张光亚
- 作品数：7 被引量：14H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市宝山区科学技术委员会科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- OC-STAMP基因过表达载体及稳转细胞系的构建
- 2017年
- 目的构建破骨细胞多次跨膜蛋白(OC-STAMP)基因过表达质粒,体外转染RAW264.7细胞构建稳转细胞系,为进一步研究OC-STAMP的功能提供工具。方法根据NCBI数据库中OC-STAMP基因信息,设计引物,采用PCR扩增其基因片段;运用基因重组方法双酶切目的基因,并将其克隆至含有绿色荧光蛋白(GFP)的p CDH-CMV慢病毒载体,经酶切测序对重组质粒进行鉴定;转染成功构建的质粒至293T细胞中Western blotting验证蛋白过表达情况;采用ps PAX2和p MD2.G两种包装质粒包装p CDH-CMV-oc-stamp重组质粒获得病毒液,病毒感染RAW264.7细胞获得OC-STAMP过表达稳转细胞系,Q-PCR和Western blotting验证蛋白过表达情况。结果酶切和测序鉴定表明成功构建p CDH-CMV-oc-stamp的基因重组质粒;将成功构建的p CDH-CMV-oc-stamp质粒转染至293T,可观察到大量绿色荧光表达;将成功包装获得的病毒液感染RAW264.7细胞后q-PCR及Western blotting结果证实OC-STAMP成功过表达。结论成功构建p CDH-CMV-oc-stamp重组质粒及OC-STAMP过表达的稳转细胞系。
- 袁慧敏何茳萍张光亚张丹丹陈凤玲
- 关键词：质粒构建病毒转染RAW264.7细胞
- 黄连碱促进肝细胞自噬及胆固醇外流改善脂肪肝的脂质蓄积被引量：12
- 2021年
- 目的:用油酸和棕榈酸处理HepG2细胞构建脂肪肝细胞模型,观察黄连碱(COP)对脂肪肝细胞中脂质蓄积的影响及其作用机制。方法:采用100μmol/L油酸和50μmol/L棕榈酸诱导HepG2细胞脂肪变性形成细胞内脂质蓄积,构建脂肪肝细胞模型;通过CCK8检测不同浓度的黄连碱对HepG2细胞增殖活性的影响,设置4组细胞模型:对照组、脂肪肝细胞模型组(FFA组)、COP+HepG2组以及COP+FFA组;通过RT-PCR和Western blotting检测3组细胞的自噬基因LC3Ⅰ/Ⅱ、ATG5及胆固醇外流介导因子ABCA1 mRNA及蛋白水平的表达变化;采用油红O染色观察对照组、FFA组和COP+FFA组3组细胞的脂滴变化。结果:油红O染色结果显示相较于对照组,HepG2细胞经过油酸和棕榈酸共同处理后的FFA组细胞内脂质明显增多;而COP+FFA组中细胞的脂滴明显减少。CCK8结果显示0~25μmol/L的黄连碱对HepG2细胞活性无明显影响(P>0.05)。Western blotting与RT-PCR结果显示:相对于对照组,FFA组细胞自噬以及胆固醇外流ABCA1水平明显降低,而COP+HepG2组自噬基因LC3Ⅰ/Ⅱ和ATG5以及ABCA1表达水平明显升高;相对于FFA组,COP+FFA组细胞中脂质蓄积明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01),且自噬与胆固醇外流障碍也被改善。结论:黄连碱可通过促进HepG2细胞自噬及胆固醇外流,减少油酸与棕榈酸诱导形成的脂肪肝细胞中的脂质蓄积。
- 沈敏燕胡曦朱静张光亚毛子明陈凤玲
- 关键词：非酒精性脂肪肝胆固醇外流黄连碱HEPG2细胞自噬
- microRNA-152对影RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积的响及其靶基因验证
- 2017年
- 目的探讨micro RNA-152(mi R-152)对ox-LDL刺激下的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及其靶基因的确定。方法小鼠RAW264.7巨噬细胞分为两组,mi R-152组和阴性对照组。ox-LDL刺激两组细胞48 h后,酶荧光学法测定各组细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、胆固醇酯(cholesterolester,CE)的含量和TC/CE比例。生物信息学方法、双荧光素酶报告及实时荧光定量PCR和Western blot证实mi R-152的下游靶基因。结果与对照组相比,mi R-152组巨噬细胞内TC和CE含量增加,CE/TC的比值明显升高;并且,mi R-152组ABCAl的m RNA和蛋白表达水平较对照组明显降低。结论 mi R-152能够促进ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积,其机制可能与靶向调控ABCA1有关。
- 庞琦张光亚刘卉芳
- 关键词：ATP结合盒转运体A1巨噬泡沫细胞
- 提高UFBP1蛋白K267位点的UFM1化修饰的试剂在代谢相关脂肪性肝病中的应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体是提高UFBP1蛋白K267位点的UFM1化修饰水平的试剂在制备预防和/或治疗代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)药物中的应用。本发明首次揭示了提高UFBP1K267的UFM1化修饰水平的试剂可特...
