韩翠芳
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国海洋大学医药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一个有效并可调控的大肠杆菌O-GlcNAc修饰系统的构建
- O-连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰是位于细胞浆和细胞核蛋白质的丝氨酸或苏氨酸上的一种翻译后修饰,在高等真核生物细胞中广泛存在,越来越多的研究表明,O-GlcNAc修饰在代谢调控、压力应激、细胞周期、凋亡、...
- 韩翠芳单慧顾玉超于文功
- 关键词：OGTCKIIO-GLCNAC共表达
- 利用大肠杆菌表达系统制备具有O-GlcNAc修饰的p120ctn蛋白的研究
- 2015年
- p120-连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)是一个多功能蛋白,其在E-钙黏蛋白(E-cadherin)粘附复合体形成、Rho GTP酶信号通路和基因转录调节等过程中发挥重要作用。前期研究发现p120ctn蛋白具有O-连接的β-N-乙酰葡糖胺(Olinked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰,然而O-GlcNAc修饰对于p120ctn功能的调节作用及其机制还未阐明。本研究中构建了p120ctn的重组表达质粒,并将其与O-GlcNAc糖基转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)的表达质粒共同转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中。利用该菌株,实现了将p120ctn蛋白与OGT蛋白在大肠杆菌中共表达。通过免疫印迹检测发现与OGT蛋白共表达的p120ctn蛋白具有O-GlcNAc修饰。具有O-GlcNAc修饰的p120ctn蛋白的获得为后续在体外实验中对O-GlcNAc修饰调节p120ctn的作用和机制的深入研究奠定了基础。
- 刘海艳单慧韩翠芳于文功顾玉超
- 关键词：O-GLCNACP120CTNOGT
- 稳定表达p120ctn的人肺腺癌A549细胞株的构建
- 2015年
- 目的:构建稳定表达p120ctn的A549细胞株,以研究p120ctn蛋白在肺癌发生和转移过程中的作用。方法:通过分子克隆,将pc DNA3.1多克隆位点插入Flag标签的编码序列,得到pc DNA.Flag表达载体。然后PCR扩增p120ctn的编码序列,插入Flag标签下游,构建pc DNA.Flag-p120ctn质粒,筛选阳性克隆并进行酶切及测序鉴定。利用脂质体Lipofectamine 2000将pc DNA.Flag-p120ctn质粒转染到肺癌细胞A549中,通过G418筛选得到稳定转染细胞株,免疫印迹法检测p120ctn的表达。结果:本文构建了融合有Flag标签的p120ctn真核表达载体并转染到A549中,免疫印迹结果表明p120ctn蛋白在A549细胞中高效的表达。结论:本文成功构建了稳定高表达p120ctn的A549细胞模型,为深入研究p120ctn在肺癌的发生和转移过程中的作用奠定了基础。
- 毕传林刘海艳韩翠芳张信玲顾玉超
- 关键词：P120CTN肺癌A549细胞株
- 茶多酚对前列腺癌细胞DU145生长的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨茶多酚对前列腺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:选取激素非依赖性前列腺癌细胞系DU145为研究对象,在药物组的培养基中加入茶多酚使其终浓度分别为50、100、250、500μg/ml,对照组加入正常细胞培养基。各组细胞培养48 h后,采用MTT比色法检测细胞生存率,然后通过Western印迹分析和荧光定量RT-PCR法检测各组细胞survivin基因表达情况。结果:加入茶多酚溶液48 h后,各药物组细胞存活率分别为0.97±0.12、0.71±0.07、0.20±0.03和0.08±0.01,与对照组相比,除50μg/ml组(P=0.42)外,其余3个药物组细胞存活率均明显低于对照组(P﹤0.01)。随茶多酚作用时间增加,各组细胞存活率呈现下降趋势,到96 h时,除50μg/ml组,其余3组细胞存活率均在5%以下。加药48 h后,对照组、100、250、500μg/ml药物组的sur-vivin表达条带灰度值分别为15 075±48、13 425±31、2 017±24、1 274±22,与对照组相比,3个药物组survivin蛋白表达均明显减少(P均﹤0.01)。另外,50、100、250、500μg/ml药物组给药48 h时的survivin mRNA量分别为0.74±0.03、0.64±0.02、0.52±0.01、0.21±0.02,均明显少于对照组(P均﹤0.01)。结论:茶多酚可以抑制前列腺癌DU145细胞的生长,且这种作用可能与survivin基因表达减少有关。
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- 关键词：茶多酚前列腺癌细胞培养SURVIVIN基因
