张双翼
- 作品数：15 被引量：10H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 奶牛骨髓源单核巨噬细胞诱导培养方法建立鉴定及应用
- 2024年
- 为了建立奶牛骨髓源巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,选用3种不同的培养基(RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12)分别添加20%胎牛血清(FBS)、2.4%青-链霉素、1.2%谷氨酰胺(Gln)、M-CSF(20μg/L)将奶牛骨髓中提取出的单核细胞诱导为巨噬细胞,再通过加入脂多糖(Lipolyaccharide,LPS)将诱导出的M0型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞,光学显微镜在第1、4、7天观察巨噬细胞形态,比较3种培养基对分化巨噬细胞的差异。同时探究了前列腺素D_(2)(Prostaglandin D_(2),PGD_(2))-DP_(2)受体途径对大肠杆菌(Escherichia coli)诱导细胞因子(IL-6、TNF-α)分泌及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果显示,RPMI-1640培养基中培养的细胞形态变化最为明显,且数量较多。并能够检测到大量的单核巨噬细胞特征性标志物(M0标志物:CD11b、CD14;M1标志物:CD11b、CD80)的表达,M0和M1型巨噬细胞纯度分别为79.9%和93.5%。与空白对照组相比,E.coli感染组COX-2和H-PGDS基因表达显著升高;PGD_(2)分泌量也显著上升(P<0.0001)。DP_(2)受体抑制剂(CAY10471、CAY10595)能够显著抑制E.coli诱导促炎性细胞因子(IL-6、TNF-α)的分泌和显著增强巨噬细胞对E.coli的杀伤作用。结果表明,诱导的细胞具有巨噬细胞特有的形态学特征和免疫表型;E.coli可诱导巨噬细胞PGD_(2)的产生,PGD_(2)-DP_(2)途径对E.coli感染的巨噬细胞细胞因子的分泌具有一定的调控作用。
- 王钰杨效林郭莉莉龚鹏飞吴敬泽毛伟张双翼张双翼曹金山
- 关键词：奶牛分离培养鉴定
- 在LPS诱导的天然免疫反应中前列腺素D_(2)与TLR2和TLR4的相互调控作用
- 2023年
- 体外培养小鼠腹腔巨噬细胞后通过实时荧光定量PCR、Western blot、ELISA和流式细胞仪检测,分析模式识别受体TLR2和TLR4对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导巨噬细胞前列腺素D合成酶表达和PGD_(2)分泌的影响。结果显示,在TLR2或TLR4缺失的情况下,LPS诱导巨噬细胞中H-PGDS和COX-2基因或蛋白的表达(P<0.05),以及PGD_(2)的分泌(P<0.01)会受到不同程度的影响。此外,分析了内外源性PGD_(2)对LPS诱导巨噬细胞TLR2和TLR4表达的影响。结果显示,前列腺素D合成酶抑制剂HQL-79和H-PGDS inhibitorⅠ预处理可显著下调LPS诱导TLR2的表达(P<0.001)。但是,当使用外源性PGD_(2)后,LPS诱导巨噬细胞TLR4的表达水平发生显著下调,而不是TLR2(P<0.05)。结果表明,TLR2和TLR4参与LPS诱导巨噬细胞中PGD_(2)合成分泌,且内外源性PGD_(2)对LPS刺激巨噬细胞诱导TLR2和TLR4的表达具有不同调控作用。
- 李成应巩志国张双翼刘博毛伟
- 关键词：脂多糖环氧合酶-2
- MLKL在小鼠皮肤伤口愈合过程中的作用
- 2024年
