李志伟
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于CRISPR-Cas9系统的HSV-1基因治疗载体的快速构建被引量：1
- 2017年
- 基因改造的1型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体在肿瘤溶瘤病毒治疗及基因转导中具有广泛的应用前景。本研究报道一种基于CRISPR-Cas9系统的高效快速的重组HSV-1载体构建方法。首先,双顺反表达靶点g DNA和Cas9核酸酶的基因编辑质粒与同源重组模板质粒共转染Vero细胞后,用亲本株感染细胞;然后,Cas9对胞内病毒基因组定点切割,诱导外源基因同源重组,修复至病毒基因组指定位点。通过PCR、Western印迹、免疫荧光等方法证明,相比于传统自发同源重组的构建方法,该方法能显著提升病毒重组率(4.1%vs 1.1%)。同时,本研究建立了一种新的单克隆病毒纯化方案,简化了阳性病毒筛选步骤。本研究结果提供了一种高效快速的重组HSV-1构建方法,这对于HSV-1相关基因治疗及其病理机制研究将具有重要意义。
- 杨雯虹杨丽娟李志伟聂祖庆王若花黄新伟曹霞
- 关键词：1型单纯疱疹病毒病毒载体基因转导
- 2型糖尿病患者血清与粪便的代谢组学研究被引量：2
- 2021年
- 目的研究2型糖尿患者与健康者血清和粪便的代谢组学差异,分析差异代谢物与2型糖尿病之间的相关性。方法选择2018年1月至2019年3月在昆明医科大学第二附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者53例,以及同期常规体检健康对照人群30例,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术对两组研究对象的血清代谢物及30例糖尿病患者与对照组的粪便代谢物进行非靶向和靶向的代谢组学研究。应用Spearman相关性分析方法对血清和粪便中的差异代谢物与2型糖尿病相关指标的相关性进行分析。结果在2型糖尿病组与健康对照组血清样本中鉴定出15个差异代谢物,在粪便样本中鉴定出的差异代谢物则有6个。其中,糖尿患者血清中的谷氨酰胺、壬二酸、癸二酸及3-羟基癸二酸等二羧酸类羟基化衍生物明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01),而琥珀酰乙酰乙酸、缬氨酸、亮氨酸、葡萄糖、乳酸的含量则高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),并且琥珀酰乙酰乙酸、乳酸与糖化血红蛋白、餐后2 h血糖及空腹血糖浓度具有较强的正相关性,而壬二酸、癸二酸及二羧酸类羟基化衍生物与血糖浓度则具有较强的负相关;在粪便代谢物中,去氧胆酸和鹅去氧胆酸等胆汁酸与受检者的血糖浓度也有着一定的正相关性,并且单变量分析结果显示,与健康对照组相比糖尿病患者血清中的去氧胆酸和鹅去氧胆酸均显著性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论2型糖尿患者的血清代谢组学与健康者具有明显的差异,这些差异代谢物与糖尿病的发生和发展具有较强的关联性。在粪便代谢组学中,糖尿患者的胆汁酸水平与血糖的浓度变化也密切相关。
- 李志伟黄建锋文婕李飞肖雪蓉王鹏飞曹霞
- 关键词：2型糖尿病代谢组学
- 埃博霉素D对大鼠外伤性视神经损伤的保护作用被引量：1
- 2022年
- 目的探讨埃博霉素D治疗大鼠视神经损伤(TON)的治疗效果。方法42只健康SD大鼠分成埃博霉素D治疗组(1.0 mg/kg埃博霉素D腹腔注射)和等量DMSO溶剂对照组,3 d/次给药治疗直至28 d,首次给药次日建立大鼠TON模型。在3、7、28 d时运用活体闪光视觉诱发电位(FVEP)检测,免疫荧光检测,Western blot检测对两组大鼠视觉通路特性,视网膜神经节细胞(RGC)数量,受损轴突再生标志物蛋白GAP43表达水平,以及视网膜和视神经Tau及其pTau-396/404的变化情况进行研究。结果治疗组相对于对照组在3 d和28 d两个检测时间点中RGC的丢失率都显著下降(3 d下降19.12%,P=0.032;28 d下降22.67%,P=0.042),然而FVEP未能在治疗终点28 d时在生理上观测到视觉通路的改善(N2波潜伏期相对差异,P=0.236;P2-N2波振幅相对衰减差异,P=0.441)。视网膜中3 d时治疗组相对于对照组总Tau含显著增加(P<0.001),且总Tau和pTau-396/404的含量变化较一致;而在视神经轴突中,7 d时治疗组相对于对照组总Tau水平显著降低(P=0.002),但总Tau和pTau-396/404的变化关系不明显。此外,埃博霉素D的作用可使受损轴突在28 d时仍然表达GAP43。结论埃博霉素D对外伤性视神经损伤存在保护作用,其可促进损伤RGC的存活,增强存活RGC中胞体Tau的含量,降低受损轴突中Tau的累积,刺激受损轴突持续再生。
