陈立瑾
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 小鼠附睾分泌的防御素Defb48的原核表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:获取小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因并原核表达、纯化,为研究其功能奠定基础。方法:提取小鼠附睾组织的总RNA,用RT-PCR技术扩增出不含信号肽的Defb48编码序列,将2段Defb48编码序列串联克隆至原核表达载体pET28(a)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白;用镍柱进行重组蛋白的纯化,然后进行SDS-PAGE和Western印迹分析鉴定。结果:获得实验所需小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因序列,测序结果与已发表的基因序列一致;在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达了His-Defb48融合蛋白,经Western印迹分析,在相对分子质量18 000处有特异的蛋白条带,镍柱纯化后获得纯度较好的融合蛋白。结论:克隆了小鼠附睾分泌的防御素Defb48基因,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达纯化出融合蛋白,为制备其多克隆抗体,进而进一步研究Defb48的功能奠定了基础。
- 陈立瑾田利源李秀丽陈树林汪莉王玉民
- 关键词：Β-防御素原核表达
- 小鼠附睾分泌蛋白Fam12b的原核表达与纯化
- 2011年
- 本研究旨在克隆小鼠附睾基因fam12b,构建pET28(a)-fam12b-fam12b原核表达重组质粒,从大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得融合蛋白。应用RT-PCR方法从小鼠附睾中扩增出fam12编码序列,串联克隆至原核表达载体pET28(a),转化大肠杆菌Rosetta(DE3)细胞,诱导表达,Ni-NTA纯化融合蛋白。结果显示,获得小鼠附睾基因fam12b,纯化后的融合蛋白经过SDS-PAGE和Western印记分析鉴定,在相对分子质量31kD处有特异的条带,并获得高纯度融合蛋白。本研究成功克隆了小鼠附睾基因fam12b,并从Rosetta(DE3)中获得高纯度融合蛋白,为进一步研究Fam12b的功能创造了条件。
- 陈立瑾田利源李秀丽汪莉王玉民陈树林
- 关键词：分泌蛋白原核表达