- 为探究MLKL对肌成纤维细胞和巨噬细胞间相互作用过程中的调控作用及对小鼠皮肤伤口愈合的影响,分别构建野生型C57BL/6J小鼠和MLKL基因敲除(MLKL^(-/-))小鼠背部创伤模型,分析皮肤伤口愈合情况。体外培养野生型C57BL/6J和MLKL^(-/-)小鼠肌成纤维细胞及骨髓源巨噬细胞,使用小鼠耳源肌成纤维细胞培养上清液(Myofibroblast conditioned medium,MFbCM)处理野生型C57BL/6J小鼠M1和M2型巨噬细胞,检测M1型巨噬细胞IL-6、TNF-α及NO的分泌量。检测M2型巨噬细胞精氨酸酶(Arginase)及几丁质酶3样分子(Ym1)的表达量。结果显示,1)相比于野生型C57BL/6J小鼠,MLKL^(-/-)小鼠伤口收缩更为缓慢。在损伤后第5、7和10天,野生型C57BL/6J小鼠创面收缩率显著高于MLKL^(-/-)小鼠(P<0.001)。2)MLKL缺失显著降低伤口表面Ym1和Arginase的表达,在损伤后第5、7和10天差异显著(P<0.001)。此外,MLKL的缺失影响了MFbCM上调M2型巨噬细胞Ym1和Arginase表达的能力。表明MLKL可能参与调控MFbCM诱导的M2型巨噬细胞分泌活动。3)MFbCM可促进M1型巨噬细胞IL-6、TNF-α和NO的表达,且依赖于MLKL的存在,表明MLKL可能参与调控MFbCM诱导的M1型巨噬细胞分泌活动。综上,本研究确定了MLKL参与巨噬细胞和肌成纤维细胞间相互作用,这种相互作用在伤口愈合的每个阶段都是必不可少的。因此,该研究将有助于更好地理解MLKL在创伤愈合中的作用,为创面愈合提供新的治疗策略。
- 包文慧赵佳敏巩志国白云洁于琢雅刘博毛伟张双翼
- 关键词：创伤愈合巨噬细胞肌成纤维细胞
- 基于网络药理学和分子对接探究中药复方防治奶牛乳房炎的作用机制被引量：2
- 2023年
- 【目的】通过网络药理学和分子对接技术对蒲公英、连翘和金银花组成的中药复方进行分析及预测,探究该复方在防治奶牛乳房炎中的作用。【方法】通过TCMSP和Herb数据库对中药复方蒲公英、连翘和金银花主要活性成分及相关靶点进行挖掘,于GeneCards和DisGeNET数据库查找奶牛乳房炎的相关靶点取交集,得到该中药复方防治奶牛乳房炎的关键靶点,并构建蛋白互作(PPI)网络;通过DAVID数据库对核心靶点进行GO功能与KEGG通路富集分析;通过AutoDock软件进行分子对接,并运用PyMOL对分子结果进行可视化处理。【结果】中药复方的有效活性成分主要包括山奈酚、七叶苷原、槲皮素、香豆素等,这些药物成分主要作用靶点370个,奶牛乳房炎的相关靶点216个。该中药复方防治奶牛乳房炎有32个预测靶点,主要包括白细胞介素6(IL6)、趋化因子8(CXCL8)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、表皮生长因子受体(EGFR)、肿瘤抑制基因(TP53)和Toll样受体4(TLR4)等。对上述32个靶点进行富集分析发现与正向调控RNA聚合酶Ⅱ启动子转录和正向调控IL10产生等生物过程,细胞核、细胞质、细胞外间隙等细胞组分,细胞因子活性、生长因子活性和受体连接等分子功能,以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路(P13K-Akt)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)和癌症等通路相关。分子对接结果表明,该中药复方主要活性成分山奈酚和槲皮素均与关键靶点CXCL8和EGFR具有良好的结合活性。【结论】由蒲公英、连翘和金银花组成的中药复方可通过多成分、多靶点和多通路共同防治奶牛乳房炎。本研究为兽医临床应用该中药复方治疗奶牛乳腺炎提供了理论依据。
- 王超巩志国刘鑫煜赵佳敏杨效林王钰于琢雅白云洁曹金山刘博张双翼毛伟高瑞峰
- 关键词：中药复方网络药理学分子对接奶牛乳房炎
- PGE2参与NLRP3介导的小鼠肌成纤维细胞与巨噬细胞间相互作用
- 引言/目的皮肤创伤的愈合是一个复杂的过程,需要多种细胞的相互协作以及多种细胞因子的参与。其中,巨噬细胞和肌成纤维细胞的相互作用对于组织修复是不可或缺的。天然免疫系统中的模式识别受体NOD样受体蛋白3 （NLRP3）可能对...
