宗工理
- 作品数：21 被引量：10H指数：2
- 供职机构：山东省医药生物技术研究中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学环境科学与工程更多>>
- 双组份信号转导系统MprAB和TrcRS协同调控结核分枝杆菌Rv1057基因表达的分子机制研究
- 目的:研究结核分枝杆菌Rv1057基因受到双组份信号转导系统MprAB和TrcRS协同调控的作用机制。方法:利用EMSA分析MprA和TrcR在体外与目标基因启动子片段的特异性结合能力;通过荧光定量PCR检测目标基因的转...
- 宗工理张佩佩付加芳马军霞钟传青曹广祥
- 关键词：结核分枝杆菌
- 文献传递
- 双组份信号转导系统MprAB和TrcRS协同调控结核分枝杆菌Rv1057基因表达的分子机制研究
- 目的：研究结核分枝杆菌Rv1057 基因受到双组份信号转导系统MprAB 和TrcRS 协同调控的作用机制。方法：利用EMSA 分析MprA 和TrcR 在体外与目标基因启动子片段的特异性结合能力;通过荧光定量PCR 检...
- 宗工理张佩佩付加芳马军霞钟传青曹广祥
- 关键词：结核分枝杆菌
- 一种新型蛋白质表达系统U2‑OS及其应用
- 本发明提供了一种高分泌性二聚体糖蛋白hBMP‑7的癌细胞表达系统，利用癌细胞U2‑OS快速增殖及糖基化修饰系统的特性，通过基因工程技术利用人源癌细胞表达人骨形态发生蛋白hBMP‑7。本发明构建氨基末端含不同信号肽的重组表...
- 付加芳王世立曹广祥宗工理薛俊英
- 文献传递
- 积磷小月菌调控蛋白Mlp21700的异源表达及其与多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子的结合
- 2018年
- 【背景】积磷小月菌(Microlunatus phosphovorus)是重要的聚磷微生物,在好氧条件下积累聚磷酸盐并在厌氧条件分解聚磷酸盐,这个过程可能受到精细的基因调控。【目的】利用凝胶迁移实验(EMSA)分析调控蛋白Mlp21700结合的多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子,找到Mlp21700可能的调控靶点。【方法】以积磷小月菌JN459菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增Mlp21700编码序列,构建重组质粒p ET28a-21700并转化到大肠杆菌Transetta(DE3)菌株,诱导表达后采用非变性方法纯化获得Mlp21700融合蛋白。利用PCR方法分别扩增各个Poly-P代谢基因的启动子,用生物素标记后作为探针。采用EMSA分析Mlp21700在试验条件下是否结合启动子以及结合强度。【结果】DNA测序和酶切验证表明p ET28a-21700携带正确的Mlp21700编码序列。SDS-PAGE分析显示试验条件下Transetta(DE3)菌株大量表达可溶性Mlp21700,纯化的重组Mlp21700蛋白纯度大于90%,含量为0.64 mg/mL。EMSA分析表明在试验条件下Mlp21700能够结合Mlp26610基因ppgk和Mlp44770基因ppx的启动子。【结论】调控蛋白Mlp21700可能参与Mlp26610和Mlp44770基因的转录调控,进而调控Poly-P的分解过程。
- 钟传青王静宗工理姜天翼曹广祥
- 关键词：多聚磷酸盐调控蛋白启动子
- 分枝杆菌Ⅶ型分泌系统的研究进展
- 2018年
- Ⅶ型分泌系统是近年来新发现的一种新型、特殊的分泌系统,最先在结核分枝杆菌中发现.Ⅶ型分泌系统负责分枝杆菌的毒力蛋白分泌,介导分枝杆菌与宿主间发生相互作用,并参与分枝杆菌体内锌铁平衡等,在分枝杆菌的生长代谢及致病过程中发挥重要作用.本文从Ⅶ型分泌系统的基因组成与类型、分泌底物、转运机制及其与菌株致病性的关系等方面,对分枝杆菌Ⅶ型分泌系统的研究进展进行简要综述,为发展用于疾病诊断、治疗和预防的新策略提供依据.
