常艳
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院国家生物医学分析中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- CUEDC2突变体的构建及在原核和昆虫表达系统中的表达被引量：1
- 2011年
- 为构建CUEDC2的突变体并在原核和昆虫表达系统中表达验证,根据人cuedc2序列设计引物,以其突变体质粒为模板PCR扩增目的片段,酶切后连接至pET28a原核表达载体以及pFastBac1-Flag-N和pFastBac-HTA昆虫表达系统的表达载体。转化至DH5α后提取质粒,经菌液PCR、测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)及DH10Bac感受态细胞中。原核表达载体在E.coli中表达后用Ni-NTA亲和纯化,SDS-PAGE检测。昆虫表达载体提取杆粒,转染至昆虫细胞Sf9中表达。最后用western进行鉴定。结果成功构建了CUEDC2的突变体,并在原核和昆虫表达系统中表达。说明在原核和昆虫表达系统中,成功表达的CUEDC2突变体蛋白为CUEDC2的结构和功能研究奠定了基础。
- 王玉博高彦飞李腾常艳穆蕊徐金敬王芊艺巩伟丽于鸣李慧艳
- 关键词：CUEDC2昆虫突变体
- HeLa/GFP—H2B细胞系的构建及对其有丝分裂进程的动态观察被引量：3
- 2011年
- 准确的染色体分离依赖于有丝分裂过程的精确调控,包括有丝分裂的时间,及纺锤体检查点的正确调控等。通过动态观察有丝分裂染色体的运动可对上述研究进行精确定量。结果显示,利用逆转录病毒系统成功构建了稳定融合表达绿色荧光蛋白GFP—H2B的HeLa细胞系,结合细胞同步化方法,建立了一套利用活细胞荧光共聚焦显微镜观察HeLa细胞有丝分裂的实验体系。
- 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：有丝分裂细胞同步化
- 长链非编码RNA21905在有丝分裂期中的功能研究
- 2017年
- 长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类长度超过200 nt,并不编码蛋白质的RNA分子。近年来关于lncRNA的研究逐渐成为热点,但绝大部分lncRNA的功能仍不清楚。本实验室前期Arraystar lncRNA芯片分析发现lncRNA21905在有丝分裂期的表达量显著高于细胞分裂间期,提示该lncRNA在有丝分裂期中可能有一定功能。研究通过siRNA干扰技术,在肿瘤细胞中敲低lncRNA21905,发现敲低该lncRNA可导致肿瘤细胞有丝分裂期的明显阻滞。此外,TANRIC数据库分析表明,lncRNA21905高表达的肾透明细胞癌患者预后较差。综上所述,研究表明lncRNA21905在肿瘤细胞有丝分裂期中发挥了重要调控作用,这可能为进一步揭示其参与肾透明细胞癌预后提供理论基础。
- 胡怀斌王光常艳秦璇和李慧艳
- 关键词：有丝分裂期肾透明细胞癌
- 体外APC/C活性体系的建立及其影响因素的研究
- 2011年
- 为获得具有细胞周期后期促进复合物(APC/C)活性的细胞裂解液并建立APC/C体外活性检测体系,以其底物Cyc-lin B及Securin的降解为检测指标,分别从细胞阻滞于有丝分裂期的时间,UBCH10(APC/C的E2酶)的浓度以及裂解液浓度等几个方面研究了各种处理因素对APC/C活性的影响,并且用体外翻译底物验证了其活性及相关结论。此项工作为进一步探索APC/C相关分子事件奠定了基础。
- 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：CYCLINSECURINUBCH10活性
- Mad2蛋白在有HeLa细胞有丝分裂期的动态定位
- 2011年
- 在细胞有丝分裂中纺锤体检查点对保证遗传信息的稳定性有着重要的调控意义。其中Mad2蛋白作为纺锤体检查点蛋白在前中期被招募到未与微管正确结合的着丝粒上,从而保证纺锤体检查点的激活并抑制后期的开始。通过活细胞荧光共聚焦显微镜对Mad2的定位动态追踪,定量了其在有丝分裂过程中位于着丝粒上的光强变化,从而为研究纺锤体检查点的功能提供了依据。而Mad2本身的蛋白表达过强过弱均可导致肿瘤的发生,因此通过对其有丝分裂中光强的定量也为研究肿瘤的发生机制提供了线索。