- 赵佳敏毛伟张双翼哈斯苏荣刘博
- MLKL对金黄色葡萄球菌感染所致小鼠肝脏和肾脏损伤的调控作用
- 2024年
- 运用ELISA、免疫荧光法、苏木素-伊红染色法以及流式细胞术分析了金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)分别感染MLKL基因敲除(MLKL^(-/-))和C57BL/6J小鼠后肝脏和肾脏中促炎性细胞因子(TNF-α和IL-1β)和抗炎因子(IL-10)的分泌、组织脏器的损伤水平、血液中中性粒细胞募集和小鼠存活情况。结果显示,在S.aureus感染MLKL^(-/-)小鼠肝脏和肾脏中TNF-α的分泌水平显著高于C57BL/6J小鼠肝脏和肾脏中TNF-α的分泌水平(P<0.001)。此外,S.aureus感染C57BL/6J小鼠肝脏和肾脏中,IL-10的分泌水平显著高于MLKL^(-/-)小鼠(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,与C57BL/6J小鼠相比,S.aureus感染MLKL^(-/-)小鼠后肝脏和肾脏中组织损伤标志物HMGB1蛋白表达处于较高水平(P<0.01)。病理切片结果显示,使用S.aureus感染后,MLKL^(-/-)小鼠肝脏和肾脏损伤程度显著高于C57BL/6J小鼠。S.aureus感染后,MLKL^(-/-)小鼠血液中CD11b和Gr-1双阳性的比例显著高于C57BL/6J小鼠血液中的比例(P<0.01)。使用高低剂量S.aureus分别感染小鼠后,发现MLKL^(-/-)小鼠的生存率低于C57BL/6J小鼠。结果表明,MLKL对S.aureus感染诱导的宿主细胞因子分泌具有一定的下调作用,进而发挥对宿主脏器损伤的保护作用,降低小鼠的病死率。
- 刘博巩志国赵佳敏于琢雅刘谕泽白云洁王超秦少杰吴敬泽包文慧张双翼
- 关键词：脏器损伤小鼠
- 前列腺素D_(2)对大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织中细胞因子和损伤相关因子表达的影响
- 2024年
- 以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,运用ELISA、荧光定量PCR、HE染色和免疫荧光法分析了内源性和外源性前列腺素D_(2)(prostaglandin D_(2),PGD_(2))在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)感染奶牛子宫内膜组织过程中对细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和损伤相关因子(HMGB-1)表达的调控作用。结果显示,与空白对照组相比较,E.coli感染组奶牛子宫内膜组织中COX-2和H-PGDS的基因表达显著升高(P<0.001);PGD_(2)分泌量也显著上升(P<0.001);内源性PGD_(2)抑制剂(H-PGDS inhibitor 1、HQL-79)能够显著抑制E.coli感染奶牛子宫内膜组织中促炎细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的分泌、损伤相关因子(HMGB-1)的表达并减轻了组织损伤;外源性添加PGD_(2)后可显著促进E.coli感染奶牛子宫内膜组织中促炎细胞因子的分泌,HMGB-1的表达及组织损伤程度明显增加。结果表明,PGD_(2)能够通过调控E.coli感染奶牛子宫内膜组织的过程促炎细胞因子和损伤相关因子的表达,进而加剧了由细菌感染引起的组织损伤。