- 陈凤玲毛子明张光亚朱静
- 黄连碱对人脐静脉内皮细胞内质网应激的影响被引量：1
- 2019年
- 目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内质网应激细胞模型,观察黄连碱对HUVECs以及内质网模型细胞生长活性的影响,对CHOP、GRP78基因以及蛋白表达的影响。方法:使用10μg/mL的衣霉素诱导HUVECs 18 h后,加入不同浓度的黄连碱再处理24 h。CCK8法检测不同浓度黄连碱对HUVECs的活性影响以及黄连碱对衣霉素诱导后的HUVECs的活性影响;采用RT-RCR法比较各组细胞中CHOP、GRP78的mRNA的表达情况;采用Western blotting和细胞免疫荧光法比较各组细胞中CHOP,GRP78的蛋白表达情况。结果:随着黄连碱浓度的增加,在1~20μmol/L范围内的黄连碱对HUVECs的活性无影响,浓度为20μmol/L黄连碱作用24 h后,对衣霉素诱导的HUVECs活性具有保护作用(P<0.01)。加入衣霉素诱导18 h,HUVECs中CHOP、GRP78 mRNA水平的表达增高(P<0.01),再加入黄连碱继续诱导24 h后,黄连碱可以抑制衣霉素所诱导的HUVECs中CHOP、GRP78 mRNA水平的表达增高(P<0.01)。加入衣霉素诱导18 h,HUVECs中CHOP、GRP78蛋白水平的表达增高(P<0.01),再加入黄连碱继续诱导24 h后,发现黄连碱可以抑制衣霉素所诱导的HUVECs中CHOP、GRP78蛋白水平的表达增高(P<0.01),与衣霉素诱导组相比数据具有统计学意义,细胞免疫荧光染色结果与Western blotting结果相似。结论:黄连碱可以减轻由衣霉素诱导的HUVECs过度内质网应激反应,并可提高受损细胞的活性;并可通过下调CHOP、GRP78的表达改善HUVECs过度内质网应激反应。
- 胡曦沈敏燕朱静张光亚毛子明陈凤玲
- 关键词：黄连碱衣霉素HUVECS内质网应激
- GRP78基因过表达载体的构建及在人脐静脉内皮细胞的表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因过表达质粒,体外转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并观察其表达和定位。方法根据Pub Med数据库中GRP78基因信息,设计引物,采用PCR扩增其基因片段;运用基因重组方法双酶切目的基因,并分别将其克隆至含有绿色荧光蛋白(GFP)的p LVX-IRES-Zs Green1载体以及含有Flag标签的CMV-10载体,经酶切、测序对重组质粒进行鉴定。转染成功构建的质粒至HUVECs,免疫荧光染色法观察蛋白表达和定位,Western blotting验证蛋白过表达情况。结果酶切和测序鉴定表明成功构建p LVX-GRP78-IRES-Zs Green1以及CMV-Flag-GRP78的基因重组质粒;将成功构建的p LVX-GRP78质粒转染至HUVECs,可观察到大量绿色荧光表达;将成功构建的Flag-GRP78质粒转染至HUVECs,免疫荧光检测表明Flag-GRP78蛋白表达定位于内质网;Western blotting证实p LVX-GRP78和Flag-GRP78成功过表达。结论成功构建p LVX-GRP78、Flag-GRP78重组质粒,转染HUVECs并观察到其内质网定位。
- 李园园张光亚陈凤玲
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78质粒构建人脐静脉内皮细胞内质网
- 提高UFBP1蛋白K267位点的UFM1化修饰的试剂在代谢相关脂肪性肝病中的应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体是提高UFBP1蛋白K267位点的UFM1化修饰水平的试剂在制备预防和/或治疗代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)药物中的应用。本发明首次揭示了提高UFBP1K267的UFM1化修饰水平的试剂可特...
- 陈凤玲毛子明张光亚朱静