- 付加芳王志宇张佩佩宗工理曹广祥
- 关键词：分枝杆菌基因结构分泌机制
- 转录组分析棒状链霉菌F613-1高产克拉维酸的分子基础被引量：2
- 2017年
- 旨在探究S.clavuligerus工业菌株高产克拉维酸(CA)的分子基础。采用转录组高通量测序,对比标准菌株和高产CA的工业菌株F613-1之间的基因转录水平差异,结合菌株表型差异进行综合分析。结果表型比较显示,F613-1在固体培养基中生长速度、气生菌丝形态、孢子形成等方面与标准菌株存在差异。液体摇瓶培养中,菌体生长速度无明显变化,但F613-1的糖消耗量显著降低,同时CA产量比ATCC27064提高约11.7倍。转录组分析显示,F613-1中CA基因簇及其途径特异性调控基因的表达量显著升高,其副产物全霉素基因簇的表达量显著下降;CA合成原料精氨酸和3-磷酸甘油醛代谢相关基因的转录水平发生显著变化,精氨酸合成代谢基因上调,而3-磷酸甘油醛分解代谢基因下调;ABC转运系统中80多个基因的转录水平也发生明显变化,其中42个显著上调,38个显著下调。工业生产菌株高产克拉维酸的主要原因是CA基因簇及其调控基因表达量的升高、相关副产物基因簇的沉默及CA合成原料精氨酸和3-磷酸甘油醛的积累。
- 覃荣活付加芳宗工理王志宇曹广祥
- 关键词：棒状链霉菌转录组克拉维酸
- 畜禽养殖场附近污水中多粘菌素E耐药性肠杆菌的分离分析及内源质粒检测
- 2017年
- 畜禽养殖业大量使用抗生素引起了广泛的微生物耐药性问题,研究抗生素耐药菌株可以了解环境中细菌的耐药性情况和抗性基因的传播机制。采集畜禽养殖场周边的污水,分析了污水中多粘菌素E耐药性细菌和耐药性肠杆菌的丰度;同时以一株具有较高多粘菌素E耐药水平的肠杆菌R11为例,首先进行16S r DNA测序和抗生素耐药谱分析,然后通过质粒提取、酶切电泳以及脉冲场凝胶电泳(PFGE),分析其内源性质粒等情况。结果表明:在畜禽养殖场周边污水环境中,多粘菌素E耐药性细菌占细菌总数的0.14%~0.35%,多粘菌素E耐药性肠杆菌占肠杆菌总数的1.50%~7.40%,而肠杆菌占细菌总数的1.13%~2.45%,说明肠杆菌可能是携带多粘菌素E抗性基因的主要细菌种类,同时也是养殖业污水中细菌的主要组成部分。16S r DNA序列分析确定R11是一株Enterobacter cloacae,抗生素耐药谱分析R11具有多重耐药性,除对林可霉素敏感外,阿米卡星、四环素和环丙沙星的最小抑菌浓度(MICs)为10μg?m L^(-1),阿莫西林的MICs为25μg?m L^(-1),磺胺甲恶唑的MICs为32μg?m L^(-1),氨苄西林的MICs为40μg?m L^(-1),链霉素的MICs为90μg?m L^(-1),而多粘菌素E的MICs最高,达到96μg?m L^(-1)。质粒提取酶切和PFGE分离鉴定结果显示,R11菌株可能有多个内源性质粒。综上所述,R11菌株具有较高水平的多粘菌素E耐药性,并且具有多重耐药性和多个内源性质粒,对于研究多粘菌素E耐药性机制具有一定的参考价值。
- 钟传青宗工理张超付加芳姜天翼曹广祥
- 关键词：畜禽养殖场肠杆菌多粘菌素E多重耐药性质粒
- 克拉维酸高产菌的诱变育种及发酵工艺研究被引量：3
- 2017年
