郑青
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- HBHA通过调控TLR4受体从而抑制巨噬细胞自噬
- 目的：结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTB)引起的单一病原菌造成的人类死亡重大疾病，全球感染人数众多，其中合并艾滋病感染人数高达120万人，机体免疫力低下造成结核分枝杆菌伺机而入，并且形成活动性结核。肝素结合血凝素(H...
- 郑青
- 肝素结合血凝素通过抑制A549细胞的自噬作用增强耻垢分枝杆菌的感染能力
- 2014年
- 目的将肝素结合血凝素(HBHA)重组表达于耻垢分枝杆菌(MS),鉴定其对A549细胞自噬作用的影响。方法将HBHA克隆于穿梭表达质粒pMV261,构建HBHA重组载体,电转化至MS;感染A549细胞,Western blot法鉴定A549细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,并检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的变化可估计自噬的水平;利用单丹磺酰尸胺(MDC)将自噬体染色后,激光共聚焦观察细胞内自噬体变化的情况;通过MS、rMS-HBHA感染A549细胞18 h,计算胞内活菌数,鉴定感染状况。结果 rMS-HBHA经42℃热诱导成功表达HBHA蛋白;相对野生型MS,重组表达HBHA蛋白的MS(rMS-HBHA)可以显著抑制A549细胞中的LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的表达,rMS-HBHA组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值为0.625显著低于MS组2.025,表明rMS-HBHA组自噬体形成受到抑制;并且rMS-HBHA感染A549细胞18 h后胞内活菌为6.3×106,明显高于MS组1×105。结论外源性HBHA可以通过抑制A549细胞的自噬作用增强MS的感染能力。
- 郑青杨柳杨静周珊周磊韩若冰郝晓柯马越云
- 关键词：RMS肝素结合血凝素A549细胞LC3耻垢分枝杆菌
- 结核分枝杆菌体外休眠模型的建立被引量：1
- 2016年
- 目的:模拟结核分枝杆菌体内缺氧和微营养的生长环境建立其休眠模型。方法:将牛分枝杆菌卡介苗野生株BCG菌株在"微需氧+pH5.0+10%Dubos"的条件下培养,以菌株生长停滞,菌体表面脂质体增厚为休眠标准进行鉴定。取不同时间菌株测定600 nm下的吸光度(A)值绘制生长曲线,同时进行金胺O-尼罗红(Auramin-O,Nile Red)双荧光染色和实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime-PCR,qRT-PCR)检测休眠相关基因的表达量,确定菌株进入休眠状态。结果:在休眠条件培养过程中,BCG菌株的生长速度与常规条件培养菌株相比明显减慢(P<0.01),并且在休眠条件培养中第10、14和18天细菌生长基本接近停滞状态(P<0.01);同时金胺O荧光染色显示绿色荧光减弱,尼罗红红色荧光增强;休眠相关基因hspX、devR表达量逐渐上调,且培养第18天菌株明显高于第0天培养菌株(P<0.05)。结论:应用"微需氧+p H5.0+10%Dubos"条件培养,以金胺O-尼罗红染色和devR表达为标准,可以成功建立结核分枝杆菌休眠模型。
- 付晓蕊郑青周磊旦正尖措苏明权郝晓柯马越云
- 关键词：休眠金胺O
- 结核分枝杆菌肝素结合血凝素对巨噬细胞极化的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝素（HBHA）对小鼠骨髓来源巨噬细胞和小鼠巨噬细胞系Raw264．7细胞极化的影响。方法在应用免疫荧光法确认HBHA进入巨噬细胞的基础上，对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）和Raw264．7细胞分别施加LPs（100ng/m1）＋IFN-γ（2．5ng／ml）、IL4（20ng/m1）、不同浓度的HBHA（1μg/ml，3μg／ml，6μg／ml，10μg/m1）和ESAT-6（5μg／m1）。以ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α。通过RT-PCR方法检测M1型极化分子标志诱导型一氧化氮合酶（iN0s）和TNF-α等，以及M2型极化分子标志精氨酸酶1（Arg-1）和CD206。最后westernb10t检测细胞iN0s和Arg-1蛋白表达水平。结果结核分枝杆菌HBHA处理BMDM细胞后，培养上清中IL-6、IL-12、TNF-α细胞因子分泌明显增加．iNOS和TNF-α基因表达升高；处理后的Raw264．7细胞中，IL-6分泌量增多，TNF-α表达上调，与EsAT-6对小鼠巨噬细胞的作用结果一致。HBHA和ESAT_6处理小鼠骨髓来源巨噬细胞不能增加M2极化分子标志Arg-1的蛋白表达，但都能诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞和Raw264．7细胞iN0s生成增加。结论结核分枝杆菌HBHA可诱导小鼠巨噬细胞向M1极化。
- 范琳琳郑青杨柳周磊李蕊常亮郝晓柯马越云
- 关键词：巨噬细胞极化肝素结合血凝素ESAT-6
