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猪瘟病毒N~(pro)蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro蛋白具有自我切割酶活性和抑制I型干扰素产生的功...; 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒病毒复制; 文献传递

稳定表达T7RNA聚合酶PK-15细胞系的建立被引量：2: 2011年; 为构建稳定表达T7RNA聚合酶(RNAP)的猪肾细胞系(PK-15),本研究采用PCR方法,以E.coliBL21(DE3)细菌基因组为模板扩增T7RNAP基因,将其克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-T7。采用脂质体将pLXSN-T7转染至PT67细胞中,经G418筛选培养获得重组逆转录病毒rMLV-T7,将其接种于PK-15细胞进行G418加压筛选和纯化;应用PCR、间接免疫荧光试验及T7启动子控制下的红色荧光蛋白的重组表达质粒(pET-RED)进行瞬时表达,检测T7RNAP的表达及活性,结果表明筛选所得的细胞系PK/T7的不同代次均具有转录活性。本研究建立稳定表达T7RNAP的细胞系PK/T7,为实现细胞内T7启动的转录和猪源RNA病毒等的反向遗传操作提供了有效的方法。; 黄俊华贺番孙元张鑫常天明李宏宇仇华吉; 关键词：逆转录病毒载体稳定细胞系

猪瘟兔化弱毒疫苗株适应家兔的分子基础: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种猪烈性传染病。我国在国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)中...; 李超李永锋申梁黄俊华孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗株病毒复制; 文献传递

猪瘟病毒NS3蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备被引量：5: 2010年; 以含有猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA的重组质粒pOKShimen为模板,经PCR扩增获得NS3基因,利用原核表达载体pMAL-c2X、pET32a以及杆状病毒表达载体pFastBacH T B表达CSFV石门株NS3基因,获得3种重组蛋白:MBP-NS3、His-NS3和rNS3。Western-blot分析及间接免疫荧光试验证实,这3种不同载体表达的NS3蛋白均能被猪瘟阳性血清所识别。利用直链淀粉树脂柱对重组蛋白MBP-NS3进行纯化后,用其免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA筛选,获得2株能稳定传代并分泌针对抗CSFVNS3蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为1D10和1H10。Western-blot分析及间接免疫荧光试验结果证明,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均可识别CSFVNS3蛋白。; 常天明孙元李宏宇贺番李淼黄俊华仇华吉; 关键词：猪瘟病毒单克隆抗体

猪瘟病毒Npro蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro蛋白具有自我切割酶活性和抑制Ⅰ型干扰素产生的...; 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒病毒复制

共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因和猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒的构建及其在小鼠模型上的免疫原性分析被引量：6: 2010年; 本研究旨在以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,构建一株同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组腺病毒疫苗。首先利用重叠PCR将GP5和E2基因通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接,形成一个完整的ORF,并将其克隆到腺病毒穿梭载体中,通过细菌内同源重组构建共表达PRRSVGP5蛋白和CSFVE2蛋白的重组腺病毒(rAdV-GP52AE2)。间接免疫荧光试验和western blot检测证实2个外源基因均获得表达。在小鼠上进行的免疫效力评价结果显示,rAdV-GP52AE2免疫组针对CSFV的中和抗体滴度可达1∶128,针对PRRSV的中和抗体滴度为1∶16;在淋巴细胞增殖试验中,免疫组与阴性对照组在增殖指数上有显著差异,表明该重组腺病毒可以同时诱导抗PRRSV和CSFV的特异性体液免疫和细胞免疫。这些结果显示,利用具有自动剪切功能的FMDV2A多肽构建的重组腺病毒有望开发成一种同时预防PRRS和CSF的新型载体疫苗。; 李宏宇孙元常天明贺番黄俊华仇华吉; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒重组腺病毒免疫原性

猪瘟病毒Npro蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro 蛋白具有自我切割酶活性和抑制I 型干扰素产...; 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒病毒复制

猪瘟兔化弱毒疫苗株适应家兔的分子基础: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种猪烈性传染病。我国在国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020 年)...; 李超李永锋申梁黄俊华孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗株病毒复制

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黄俊华