- 王鹏飞罗生平申晨喻哲昊聂祖庆李志伟文婕李萌曹霞
- 关键词：外伤性视神经损伤TAU
- proBDNF-p75NTR通路抑制C6细胞增殖被引量：1
- 2015年
- 目的 pro BDNF和成熟BDNF分别通过p75NTR受体和Trk B受体介导相反的生物学作用。微环境变化时,pro BDNF-p75信号通路和成熟BDNF-Trk B通路不平衡可能对细胞生长和增殖产生不同影响。本研究拟探讨不同培养条件下,C6细胞表达pro BDNF及其受体p75NTR的变化,对C6细胞生长和增殖的作用。方法用细胞免疫荧光双标和Western blot方法,检测在含不同浓度血清培养液中培养的C6细胞pro BDNF及其受体p75NTR表达。分别用特异性的pro BDNF抗体阻断内源性pro BDNF,用p75NTR-ECD-Fc阻断p75NTR,用MTT法和Brdu法分别测定内源性pro BDNF及其受体p75NTR对C6细胞生长和增殖的作用。结果 pro BDNF和p75NTR在无血清培养的C6细胞中共表达明显上调,加入pro BDNF抗体(10μg/ml)处理细胞后,C6细胞的生长和增殖明显增加。p75NTR的作用取决于其在不同环境下结合的配体。结论 pro BDNF-p75NTR通路起到平衡成熟BDNF-Trk B通路的作用,一定环境下,二者平衡打破,可能对细胞生长或增殖产生不同影响。
- 熊静李志伟韩剑虹殷梅李馨蕊朱榆红
- 关键词：P75神经营养因子受体C6细胞
- BAL联合M-ROSE在潜在供肺维护中的作用
- 2024年
- 目的探讨BAL联合M-ROSE在潜在供肺维护中的作用。方法选取昆明医科大学附属甘美医院重症医学科2020年09月至2022年12月收治的符合纳入标准的脑死亡患者行BAL,留取灌洗液行M-ROSE比较病原菌检出率及初步诊断时间。根据M-ROSE结果阳性的患者采用经验性抗感染治疗,评估抗感染治疗48 h前后的氧合指数、胸部X线评分、感染指标(WBC、CRP、PCT)变化。结果(1)病原菌检出率比较:MROSE对细菌感染初步诊断结果与检验科报告的结果表现出高度一致性(Kappa=0.921,P<0.001);(2)诊断时效性比较:M-ROSE初步诊断时间与常规涂片报告时间、微生物培养时间比较,差异有统计学意义(P<0.001);(3)抗感染治疗48 h的疗效比较:抗感染治疗前后氧合指数,白细胞,超敏C反应蛋白差异无统计学意义(P>0.05);抗感染治疗前后胸部X线,降钙素原差异有统计学意义(P<0.05)。结论BAL联合M-ROSE在潜在供肺肺部感染中的诊断时效性高,可以为供肺维护早期抗感染治疗提供初步的依据。
- 龚丽明冉江华王胤佳李志伟杨倩王清王东坤唐正能
- 关键词：肺移植脑死亡肺泡灌洗
- 大鼠外伤性视神经损伤的闪光电生理特性和Tau蛋白及其磷酸化研究被引量：7
- 2021年
- 目的:运用闪光视觉诱发电位(FVEP)技术检测外伤性视神经损伤(TON)大鼠视觉通路障碍的变化情况,探究TON大鼠视网膜及视神经中Tau及其磷酸化蛋白的变化。方法:将30只SD大鼠进行FVEP造模,1wk后构建TON模型,左眼进行视神经夹持损伤,右眼进行视神经暴露假手术。TON模型鼠分别于视神经夹持损伤后1、3、7、14、28d进行FVEP检测。FVEP检测完成后处死大鼠,分离左眼视网膜及视神经,并采用Western blot检测其中Tau及其Ser 396/Ser 404位点磷酸化蛋白的表达水平。结果:TON模型大鼠假手术眼出现典型的FVEP波形;相较于假手术眼,手术眼各检测时间点FVEP的N2波发生显著延迟,N2-P2波振幅发生大幅缩减,但视神经夹持损伤后各时间点N2波潜伏期延迟时间和N2-P2振幅缩减差异不明显。TON大鼠手术眼视网膜总Tau含量在夹持损伤1d后急剧下降,7d时短暂恢复后直至28d维持于略低于正常水平;pTau-Ser396/404的变化与总Tau的变化一致,其中Ser 396位点为Tau蛋白主要磷酸化位点。TON大鼠手术眼视神经总Tau含量逐渐增多,夹持损伤14d时达到高峰并维持至28d,pTau-Ser396/404的变化与总Tau的变化类似,7d时出现增长并抵达高峰,其中Ser 404位点为主要磷酸化位点。结论:FVEP的N2及P2相关指标可用于检测TON大鼠视觉功能障碍水平,TON大鼠视网膜与视神经Tau蛋白水平的变化截然不同,不同部位pTau-Ser396/404的变化跟随总Tau含量的变化而变化,但不同部位Tau蛋白主要改变的磷酸化位点不同。
- 王鹏飞申晨喻哲昊聂祖庆李志伟文婕李萌曹霞
- 关键词：外伤性视神经损伤闪光视觉诱发电位视神经TAU蛋白TAU蛋白磷酸化
