朱丹
- 作品数：5 被引量：7H指数：3
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- 一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用被引量：5
- 2018年
- 目的采用一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和Na F(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1、2、4 mmol/L)单独染毒组及L-NIO(1、2、3、4、5、10μmol/L)单独染毒组,染毒48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组、Na F(0.2、1 mmol/L)单独染毒组、Na F和L-NIO联合染毒组(0.2 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO和1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO),染毒48 h后,检测细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平及细胞凋亡情况以及细胞培养液中一氧化氮(NO)含量和NOS活力。结果与对照组相比,0.02~4 mmol/L Na F染毒组及4~10 mmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,仅0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平升高,除0.2 mmol/L Na F染毒组e NOS蛋白的表达水平外,差异均有统计学意义(P<0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,仅1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较高。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论过量氟可致大鼠原代海马神经细胞NOS活力上升,NO合成增强,导致氧化损伤及细胞凋亡;L-NIO可以拮抗过量氟引起
- 朱丹刘宇平桂传枝官志忠
- 关键词：氟中毒海马神经细胞内皮型一氧化氮合酶一氧化氮
- L-NIO拮抗过量氟暴露引起的大鼠原代海马神经细胞NO/eNOS表达水平升高及毒性作用
- 目的:为深入研究氟中毒神经损伤的发病机制,本实验在前期实验基础上选用体外培养原代海马神经细胞,并复制氟中毒细胞模型,探讨内皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)抑...
- 朱丹
- 关键词：氟中毒一氧化氮内皮型一氧化氮合酶
- 文献传递
- 7-硝基吲唑对氟致SH-SY5Y细胞凋亡及一氧化氮合成酶含量的影响被引量：3
- 2017年
- 目的探讨神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对氟致体外培养细胞生长、凋亡保护作用的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度Na F(0、0.02、0.2、2.0、4.0 mmol/L),分别培养24、48、72 h,同时在各组细胞培养液中联合应用7-NI(10^(-4)、10^(-3)、10^(-2) mmol/L);于倒置显微镜下观察细胞生长,以CCK-8试剂盒方法检测细胞存活率,以比色法和硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量及NOS活力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组比较,氟浓度为0.2 mmol/L(低氟组)和2.0 mmol/L(高氟组)时,24、48、72 h后细胞存活率分别下降至(83.76±1.04)%,(70.27±1.20)%,(54.40±0.98)%和(52.17±1.07)%,(40.60±1.11)%,(29.50±1.40)%。10^(-4)mmol/L 7-NI可刺激细胞增殖,24 h细胞存活率为(105.96±3.44)%;10^(-3) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后的细胞存活率为(100±2.30)%;10^(-2) mmol/L 7-NI可使细胞存活率下降,24 h细胞存活率为(88.64±4.75)%。10^(-4)、10^(-3)、10^(-2) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后细胞培养液中NO含量、NOS活力均降低,分别为(1.156±0.356)、(0.958±0.074)、(0.672±0.188)μmol/L和(0.403±0.089)、(0.398±0.010)、(0.103±0.076)U/ml。高剂量(10^(-2) mmol/L)7-NI组的SH-SY5Y细胞凋亡指数升高至(8.7±2.3)%,高于对照组(P<0.05);低剂量(10^(-4)、10^(-3) mmol/L)7-NI组的凋亡指数分别为(0.6±0.4)%和(1.0±0.2)%,与对照组差异无统计学意义(P>0.05);低剂量7-NI组凋亡指数低于高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。染氟24、48、72 h后细胞培养液中NO含量及NOS活力升高,低氟组的NO含量、NOS活力分别为(3.074±0.160)、(5.604±1.374)、(10.173±1.307)μmol/L和(0.743±0.122)、(0.959±0.054)、(1.446±0.12)U/ml,高氟组分别为(8.974±0.919)、(14.729±1.241)、(20.976±0.712)μmol/L和(1.086±0.024)、(1.728±0.130)、(2.583±0.192)U/ml,高于对照组[(1.320±0.280)、(2.420±0.658)、(2.867±0.662)μmol/L,(0.452±0.012)、(0.51