- 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：MAD2有丝分裂
- COPS3的稳定干涉细胞系建立及其在NLRP3炎症小体激活中的作用被引量：2
- 2015年
- COPS3(COP9 signalosome subunit 3)作为COP9信号复合体的第三个亚基,在多种恶性肿瘤中高表达。本实验室通过酵母双杂交系统筛选,发现COPS3与NLRP3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3)存在相互作用。目前关于COPS3与NLRP3炎症小体的相关性未见文献报道。为了研究COPS3对NLRP3炎症小体的影响,利用慢病毒感染系统建立了稳定干涉COPS3的THP1细胞系。首先将COPS3的不同干涉序列片段稳定整合到THP1细胞中,通过嘌呤霉素压力筛选,应用实时定量荧光PCR(real time PCR)手段检测COPS3的干涉效果,最终确定成功建立干涉COPS3的稳定细胞株。在稳定敲低COPS3的细胞株中,发现NLRP3炎症小体的激活受到明显抑制。综上提示,COPS3能够正向调节NLRP3炎症小体的激活。
- 郭赛赛常艳涂海情徐广秦璇和吴敏李慧艳李爱玲
- 关键词：慢病毒
- 体外反应体系中APC/C活性及相关研究
- 2011年
- 为利用体外反应体系研究纯化的细胞周期后期促进复合物(APC/C)相关的分子事件,以其底物泛素化为检测指标,分别从来源细胞裂解液浓度,不同底物间泛素化强度,以及与纺锤体检查点复合物的解离等几方面进行了研究。结果显示,由浓度高的细胞裂解液纯化出的APC/C活性高,其对底物Geminin的泛素化活性较Cyclin B高,在APC/C活性由被抑制到释放过程中,APC/C与Mad2,BubR1结合减少且Cdc20泛素化增强。
- 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：底物活性解离
- SOX11结合p53并上调其转录活性被引量：1
- 2010年
- 目的:研究SOX11对p53转录活性的影响,并检测二者的体外相互作用。方法:在H1299(p53缺失)和H460(含野生型p53)2种细胞中分别过表达SOX11和p53,用双萤光素酶方法测定p53的转录活性;用大肠杆菌DH5α表达GST和GST-p53融合蛋白并将其纯化,用GST pull-down实验检测SOX11与p53在体外是否存在相互作用。结果:萤光素酶实验结果表明,在H1299和H460细胞中,过表达SOX11分别能促进外源p53和内源p53的转录活性;GST pull-down实验表明SOX11能在体外与p53发生相互作用。结论:SOX11能在体外与p53发生相互作用并促进p53的转录活性,为进一步研究p53的功能提供了新的线索。
- 常艳张维娜李腾高彦飞李慧艳满江红梁冰巩伟丽于鸣潘欣
- 关键词：P53相互作用转录活性
- 囊泡运输蛋白SNAP23对肿瘤细胞有丝分裂的调控作用
- 2019年
- 目的研究囊泡运输蛋白SNAP23对肿瘤细胞有丝分裂的调控作用,为基于其细胞周期调控的抗肿瘤治疗策略提供理论基础。方法在HEK293T细胞中过表达细胞周期重要激酶CDK1的激活形式或灭活形式,检测二者是否会使SNAP23发生磷酸化修饰,并在肿瘤细胞中用两条不同序列的siRNA敲低SNAP23,采用Time lapse活细胞成像技术检测敲低SNAP23对有丝分裂期进程的影响,利用TCGA数据库分析SNAP23在肿瘤和癌旁组织的表达差异。结果 SNAP23能被激活形式的CDK1激酶复合体磷酸化,而不能被灭活形式的CDK1激酶复合体磷酸化;与对照敲低组比较,在肿瘤细胞中敲低SNAP23(SNAP23敲低组)可引起细胞有丝分裂的明显阻滞(P<0.01),其有丝分裂的前中期时间显著延长(P<0.01);TCGA数据库分析表明,与癌旁组织相比,SNAP23的mRNA表达量在胆管癌中明显升高(P<0.01)。结论囊泡运输蛋白SNAP23能被有丝分裂期重要激酶CDK1激酶复合体磷酸化,并调控肿瘤细胞的有丝分裂期进程。结合数据库分析,提示SNAP23的异常表达可能通过调控肿瘤细胞的细胞周期参与肿瘤的发生发展。
- 常艳郭赛赛李佩瑶许钰铃李慧艳
- 关键词：CDK1有丝分裂期胆管癌
