刘仲藜
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子Ts-serpin-2对人THP-1细胞炎性细胞因子的表达影响被引量：1
- 2023年
- 为了深入研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子(Ts-serpin-2)对THP-1细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本实验通过RTPCR从猪带绦虫成虫扩增获得Ts-serpin-2(TsM_000807300)的编码序列CDS,利用毕赤酵母表达Ts-serpin-2重组蛋白。利用发色底物特异性反应检测Ts-serpin-2蛋白对猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶、牛α-糜蛋白酶、猪胃蛋白酶、木瓜酶、凝血酶和组织蛋白酶G的抑制效果。重组蛋白Ts-serpin-2处理THP-1细胞24 h,应用qRT-PCR和ELISA方法检测各炎性细胞因子差异表达水平。结果显示,真核酵母表达的重组蛋白Ts-serpin-2分子量约为48 kDa,具有蛋白酶抑制活性,对牛α-糜蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶及猪胰蛋白酶的活性均有明显的抑制作用。重组蛋白Ts-serpin-2可抑制LPS活化的THP-1细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12α、IFN-γ和iNOS2 mRNA的转录水平,促进IL-4刺激的THP-1细胞抗炎性细胞因子IL-10的表达。ELISA结果显示,Ts-serpin-2能够抑制巨噬细胞分泌致炎因子TNF-α、IL-6和IFN-γ,刺激IL-10的分泌,与qRT-PCR检测结果基本一致。上述研究结果表明猪带绦虫Ts-serpin-2可通过调节宿主巨噬细胞分泌的炎性因子影响虫体入侵过程中宿主的免疫应答。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫真核表达THP-1细胞炎性细胞因子
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1对人巨噬细胞THP-1的免疫调节功能研究被引量：1
- 2021年
- 主要研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1(WormBase:TsM_000065700)对宿主THP-1细胞的免疫调节作用。通过设计特异性引物和RT-PCR扩增技术,获得Ts-serpin-1编码序列,用qRT-PCR分析Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫的表达情况;构建pCold-Ts-serpin-1原核表达载体,诱导表达纯化重组蛋白Ts-serpin-1;用重组蛋白Ts-serpin-1处理THP-1细胞,采用qRT-PCR和ELISA方法检测Ts-serpin-1处理THP-1细胞后,各炎性细胞因子的变化情况。结果显示:获得的Ts-serpin-1目的基因长度为1149 bp,编码382个氨基酸,含有Serpin家族特有的反应中心环。Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫均表达,且成虫表达量显著高于幼虫。重组蛋白Ts-serpin-1的分子质量约为43 ku,可抑制THP-1细胞促炎性细胞因子IL-6、IL-1β、IL-12、TNF-α、IFN-γ和iNOS2的表达,促进抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β的分泌表达。以上结果提示,Ts-serpin-1在寄生虫-宿主互作过程中可能发挥重要作用。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂免疫调节
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Tsserpin570的克隆表达与酶活性分析被引量：1
- 2021年
- 为阐明猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin570)对蛋白酶的抑制作用,通过RT-PCR从猪带绦虫成虫cDNA扩增获得Tsserpin570(TsM000807300)的完整CDS序列,并构建了pColdTsserpin570原核表达载体,利用发色底物法检测可溶性重组蛋白Tsserpin570对蛋白酶活性的抑制作用。结果显示:RT-PCR扩增获得的Tsserpin570基因片段长1 206 bp,其蛋白的分子质量为46 ku,含有serpin家族特有的反应中心环及DEEGAE和FIVDHPFLFFI家族保守序列。qRT-PCR结果显示,Tsserpin570基因在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段均有表达,且在成虫的表达量显著高于囊尾蚴的。pCold-Tsserpin570原核表达载体经IPTG诱导表达后获得可溶性重组蛋白Tsserpin570,可被猪囊尾蚴阳性血清识别。基于发色底物法检测Tsserpin570对牛α-胰糜蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶、猪胰蛋白酶、人白细胞组织蛋白酶G、人血浆凝血酶、猪胃蛋白酶和木瓜蛋白酶等蛋白酶的活性抑制作用发现,其对牛α-胰糜蛋白酶、胰蛋白酶及弹性蛋白酶的活性均有明显的抑制作用。以上结果提示,Tsserpin570对多种丝氨酸蛋白酶均具有较强的抑制作用。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂原核表达酶活性
- 绦虫Ddi1-like基因功能与其HIV蛋白酶抑制剂药物可用性研究
- 引言/目的猪囊尾蚴病和包虫病,是一种严重危害人类健康和畜牧业发展的人畜共患寄生绦虫病。临床数据表明,绦虫病和人类免疫缺陷病毒病(HIV)具有广泛的共感染。我们已发现DNA损伤诱导1样蛋白(Ddi1-like)在绦虫各发育...