- 目的为满足从棒状链霉菌突变库中筛选棒酸高产菌株的需求,建立一种新的克拉维酸高产菌株筛选方法。方法以克拉维酸生产菌株—棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)SC51为出发菌株,采用紫外-NTG联合诱变方法,以链霉素抗性作为筛选标记,从不断增加链霉素浓度的平板上,筛选链霉素抗性突变菌株,以此突变菌株为实验菌株,对碳源、氮源、前体三油酸甘油酯和发酵条件进行优化。结果在链霉菌浓度60μg/m L的平板上筛选到链霉素抗性突变菌株SCM0943,效价达到2955μg/m L,且遗传性能稳定;优化的发酵条件下,摇瓶发酵120h,克拉维酸效价可达3437μg/m L,较出发菌株提高49.1%。结论棒状链霉菌的链霉素耐受性与克拉维酸的产量存在正相关性,本试验结果对克拉维酸工业化生产具有很好的参考价值。
- 宗工理钟传青王新圆覃荣活曹广祥
- 关键词：克拉维酸诱变育种突变株
- 双组份信号转导系统MprAB和TrcRS协同调控结核分枝杆菌rv1057基因表达的分子机制被引量：1
- 2017年
- 目的探讨结核分枝杆菌rv1057基因受到双组份信号转导系统MprAB和TrcRS协同调控的作用机制。方法采用凝胶阻滞迁移试验分析MprA和TrcR在体外与目标基因启动子片段的特异性结合能力；荧光定量PCR检测目标基因的转录水平，以H37RvSDS处理组的表达值为1个单位进行倍数变化分析；蛋白质免疫印迹法检测目标基因的表达；通过构建lacZ报告基因检测rv1057启动子不同区域启动转录的能力。统计学处理采用t检验。结果MprA结合trcR启动子；无SDS条件下D981、H37Rv菌株的trcR相对表达量分别为H37RvSDS处理组的1．7和2．5倍，差异有统计学意义（t=18．54，P〈0．05）；有SDS条件下，D981、H37Rv菌株的trcR相对表达量分别为H37RvSDS处理组的1．0和2．1倍，D981菌株的trcR转录水平显著高于H37Rv菌株，差异有统计学意义（t=15．86，P〈0．05）。H37Rv菌株培养过程中加入SDS后trcR的相对表达量变化倍数显著下降，差异有统计学意义（￡一16．99，P〈0．05）；MprA和TrcR都可以结合rv1057启动子并调控其表达；MprA激活rv1057的转录，而TrcR阻遏rv1057的转录。结论MprAB和TrcRS协同调控rv1057基因的表达，环境存在SDS时MprA被激活，阻碍trcR表达并激活r口1057的转录，而无sDs时TrcR阻遏rv1057的转录。
- 宗工理张佩佩付加芳马军霞钟传青曹广祥
- 关键词：分枝杆菌结核
- 结核分枝杆菌Rv1057基因对巨噬细胞感染早期细胞因子表达的影响分析被引量：1
- 2017年
- Rv1057是结核分枝杆菌中唯一的7-折叠片β-螺旋蛋白,其生物学功能尚不清楚。为探讨Rv1057基因在结核分枝杆菌感染初期对巨噬细胞免疫应答的影响,利用Rv1057基因缺失菌株D1057和野生型H37Rv菌株感染巨噬细胞,检测结核分枝杆菌在巨噬细胞内的增殖速度,分析巨噬细胞在感染初期的细胞因子表达量变化。研究结果表明:D1057菌株在巨噬细胞内的活菌数量和增殖速度都显著低于H37Rv,被D1057感染的巨噬细胞中IL-1β、IL-10、TNF-α和IFN-γ表达量显著降低,但IL-8大量表达且无显著差异。上述研究结果证实,缺失Rv1057会降低结核分枝杆菌刺激巨噬细胞产生某些细胞因子的能力,明确了Rv1057基因参与结核分枝杆菌与巨噬细胞之间的免疫应答,为进一步解析Rv1057基因的生物学功能、结核分枝杆菌的致病机制奠定了基础。
- 付加芳张佩佩古苑欣宗工理曹广祥
- 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞存活率细胞因子
