高景鹏
- 作品数：3 被引量：45H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 密码子优化型鹅细小病毒病毒样颗粒的表达与鉴定
- 2012年
- 根据昆虫细胞密码子的偏嗜性,对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP2基因的密码子进行优化,利用Bac-to-Bac表达系统构建了表达优化VP2基因的重组杆状病毒,通过感染昆虫细胞(Sf9)获得病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。SDS-PAGE分析显示Sf9细胞中出现了65 kDa的蛋白条带,间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay,IFA)和Western blot结果均证实表达产物能与鼠抗GPV VP2抗体发生特异性反应,说明其具有良好的免疫反应性。同时,试验结果还证明,密码子优化后的GPV VP2基因在昆虫细胞中表达量得到了提高,明显高于野生型VP2基因。透射电镜观察纯化后的昆虫细胞表达产物,可见直径约30 nm的VLPs,表明密码子的优化并不影响VP2蛋白的组装。本研究为进一步研制诊断抗原以及新型GPV疫苗等奠定了基础。
- 陈宗艳李传峰高景鹏朱英奇王玢瑸杨宗伟刘光清
- 关键词：鹅细小病毒VP2密码子优化杆状病毒表达系统病毒样颗粒
- 猪圆环病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中表达形成病毒样颗粒的研究被引量：8
- 2011年
- 本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)PCV2b的ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,构建的质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-cap。将rBacmid-cap转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验证明目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。将该重组杆状病毒感染HighFiveTM细胞后,用Western blot在细胞培养上清中检测到了目的蛋白,并于d 5达到表达高峰。电镜观察结果显示上清中的目的蛋白可以装配成直径约为17 nm的病毒样颗粒。病毒样颗粒在培养上清中的大量存在,为目的蛋白进一步的分离和纯化提供了便利,也为PCV2基因工程疫苗的产业化奠定了基础。
- 李玲李国新徐彦召高景鹏周艳君童光志
- 关键词：猪圆环病毒重组杆状病毒病毒样颗粒
- 一株新型鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定被引量：37
- 2012年
- 本文从太湖流域某养鸭场分离到一株呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)TH11株,该病毒感染的病鸭主要表现软脚和拉稀等主要症状,剖检病变以肝脏出血和脾脏坏死为主要特征。电镜鉴定结果显示,该病原具有呼肠孤病毒的典型形态学特征。动物回归试验和RT-PCR扩增结果证明,该株病毒无论是在致病性方面,还是在基因序列方面都不同于以往的番鸭呼肠孤病毒,而是一株对多品种鸭具有较高致病性和病死率的新型鸭呼肠孤病毒。
- 陈宗艳朱英奇王世传李传峰李露王玢缤付玉志高景鹏王超刘光清
- 关键词：动物回归试验电镜RT-PCR