- 邓明芬朱丹桂传枝官志忠
- 关键词：人神经母细胞瘤细胞7-硝基吲唑一氧化氮细胞凋亡
- L-亚氨基乙基鸟氨酸与过量氟共培养对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞一氧化氮／内皮型一氧化氮合酶表达的影响被引量：2
- 2018年
- 目的 探讨内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）特异性抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸 （L-iminoethyl ornithine hydrochloride，L-NIO）对氟致体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡、eNOS mRNA和蛋白表达以 及一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）活性改变的影响。方法 将体外培养的 SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、L-NIO组、低氟 ＋ L-NIO组、高氟 ＋ L-NIO组，n = 3。对照组加入与实验组等体积的 培养液，低氟组和高氟组加入氟化钠（sodium fluoride，NaF）浓度分别为0.2、2.0 mmol／L，L-NIO组加入3 μmol／L L-NIO， 低氟 ＋ L-NIO组和高氟 ＋ L-NIO组分别加入0.2 mmol／L NaF和3 μmol／L L-NIO、2.0 mmol／L NaF和3 μmol／L L-NIO，培养时 间为48 h。采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测细胞中eNOS蛋白表达水平，实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR）法检测细胞中eNOS mRNA表达水平，流式细胞仪检测细胞的凋亡情况，硝酸还原酶法和比色法检测细胞培养液 中NO含量和NOS活性。结果 与对照组（1.000 ± 0.026）比较， 低、高氟组eNOS蛋白表达量（1.108 ± 0.071、1.349 ± 0.057 ）升高，L-NIO组（0.755 ± 0.148）下降（P均 〈 0.05）；与低氟组比较，高氟组升高，低氟 ＋ L-NIO组（0.802 ± 0.115）下 降（P均 〈 0.05）；与高氟组比较，高氟 ＋ L-NIO组（0.988 ± 0.135）下降（P 〈 0.05）。与对照组（1.000 ± 0.018）比较， 低、高氟组eNOS mRNA表达量（1.809 ± 0.099、2.416 ± 0.295）升高，L-NIO组（0.609 ± 0.077）下降（P均 〈 0.05）；与低 氟组比较，高氟组升高，低氟 ＋ L-NIO组（1.040 ± 0.034）下降（P均 〈 0.05）；与高氟组比较，高氟 ＋ L-NIO组（1.233 ± 0.152）下降（P 〈 0.05）。与对照组［（1.66 ± 0.07）％］比较，低、高氟组细胞凋亡率［（8.81 ± 0.27）%、（1
- 朱丹刘宇平桂传枝官志忠
- 关键词：人神经母细胞瘤细胞一氧化氮
- 氟及7-NI共培养的SH-SY5Y细胞nNOS表达、增殖情况观察被引量：4
- 2017年
- 目的观察氟及神经型一氧化氮合成酶(nNOS)特异性抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)共培养的SH-SY5Y细胞增殖情况和nNOS表达变化。方法将体外培养SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、7-NI组、低氟+7-NI组、高氟+7-NI组,每组6个复孔。低氟组加入0.2 mmol/L Na F,高氟组加入2.0 mmol/L Na F,7-NI组加入1μmol/L 7-NI,低氟+7-NI组加入0.2 mmol/L Na F和1μmol/L 7-NI,高氟+7-NI组加入2.0 mmol/L Na F和1μmol/L 7-NI,对照组加入等体积培养液,继续培养24 h。采用CCK-8法检测各组SH-SY5Y细胞增殖情况(以OD450表示);采用实时荧光定量PCR法检测各组SH-SY5Y细胞NOS mRNA;采用Western blotting法检测各组SH-SY5Y细胞NOS蛋白。结果低氟组、高氟组细胞OD450均低于对照组(P均<0.05),且高氟组细胞OD450低于低氟组(P<0.05);7-NI组细胞OD450与对照组相比P>0.05;低氟+7-NI组细胞OD450高于低氟组(P<0.05);高氟+7-NI组细胞OD450高于高氟组(P<0.05)。低氟组、高氟组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.05),且高氟组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均高于低氟组(P均<0.05);7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05);低氟+7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于低氟组(P<0.05);高氟+7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于高氟组(P<0.05)。结论氟可以抑制SHSY5Y细胞增殖,7-NI共培养可以减轻氟对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用。
- 邓明芬朱丹桂传枝官志忠
- 关键词：氟氟中毒人神经母细胞瘤细胞7-硝基吲唑
