高连山
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：鄂尔多斯职业学院更多>>
- 发文基金：国家基础科学人才培养基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 核酸疫苗pcDNA3.1-EG95的构建及在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达被引量：3
- 2010年
- 克隆细粒棘球蚴EG95基因cDNA并构建核酸疫苗pcDNA3.1-EG95。根据GenBank中细粒棘球蚴EG95基因序列(AF134378)设计引物并在上游引物起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因EG95cDNA,扩增片段克隆到pcDNA3.1(+)中构建重组载体pcDNA3.1-EG95后测序。重组质粒pcDNA3.1-EG95采用脂质体法转染绵羊胎儿成纤维细胞并用G418筛选,RT-PCR检测稳定转染细胞中目的基因的转录。测序结果表明克隆的目的基因包含了471bp的完整ORF并与载体连接正确。RT-PCR检测表明EG95基因在稳定转染的绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建pcDNA3.1-EG95核酸疫苗并可在绵羊胎儿成纤维细胞中转录目的基因,可进一步用于活体动物免疫研究。
- 杨娇馥王志钢高连山郝慧芳李志伟李洁湛奎
- 关键词：细粒棘球蚴核酸疫苗
- 细粒棘球蚴FABP基因的原核表达及蛋白鉴定
- 2010年
- 构建原核表达载体pET-FABP,优化表达条件,采用免疫学方法鉴定纯化的FABP融合蛋白。载体pMD19-T-FABP和pET-44a(+)经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将回收的FABP片段与pET-44a(+)连接,构建原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,优化表达条件,纯化FABP融合蛋白,Western blotting鉴定。成功构建了原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌中高效表达。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。构建的表达载体pET-FABP可以在大肠杆菌中大量表达Nus-FABP融合蛋白,为进一步研制FABP亚单位疫苗奠定了基础。
- 郝慧芳王志钢高连山赵云龙白健金永周华从李洁陈献威
- 关键词：细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白原核表达
