梁晓鹏
- 作品数：9 被引量：32H指数：4
- 供职机构：沈阳医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 兔骨髓间充质干细胞定向诱导移植修复关节软骨的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的:通过诱导兔骨髓间充质干细胞(MSCs),观察干细胞向软骨细胞的分化效果。方法:纯化兔骨髓间充质干细胞;用含转化生长因子β1的诱导液培养骨髓间充质干细胞;以MTT测定诱导细胞的增殖活性;免疫组化检测Ⅱ型胶原蛋白的表达;诱导后的细胞移植于白兔膝关节内,X线摄片观察软骨修复形成情况。结果:诱导液可有效诱导MSCs向软骨细胞表型转化,且骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化所需的特异性细胞外基质——Ⅱ型胶原明显升高,移植后效果明显。结论:兔骨髓间充质干细胞定向诱导后移植修复关节软骨是有效的。因此骨髓间充质干细胞有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源。
- 梁晓鹏田力李娜汪卓田晓晔范妮娜
- 关键词：软骨细胞骨髓间充质干细胞转化生长因子Β1
- VEGF-165基因修饰的MSCs诱导分化后治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨VEGF-165基因联合单纯骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)治疗激素性股骨头坏死的可行性。方法:1)体外分离、培养兔MSCs,纯化并鉴定兔MSCs;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPcDNA3.1-hVEGF165∶3μl阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过ELISA检测转染后细胞中外源性VEGF的表达。2)测定在正常条件培养和成骨条件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平。3)实验动物连续三天大剂量(40mg/kg)臀部肌肉注射甲泼尼龙琥珀酸钠,通过MRI和组织病理学检查,建立动物模型。4)随机分成4组,每组14只。经皮穿刺于右侧股骨头,(1)生理盐水组,(2)单纯MSCs组,(3)hVEGF165基因转染MSCs组,(4)诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组。8周后,组织病理学检查成骨和细胞成活情况。结果:1)hVEGF165基因转染的MSCs能成功分泌VEGF蛋白。2)成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组(P<0.05);而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低。3)成功建立ANFH模型。4)组织学评分:生理盐水组1.8±0.72;单纯MSCs组8.54±0.37;hVEGF165基因转染MSCs组11.96±0.26;诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组13.7±0.43,各组间差异有显著性(P<0.05)。诱导分化转基因干细胞组与单纯干细胞组和生理盐水组之间差异非常显著(P<0.01)。结论:诱导分化后的hVEGF165基因转染MSCs组成骨能力更好,修复股骨头缺血性坏死的能力也是最强。
- 田力田晓晔范妮娜梁晓鹏于鑫琛
- 关键词：股骨头缺血性坏死骨髓间充质干细胞诱导分化
- 人血管内皮生长因子165基因转染兔骨髓间充质干细胞的蛋白表达
- 2011年
