张晓春
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- EGFR靶向shRNA真核表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建干扰表皮生长因子受体(EGFR)的pSilencerTM-EGFR表达质粒,转染入非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为观察对EGFR的沉默效应奠定基础。方法①根据人类EGFR的mRNA序列,设计4条干扰片段,以pSilencerTM2.1-U6-hygro质粒为载体,构建shRNA重组体,转化入DH5α大肠杆菌,提取质粒,进行酶切和测序鉴定;②采用脂质体2000分别转染人类非小细胞肺癌细胞株A549,用潮霉素(Hygromycin B)筛选阳性克隆。结果①经酶切及测序鉴定,成功构建了针对EGFR的4种重组干扰质粒,分别命名为pSilencerTM-EGFRⅠ、pSi-lencerTM-EGFRⅡ、pSilencerTM-EGFRⅢ和pSilencerTM-EGFRⅣ;②成功转染A549细胞,经筛选后得到稳定表达的细胞克隆。结论利用RNAi技术原理成功构建针对EGFR的shRNA重组质粒,并转染入A549细胞。
- 潘泽政杨小红贺慧为张晓春李金生
- 关键词：表皮生长因子受体RNA干扰转染
- RNA干扰单独及联合p53基因对肺癌细胞增殖的抑制作用被引量：3
- 2006年
- 目的观察RNA干扰技术单独及联合p53基因对肺癌细胞增殖的影响。方法用阳离子脂质体Lipo-fectamine2000分5组介导RNA干扰质粒和p53基因单独或共转染到非小细胞肺腺癌细胞系A549细胞,观察转染后第1、3、5、7天该细胞的增殖活力,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定吸光度(A),以检测细胞增殖活力。结果各组A均值分别为:空白对照组:1.406,脂质体组:1.238,RNA干扰质粒组:0.168,p53组:0.22,干扰质粒+p53组:0.109,实验组与对照组比较差异显著(P<0.05),以共转染干扰质粒+p53组最强。结论RNA干扰技术可成为有效抑制非小细胞肺腺癌的治疗新方法,联合抑癌基因p53可增强其对肺癌细胞的抑制作用。
- 杨晓红万福生潘泽政余波贺慧为艾春红张晓春卢小澍
- 关键词：RNA干扰P53基因肺肿瘤基因治疗
