赵佳
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：大连医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株的建立被引量：1
- 2011年
- 本研究目的建立过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株(K562-HMGB1)及不表达该蛋白的对照细胞株(K562-pcDNA3.1),为研究hm gb1基因在白血病发生及进展中的作用与机制建立基础。从U937白血病细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA。以cDNA为模板应用PCR技术扩增hm gb1编码基因,将其连接入PMD18-T vector(PMD18-T-HM BG1vector),并转化至大肠杆菌DH5a中。对氨苄青霉素筛选的阳性克隆进行扩增、质粒抽提,应用限制性内切酶KpnI/XhoI酶切鉴定,最终应用DNA测序得到序列正确的阳性克隆;然后将PMD18-T-HM BG1vector克隆中的hm gb1基因应用限制性内切酶KpnI/XhoI切出,并连接入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到重组质粒pcDNA3.1-HM BG1。将pcDNA3.1-HM BG1、pcDNA3.1质粒分别电转染至K562细胞,电转染后48小时后加入终浓度800μg/m l的G418进行药物加压筛选,2周后得到有效转染pcDNA3.1-HM BG1及pcDNA3.1载体的K562细胞株(K562-HM BG1,K562-pcDNA3.1)。通过RT-PCR和W estern b lot技术分别在转录及蛋白表达水平检测K562稳定细胞株中HMGB1蛋白过表达情况,验证建立的K562稳定株的功能。结果表明,成功构建pcDNA3.1-HM BG1表达载体,并转染至K562细胞中,建立了过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株(K562-HM BG1)。在转录及蛋白水平上验证了该稳定细胞株过表达HMGB1蛋白。结论:已成功建立了过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株及对照细胞株即K562-HM BG1细胞及K562-pcDNA3.1细胞,为研究hm gb1基因在白血病发生及进展中的作用及机制建立了基础。
- 闫凡芝闫金松赵佳李伟平陈雪瑜杨岩饶淑梅金晶
- 关键词：K562细胞白血病
- 全反式维甲酸下调NB4细胞膜联蛋白Ⅱ表达及其机制探讨
- 2016年
- 目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)的表达影响,分析在ATRA的作用下AnnexinⅡ启动子的荧光素酶活性。方法:培养NB4细胞,用RT-PCR和Western blot技术分别检测1μmol/L ATRA作用的NB4细胞在不同时间点的AnnexinⅡ表达。构建AnneixnⅡ启动子,用电转染将重组质粒p GL4.15-AnnexinⅡ-promoter瞬时转染NB4细胞,在24 h后用1μmol/L ATRA处理转染的NB4细胞,分析AnnexinⅡ启动子的荧光素酶活性。结果:在转录水平,AnnexinⅡ的表达在48 h时逐渐下降;在蛋白水平,AnnexinⅡ的表达在24 h开始下降,而在48 h时下降明显。同时通过ATRA作用AnnexinⅡ启动子,发现ATRA可使AnnexinⅡ启动子活性下降,且随时间的延长荧光素酶活性越来越弱。结论:ATRA可诱导NB4细胞中AnnexinⅡ下调;ATRA可使转染细胞NB4中Annexin启动子荧光素酶活性随时间的延长而逐渐减弱,本研究为深入探讨其分子机制奠定了基础。
- 董小荣闫金松闫凡芝赵佳
- 关键词：NB4细胞全反式维甲酸启动子
- 调控组织因子基因表达的药物筛选研究被引量：1
- 2011年
- 本研究建立TF启动子转录活性的荧光素酶基因稳定细胞株,应用该细胞模型筛选调控TF基因表达的药物,并为深入研究其分子机制打下基础。构建TF启动子的一系列5′端截短型的荧光素酶报告基因质粒(包括-2174 bp^+128 bp,-684 bp^+128 bp,-247 bp^+128 bp,-201 bp^+128 bp),将质粒电转染至U937细胞中,建立表达荧光素酶报告基因的稳定细胞株。应用ATRA验证该细胞株的功能;应用bortezomib、尿多酸肽(CDA-II)等药物处理该细胞株24小时,分析荧光素酶基因活性,筛选出能够调控TF基因表达的药物。结果发现,5 nmol/L bortezomib能激活其转录活性,上调TF转录本表达水平;1 mg/ml CDA-Ⅱ抑制TF启动子的转录活性,下调TF转录本的表达水平。TF启动子逐步截短功能分析发现,bortezomib及CDA-ⅡII调控TF启动子转录活性的区域位于-201 bp—0 bp之间。结论:本研究建立了表达TF启动子荧光素酶活性的U937稳定细胞株,并筛选出能够调控TF基因转录的药物CDA-II及bortezomib,为将来筛选新药物及深入研究其分子机制打下了基础。
- 杨岩闫凡芝闫金松赵佳李伟平陈雪瑜金晶饶淑梅
- 关键词：启动子U937细胞BORTEZOMIB