- 刘仲藜何伟才学鹏王帅
- 关键词：基因功能酿酒酵母HIV酶抑制剂
- 日本血吸虫胰岛素样多肽的真核表达及其多克隆抗体的制备
- 2017年
- 为克隆和表达日本血吸虫胰岛素样多肽基因(Sjilp)并制备特异性多克隆抗体,根据基因组注释信息,设计特异性引物,利用RT-PCR技术从日本血吸虫成虫m RNA中成功扩增出长度为588 bp的特异性c DNA序列,其CDS序列长393 bp。基于毕赤酵母密码子偏好性,对Sjilp基因密码子进行优化,构建p PIC9KSjilp重组表达载体,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达。SDS-PAGE与Western-blot检测结果显示,重组蛋白Sj-ILP获得高效表达,其大小约为15 ku,与预期结果一致。利用合成肽技术,设计并合成得到2条特异性的肽段,偶联KLH,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA检测其效价达到1︰51 200,Western-blot鉴定表明这2条特异性多肽具有良好的免疫原性。本试验为后续验证Sj-ILP与其结合蛋白的功能奠定了良好的基础。
- 岳生赟王帅何伟王力刘仲藜曾巧英才学鹏
- 关键词：日本血吸虫真核表达多克隆抗体
- 羊捻转血矛线虫病检测方法研究进展被引量：1
- 2024年
- 羊捻转血矛线虫病是由捻转血矛线虫寄生于羊等小反刍动物皱胃内引起的一种危害严重的嗜血性寄生虫病。病羊临床表现为消瘦、贫血和衰弱等慢性消耗性症状,严重感染者可致死。该病在我国牧区普遍流行,目前暂无安全长效疫苗可用,加之耐药性严重,放牧羊群感染率和发病率居高不下,极大地降低了羊养殖业的经济效益。准确可靠的检测手段是诊断寄生虫感染、制定驱虫治疗方案、耐药监测及流行病学调查的关键环节。本文详细介绍了羊捻转血矛线虫病的检测技术研究现状,分析了病原学、免疫学及分子检测等方法的优缺点,并对未来检测技术发展趋势进行了展望,以期为该病新型检测方法的研发及综合防控策略提供参考。
- 张少华王帅邹扬刘仲藜才学鹏
- 关键词：捻转血矛线虫病原学检测免疫学检测分子检测
- 猪带绦虫Ddi1-like蛋白的真核表达及其抗血清的制备
- 2017年
- 为了对DNA损伤诱导蛋白1(Ddi1-like)基因功能进行研究,本研究参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,通过设计5′和3′端特异性引物,利用cDNA末端快速扩增法(RACE)获得全长cDNA,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达;将纯化后的Ddi1-like重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果,成功利用RACE获得Ddi1-like基因的全长cDNA序列;在真核表达系统中,绦虫上的Ddi1-like重组蛋白获得表达;SDS-PAGE和Western-blot分析表明,获得重组蛋白即为Ddi1-like蛋白;免疫后获得抗血清,其效价达到1∶12 800。上述结果为后续研究Ddi1-like蛋白的酶切活性研究提供了基础。
- 何伟殷静岳生赟刘仲藜王帅才学鹏
- 关键词：绦虫真核表达
