马云龙
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 基于Cas9技术的无标记定点整合LacS基因的载体系统构建
- 2018年
- 为了获得奶牛Cas9特异识别位点载体,同时构建无标记Lac S基因载体,并对Cas9载体进行活性验证,以达到建立Lac S基因阳性细胞系的目的,试验基于奶牛β-casein第2内含子区域序列设计Cas9靶位点作为潜在Lac S基因插入位点、构建Cas9/gRNA载体,利用T7E1酶进行活性验证,构建包含针对靶位点微同源序列的Lac S基因载体。结果表明：经过PCR和测序比对,发现构建的Cas9/gRNA载体具有活性,而且Lac S基因载体可用于整合。同时构建的包含有微同源序列和Cas9靶位点的Lac S基因克隆载体,可用于后续研究。
- 刘晓苏小虎马云龙郭梓茹张焱茹周欢敏张立
- 关键词：无标记奶牛
- mRNA疫苗的研究及应用进展被引量：4
- 2023年
- 与传统疫苗相比,mRNA疫苗具有高效、安全、低成本等优点,但它的应用一直受到体内传递不稳定、翻译效率较低等技术问题的限制。新型冠状病毒的流行及其疫苗的研发加速了mRNA疫苗的研发和批准,特别是在mRNA结构修饰及脂质纳米颗粒构建等方面有了突破性进展,如使用优化后核苷、帽子结构的mRNA疫苗稳定性大大提高,替换低使用频率的密码子可提高其翻译效率等。目前常用的mRNA递送系统有脂质纳米颗粒、聚合物载体、类病毒载体等。综述了mRNA疫苗的发展历程、作用机制、修饰技术突破和递送系统方面的研究及应用进展,以期促进mRNA疫苗的深入研究及应用。
- 蔚丹马云龙万方武建强
- 关键词：递送系统
- CRISPR-Cas9介导的蒙古牛MSTN基因敲除细胞系的建立被引量：3
- 2018年
- 试验旨在利用CRISPR-Cas9技术对蒙古牛胎儿成纤维细胞肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行编辑,构建无标记的MSTN基因敲除的蒙古牛细胞系,为培育肌肉发达的蒙古牛提供试验材料。通过组织块贴壁法对妊娠45d的蒙古牛胎儿建立皮肤成纤维细胞系,同时在第2外显子区域选定1个gRNA靶位点,使用在线软件设计sgRNA序列,并选取评分较高的3个sgRNA,采用试剂盒法构建无标记的Cas9/gRNA载体,随后用T7E1酶酶切法对其进行活性验证,将有活性的载体用电转法转染蒙古牛胎儿成纤维细胞,通过无限稀释法和口吸管法将转染后的单细胞接种于96孔板扩繁后提取DNA,对其进行PCR扩增及测序验证来获取阳性细胞。本试验构建了3个无标记的CRISPR-Cas9载体,经验证1个有活性,对电转染后的单细胞进行筛选共获得96个单细胞株,测序分析后有1个单细胞株发生单碱基突变,使得MSTN基因不能编码正常的蛋白。试验成功建立了1个MSTN基因失活的细胞株,可作为后续体细胞核移植的供体细胞,用于生产无标记的敲除MSTN基因的蒙古牛,对培养产肉率高并具有生物安全性的蒙古牛具有重要的意义。
- 郭梓茹张立马云龙苏小虎周欢敏张焱如刘晓
- 关键词：MSTN基因蒙古牛
- 整合mRNA-miRNA转录组比较ITE对人鼠胶质瘤细胞作用的异同
- 2020年
- 在多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)治疗的新药开发研究中存在不少临床前研究有效,但临床实验中无效的情况这可能是由于胶质瘤动物模型与临床的差异造成的。目前GBM免疫治疗的的热点之一是阻断色氨酸(tryptophane,Try)代谢为犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)的途径,即抑制吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)/色氨酸-2,3-双加氧酶(tryptophan-2,3-dioxygenase,TDO)途径产生的犬尿氨酸结合芳烃受体(aryl hydro carbon receptor,AHR)抑制免疫。本研究设想AHR的一种内源性配体2-(1’h-吲哚-3’-羰基)-噻唑-4-羧酸甲酯(2-(1’H-indole-3’-carbonyl)-thiazole-4-carboxylic acid methyl ester,ITE)可与犬尿氨酸竞争性结合AHR,阻断这条通路。本研究选取了两种常用的胶质瘤细胞系U87MG和GL261进行实验。发现ITE对U87MG增殖无显著影响对GL261有促进细胞增殖的趋势。对ITE处理后的U87MG和GL261转录组数据进行研究,发现与增殖有关的基因CDK4和PRMT5在U87MG中受ITE影响下调的蛋白复合体中富集,但在GL261中没有显著富集。Real-Time PCR验证了CDK4和PRMT5的相应变化即在U87MG中受ITE影响显著下调,在GL261中无显著差异,部分解释了增殖差异现象,提示ITE-AHR对人鼠胶质瘤细胞增殖相关通路作用不同。本研究还对受ITE调控的基因进行了通路和GO(Gene ontology)富集以及蛋白互作/蛋白复合体的分析,同时进行了mRNA-miRNA整合分析。结果表明,不同的转录组分析策略提供了互补的信息,受ITE调控的U87MG和GL261转录组数据虽有相同之处,也有较大差异,提示利用细胞系模型做科学研究时要综合多种模型的分析结果,谨慎将鼠实验模型数据外推到人临床反应。本研究可为后续胶质瘤模型及外推临床反应的研究提供参考。
- 舒秋婷赵丽娇马云龙姜萱璟巩培鲁静万方
- 关键词：神经胶质瘤AHRITE
- TALEN敲除蒙古牛肌肉生长抑制素基因的细胞系建立被引量：1
- 2016年
- 本研究拟通过TALEN敲除蒙古牛肌肉生长抑制素基因,构建无标记敲除细胞系,为后续研究做准备。通过组织块法建立成纤维原代细胞系,核转法转染TALEN质粒对,单细胞接种建立单细胞株,测序鉴定阳性细胞株。共培养87个单细胞株,测序分析1个细胞株发生了双敲除突变,效率为1.1%。本试验得到了1个肌抑素双突变细胞株,可以作为供体细胞进行核移植生产无标记肌抑素基因敲除蒙古牛,为蒙古牛的改良奠定了一定研究基础。
- 马云龙张立苏小虎张纬张焱如周欢敏
- 关键词：TALEN蒙古牛
