,抑制率为86.9%;蛋白表达水平亦显著降低;TUNEL检测显示转染48 h后RNA干扰组和对照组凋亡细胞数分别为(60.13±5.71)个和(5.47±0.63)个,两组差异有统计学意义(P<0.01);FCM检测转染后1、2、3、4 d凋亡细胞比率分别为2.1%、4.9%、11.7%和32.6%,对照组4个时间点凋亡率均低于1.5%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论siRNA能有效抑制小鼠结肠癌CT26细胞内Survivin基因表达并诱导结肠癌细胞凋亡。
- 李喆赵平王建军盛援廖小玲戚中田
- 关键词:SURVIVINRNA干扰结肠癌脱噬作用