- 背景:骨髓间充质干细胞是最好的组织工程种子细胞来源,含有血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)不仅对血管再生和启动成骨修复有重要意义,其持续稳定的释放还能够提高新生骨的矿化程度,增强修复组织的力学性能。目的:观察hVEG F165基因转染的兔骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子的蛋白功能。方法:体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,纯化并鉴定兔骨髓间充质干细胞;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后的骨髓间充质干细胞以pcDNA3.1-VEGF165质粒和脂质体1:3比例的混合液转染,并分为3组:转染组应用pcDNA3.1-VEGF165转染细胞,空载体转染组应用pcDNA3.1-空载体转染,未转染组不处理。通过ELISA和Western-blot检测转染后细胞中外源性血管内皮生长因子的表达。结果与结论:转染组与其他两组比较,VEGF165蛋白含量显著增高,差异有显著性意义(P<0.05),但空载体转染组与未转染组之间差异无显著性意义(P>0.05),转染组不同时间点之间VEGF165蛋白含量差异均有显著性意义(P<0.05),hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF165蛋白。提示采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF165。
- 田力梁晓鹏田晓晔于鑫琛田晶
- 关键词：血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞质粒蛋白
- 地塞米松联合脂多糖诱导股骨头坏死模型的构建被引量：10
- 2011年
- 背景:对于研究股骨头坏死的发病机制及治疗方法,建立与股骨头坏死病程相似的动物模型是非常重要的。目的:观察地塞米松联合脂多糖诱导兔股骨头坏死的实验效果。方法:健康雄性新西兰大白兔30只,随机分为模型组(n=20)和对照组(n=10)。模型组经耳缘静脉注射2次10μg/kg的脂多糖,再肌肉注射3次地塞米松25mg/kg,对照组注射同等剂量的生理盐水。结果与结论:4周后,CT扫描显示模型组兔股骨头不同程度的骨密度不均匀。显微CT观察发现,模型组骨体积分数、骨矿物质密度、骨矿物质含量和骨小梁厚度均显著低于对照组,而骨小梁间隙高于对照组(P<0.05)。组织学切片见模型组骨细胞陷窝空疏,脂肪细胞增多,部分血管栓塞,其中存活动物的骨坏死率和骨陷窝空虚率均明显低于对照组。说明地塞米松联合脂多糖可有效建立骨坏死模型。
- 田力梁晓鹏田晓晔于鑫琛田晶
- 关键词：股骨头坏死地塞米松脂多糖组织学切片
- 骨髓间充质干细胞在诱导液条件下向软骨细胞的定向诱导分化被引量：3
- 2008年
- 背景:骨髓间充质干细胞易于从骨髓中分离,来源取材方便,对供体损伤小,具有强大的增殖能力及多向分化潜能,便于自体移植,如能成功诱导为软骨细胞将是软骨组织工程理想的种子细胞。目的:观察体外诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化,并对分化后细胞进行鉴定。设计、时间及地点:细胞形态学、蛋白质组学的比较观察于2005-05-03/2007-12-30在沈阳医学院临床中心实验室完成。材料:骨髓间充质干细胞来源于二三个月龄新西兰健康大白兔,体质量2～2.5kg。方法:采用全骨髓法分离培养兔骨髓间充质干细胞。取生长良好的细胞第4代细胞消化传代,以1×105密度接种于24孔板中将生长状态良好的细胞在含有地塞米松、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C及转化生长因子β的培养液中诱导分化。主要观察指标:采用免疫组化的方法进行细胞鉴定,RT-PCR法检测诱导分化细胞II型胶原的表达。结果:骨髓间充质干细胞经成骨诱导后,由长梭形变为椭圆形及肾形。免疫组织化学方法显示所培养间充质干细胞不表达CD34、CD45,但CD105显阳性。骨髓间充质干细胞在未经诱导时不表达Ⅱ型胶原蛋白,经诱导后在500～750bp之间可见明显条带。结论:骨髓间充质干细胞经含地塞米松、碱性成纤维细胞生长因子维生素C及转化生长因子β等培养液诱导后,可以在体外向软骨细胞转化,高表达Ⅱ型胶原,并经细胞形态学及蛋白质组学RNA水平鉴定验证。
- 田力梁晓鹏田晓晔汪卓李娜
- 关键词：间充质干细胞
