侯相民
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：兰州交通大学化学与生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程生物学更多>>
- 具有免疫反应性的猪瘟病毒多表位基因在大肠杆菌中的克隆表达和鉴定被引量：1
- 2012年
- 将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX-BT21转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析法纯化目的蛋白和Western blot分析其免疫学活性。结果表明:融合蛋白GST-BT21以可溶形式表达,分子量约为33kDa,与预期大小相符,纯化的重组蛋白可被猪瘟病毒阳性血清所识别,具有良好的免疫学活性。从而为进一步研究该融合蛋白的免疫特性和功能奠定了基础。
- 侯相民田宏尚佑军田永强刘湘涛
- 关键词：猪瘟病毒多表位抗原抗原活性
- 镰形棘豆的化学成分研究被引量：3
- 2010年
- [目的]研究镰形棘豆（Oxytropis falcataBunge）的化学成分。[方法]应用正、反相硅胶柱色谱法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。[结果]从镰形棘豆95%乙醇提取物中分离得到了8种化合物,分别鉴定为β-谷甾醇（1）、柚皮素（2）、5,6-二羟基-2,7,3′,4′-四甲氧基黄酮醇（3）、5,6-二羟基-2,7,4′-三甲氧基黄酮醇（4）、3′,4′,5,7-四羟基双氢黄酮（5）、黄芹素（6）、7α-hydrox-ysitosterol（7）、7-oxositosterol（8）。[结论]化合物28为首次从该植物中分离得到。
- 田永强赵海波刘航田苗侯相民
- 关键词：镰形棘豆化学成分
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：2
- 2011年
- 本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测;并对田间及实验室样品进行符合率试验,对阳性样品进行重复性试验。与常规RT-PCR法进行比较,证明该方法比常规RT-PCR法敏感性提高了10倍;而且利用该方法可使检测时间大大缩短;特异性试验证实该方法无交叉反应;阳性和阴性样本的符合率均为100%;3次阳性样品重复性检测结果完全相同;稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上。本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好,不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断,而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值。
- 吴锦艳田宏尚佑军陈妍魏衍全侯相民赵娜何建辉刘湘涛
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪O型口蹄疫病毒温度敏感突变株部分基因的PCR扩增及序列分析被引量：1
- 2012年
- 根据O型FMDV全基因组序列设计引物,通过PCR扩增得到目的基因,并对猪O型FMDV的强弱毒株基因进行克隆与序列分析。结果表明:扩增得到的O型口蹄疫病毒温度敏感株L、P1、P2、P3(3C、3D)区目的基因片段大小分别为603、2 208、1 464、639、1 410 bp,与预期相符。各区序列拼接后与野生型猪O型FMDV序列比对,两者同源性为88%。
- 刘航杨晓燕侯相民田永强
- 关键词：口蹄疫病毒基因克隆
- 羽叶千里光化学成分及生物活性研究进展被引量：1
- 2011年
- 对羽叶千里光(Senecio argunensis Turcz.)的化学成分、药理作用进行综述,为其进一步开发利用提供理论依据。
- 刘航杨晓燕侯相民
- 关键词：化学成分生物活性
- 猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析
- 2012年
- 体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔。结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9mmol.L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应;兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。
- 田宏侯相民吴锦艳陈妍尚佑军刘湘涛
- 关键词：猪瘟病毒活性分析
- 猪瘟病毒复合多表位抗原基因的克隆表达及其免疫学特性被引量：1
- 2011年
- 为研究猪瘟病毒多表位疫苗,参照GenBank及文献中已发表的猪瘟病毒抗原表位,结合计算机分析软件进行优化和组合。将重组的多表位基因BT23人工合成克隆至pMD18-T质粒中,利用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切并回收BT23基因,将BT23基因片段亚克隆插入pGEX-6P-1表达载体中,构建了猪瘟病毒复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT23,经酶切和测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3),并进行了IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,以终浓度为0.9mmol/L的IPTG进行诱导,8h后表达量最高,表达产物为融合蛋白,并且以包涵体形式存在,分子质量约36ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western-blot检测结果表明,表达的融合蛋白能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,说明表达产物具有良好的反应原性。免疫攻毒试验结果表明,复合多表位融合蛋白具有免疫保护作用,这为应用该融合蛋白制备猪瘟病毒免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗的研究奠定了基础。
- 侯相民田宏吴锦艳陈妍尚佑军刘湘涛
- 关键词：猪瘟病毒活性分析
- 三脉紫菀化学成分的研究被引量：2
- 2011年
- 目的:研究三脉紫菀的化学成分。方法:应用正、反相硅胶柱色谱法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从三脉紫菀甲醇提取物中分离得到了5个化合物,分别鉴定为:β-谷甾醇(1)、柚皮素(2)、木栓酮(3)、表木栓醇(4)、3',4',5,7-四羟基双氢黄酮(5)。结论:化合物2-5为首次从该植物中分离得到。
- 赵海波杨晓燕侯相民刘航
- 关键词：化学成分
