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毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及表达分析被引量：5: 2014年; 利用同源克隆技术得到1个毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因,命名为PcAPX。该基因编码249个氨基酸残基,预测分子量为33.01kD。采用原核表达技术在大肠杆菌中表达并纯化该蛋白并进行酶活性分析,结果表明:重组PcAPX蛋白对抗坏血酸(AsA)和过氧化氢(H2O2)有很高的活性,其对抗坏血酸的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为(0.71±0.03)mmol·L-1和(0.41±0.02)mmol·L-1·min-1·mg-1;对过氧化氢的Km和Vmax分别为(0.60±0.21)mmol·L-1和(0.35±0.12)mmol·L-1·min-1·mg-1,表明PcAPX对AsA和H2O2拥有较高的催化底物的能力和催化效率。利用实时定量RT-PCR分析毛白杨PcAPX基因的表达模式,结果表明其在老叶中表达量高于新叶、韧皮部、形成层和根部。该研究结果将进一步促进毛白杨APX基因家族成员参与植物生长调控的研究。; 张蕾王昱堃刘蕾尹玢曹山陆海; 关键词：毛白杨克隆原核表达酶学分析

转录组分析氧化胁迫对毛白杨悬浮细胞生长发育的影响被引量：3: 2019年; 【目的】毛白杨是多年生木本植物,由于其固着的生长模式,毛白杨存在长期承受胁迫的可能性。氧化胁迫是常见的非生物胁迫方式,在多个物种中均有不同程度的研究,然而以毛白杨为材料在转录水平的研究目前鲜有报道。通过转录组数据探明活性氧平衡的打破对毛白杨悬浮细胞生长发育的影响。【方法】本研究对毛白杨悬浮细胞系进行H2O2胁迫处理,通过激光共聚焦显微镜和转录组测序技术(RNA-Seq),观察、分析了线粒体的形态学和基因表达量的差异。【结果】通过对转录组数据的分析得到了806个显著差异基因(P <0.001且|log2ratio|> 1),其中449个差异基因下调,357个差异基因上调。这些差异基因涉及细胞分裂、细胞分裂素的激活、赤霉素调控以及磷酸化途径。通过线粒体特异性染料并使用激光共聚焦显微镜观察氧化胁迫条件下毛白杨线粒体的形态学,结果表明氧化胁迫下线粒体以蠕虫状为主。【结论】通过分析氧化胁迫条件下细胞转录组数据,在RNA水平揭示了氧化胁迫对植物细胞生长发育的影响,为植物的应激反应和生长发育研究提供了理论基础。; 尹玢陆海; 关键词：毛白杨活性氧悬浮细胞生长发育转录组测序

毛果杨漆酶基因PtrLAC-2的原核表达与多克隆抗体制备研究: 2018年; 目的:克隆毛果杨漆酶基因PtrLAC-2,并对其进行原核表达,同时制备高特异性、高效价的PtrLAC-2多克隆抗体,为研究漆酶基因蛋白在体外结构与功能奠定基础。方法:利用拟南芥中的漆酶基因序列对毛果杨基因组数据库进行同源检索,PCR同源克隆并扩增得到毛果杨PtrLAC-2基因序列,将其亚克隆到pET30a(+)载体得到PtrLAC-2-pET30a(+)原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达并纯化得到PtrLAC-2重组蛋白。采用皮下免疫法将纯化的PtrLAC-2蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,用ELISA和Western blot检测血清多克隆抗体的效价和特异性。结果:克隆获得了毛果杨漆酶基因的序列(命名PtrLAC-2,基因登录号XP_002308164),成功构建了PtrLAC-2-pET30a(+)原核表达载体,诱导表达获得了62 KDa的重组蛋白,ELISA检测显示抗体效价达1:102,400,经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性检测毛果杨中的PtrLAC-2蛋白。结论:毛果杨漆酶PtrLAC-2基因可以在体外成功进行原核表达,同时获得了高特异性、高效价的兔抗PtrLAC-2多克隆抗体,为后续研究该酶生化功能提供了一定的理论基础。; 李盈李嘉鑫滕晓瞳郭晓蕊程子义尹玢张永卓陆海李慧; 关键词：漆酶基因克隆原核表达多克隆抗体

油松合子胚愈伤组织诱导和悬浮细胞系的建立被引量：1: 2018年; 松属植物的离体培养一直是国内外的研究重点,油松(Pinus tabuliformis Carr)是我国特有的常绿裸子植物,具有丰富的经济价值。本研究以油松合子胚为研究对象,通过组织培养诱导出愈伤,多次继代得到稳定增殖的愈伤组织,继而液体培养得到油松悬浮细胞。结果表明,油松在DCR培养基上诱导愈伤组织效果较好,使用激素浓度为2.0 mg/L 2,4-D+ 0.63 mg/L 6-BA + 0.61 mg/L KT + 0.1 μM BR的培养基诱导率可达82.9%;继代培养基为DCR + 1.1 mg/L 2,4-D + 0.45 mg/L 6-BA + 0.43 mg/L KT,固体继代获得稳定增殖的愈伤,液体培养得到油松悬浮细胞系。该方法可以为油松的遗传转化研究提供材料,也为今后油松的组织培养再生成苗提供思路。; 滕晓曈李嘉鑫李盈程子义尹玢张永卓李慧陆海刘頔; 关键词：油松合子胚悬浮细胞

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尹玢