- MSCs定向诱导分化为软骨细胞实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的:体外诱导骨髓间充质干细胞(MSC)向软骨细胞定向分化,并对分化后的细胞进行鉴定方法:由健康兔子骨髓中分离出MSC,取第4代细胞进行实验。鉴定后,将细胞在地塞米松,bFGF,维生素C及TGF-B等诱导下分化后,通过RT-PCR检测Ⅱ型胶原(ColⅡ)的表达结果:诱导分化后的MSC可表ColⅡ的mRNA。结论:MSC在地塞米松,bFGF,维生素C及TGF-B等诱导后,可分化为软骨细胞。
- 田力范妮娜田晓晔梁晓鹏汪卓李娜
- 关键词：间充质干细胞软骨细胞分化
- 骨髓间充质干细胞定向诱导移植修复关节软骨(英文)被引量：5
- 2009年
- 背景:骨髓间充质干细胞在不同诱导条件下具有向中胚层组织细胞如成骨细胞、成软骨细胞、肌细胞、脂肪细胞等分化的能力。目的:验证用组织工程方法诱导分化骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨损伤的效果。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-05-03/2007-12-30在沈阳医学院临床中心实验室完成。材料:20只两三月龄的健康新西兰白兔,雌雄不限。方法:①诱导分化体外培养的兔骨髓间充质干细胞。实验组加入地塞米松、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C培养1周,再将转化生长因子β替换碱性成纤维细胞生长因子培养3周;以不加诱导剂细胞做对照。②取20只兔,建立膝关节软骨缺损模型,随机分为3组。实验组10只膝关节内植入经诱导的骨髓间充质干细胞;对照组植入未经诱导的骨髓间充质干细胞;空白对照组植入生理盐水。分别于术后2,4,6,8周时处死实验组处死2只,对照组和空白对照组各处死1只进行各项指标检测。主要观察指标:①细胞形态学。②碱性磷酸酶活性的测定。③大体标本观察。④X射线观察。⑤组织切片观察。结果:①经诱导的骨髓间充质干细胞,细胞形态发生明显变化,逐渐由长梭形变为多角形,类似于软骨细胞样形态。②骨髓间充质干细胞经诱导4周后,其碱性磷酸酶活性明显增强(P<0.05)。③术后8周,实验组标本修复组织表面光滑,与周围软骨间界限模糊不清;X射线表现为关节间隙变宽,软骨下骨质囊变得到改善;组织切片观察显示与正常软骨细胞基本上一致。结论:自体间充质干细胞移植可修复关节软骨损伤。
- 田力范妮娜田晓晔梁晓鹏汪卓李娜
- 关键词：骨髓间充质干细胞软骨关节
- 体外非接触性共培养对MSC向软骨细胞诱导分化的实验观察被引量：8
- 2008年
- 目的:探讨骨髓基质干细胞(MSCs)与软骨细胞体外非接触性共培养成软骨的可行性。方法:分离、培养、扩传兔MSCs及软骨细胞,MSCs以1×105个/ml接种于共培养板内孔,第1代软骨细胞以1×104个/ml接种于共培养板外空板。48h后将内孔插如外孔中,补充全培养基覆盖于MSC细胞层上。以相同密度MSC单独培养为空白对照,观察共培养7d和14d流式细胞仪观察MSC的Ⅱ型胶原蛋白变化情况。结果:实验空白组在7d和14d,Ⅱ型胶原蛋白均阴性表达,符合MSC特性。非接触共培养1周后,Ⅱ型胶原蛋白阳性表达,与空白对照比较,P<0.01,具有统计学意义;非接触共培养2周后,Ⅱ型胶原蛋白也阳性表达,与空白对照比较,P<0.01,同样具有统计学意义;实验14d组与实验7d组比较,P<0.01,具有非常显著性差异。结论:软骨微环境在MSCs成软骨分化及体内软骨形成中具有重要作用,软骨细胞能有效地诱导MSCs向软骨细胞分化并促进MSCs体内软骨形成。
- 田力梁晓鹏汪卓李娜田晓晔范妮娜
- 关键词：骨髓基质干细胞软骨细胞
- MSCs定向诱导移植修复关节软骨的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的用组织工程方法修复软骨损伤。方法兔骨髓间充质干细胞体外扩增诱导分化后,移植于兔关节损伤区,术后进行大体及x线观察。结果实验组移植8周后,软骨损伤区由透明软骨样组织填充,软骨修复良好。结论自体间充质干细胞移植可修复关节软骨损伤。
- 田力梁晓鹏范妮娜田晓晔汪卓李娜
- 关键词：骨髓间充质千细胞软骨关节