- 郭莉莉杨效林龚鹏飞王钰钱英红张双翼何建文刘博刘博曹金山
- 关键词：大肠杆菌细胞因子
- 金黄色葡萄球菌对奶牛中性粒细胞PGE_(2)的分泌及其合成酶COX-2和mPGES-1的影响
- 2023年
- 为了阐明金黄色葡萄球菌感染奶牛中性粒细胞过程中炎症介质PGE_(2)分泌的变化及机制,本试验以体外培养的奶牛中性粒细胞为研究对象,应用金黄色葡萄球菌对其进行感染,采用RT-PCR、Western-blot检测COX-2、m PGES-1基因和蛋白的表达,ELISA检测细胞上清PGE_(2)的分泌量。结果显示,与空白对照组(CON)相比,金黄色葡萄球菌(SA113)组感染奶牛中性粒细胞中COX-2、m PGES-1基因和蛋白的表达明显增高(P<0.001),细胞上清中PGE_(2)的分泌量在感染后第3小时无明显变化(P>0.05),但在第6小时和第9小时分泌量明显上升(P<0.05,P<0.01),在第12小时和第24小时分泌量极显著升高(P<0.001)。为进一步证明COX-2和m PGES-1是否对PGE_(2)的分泌产生影响,本试验加入COX-2抑制剂CAY10404和m PGES-1抑制剂MF63,使用ELISA和RT-PCR检测细胞上清中PGE_(2)的分泌和细胞中PGE_(2)基因的表达。结果显示,在感染后第12小时和第24小时与金黄色葡萄球菌(SA113)组相比,加入CAY10404、MF63和同时加入CAY10404、MF63抑制剂时细胞上清和细胞中PGE_(2)的分泌及其基因的表达明显降低(P<0.001)。结果表明:在24 h内金黄色葡萄球菌感染奶牛中性粒细胞过程中COX-2和m PGES-1合成酶的基因和蛋白的表达及炎症介质PGE_(2)的分泌都是随着细菌感染时间的增加逐渐升高且PGE_(2)的合成和表达受COX-2和m PGES-1合成酶的影响。本试验证明了金黄色葡萄球菌可通过提高奶牛中性粒细胞COX-2和m PGES-1合成酶的表达进而促进炎症介质PGE_(2)的分泌。
- 张凯姜雪莹钱英红王超曹金山刘博刘博巩志国张双翼
- 关键词：金黄色葡萄球菌环氧合酶2
- 布劳恩脂蛋白耐受对大肠杆菌感染诱导奶牛子宫内膜炎症反应的调控作用
- 2024年
- 子宫内膜炎是奶牛常见的生殖障碍疾病,大肠杆菌是引起该病的主要病原微生物。耐受是宿主的一种防御策略,可以减少感染对宿主适应性的负面影响。但布劳恩脂蛋白(Braun lipoprotein,BLP)耐受是否对大肠杆菌感染诱导的奶牛子宫内膜炎具有调控作用目前尚不清楚。本研究分析了BLP对大肠杆菌感染后子宫内膜上皮细胞和子宫内膜组织中炎症介质分泌的影响,以及BLP对子宫内膜组织中HMGB1的表达水平。此外,探究了BLP对子宫内膜上皮细胞中信号通路激活的影响。试验结果表明,BLP的存在可显著下调脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞和子宫内膜组织中促炎性细胞因子的分泌水平,同时上调抗炎因子分泌水平。免疫荧光结果表明,BLP可显著降低奶牛子宫内膜组织中HMGB1的表达。值得注意的是,BLP的存在可显著下调LPS或大肠杆菌刺激诱导的MAPK p38和NF-κB p65的磷酸化水平。结果表明,BLP耐受在大肠杆菌诱导的子宫内膜炎中起着至关重要的作用,BLP耐受可显著降低奶牛子宫组织的炎症反应。
- 于琢雅巩志国任佩佩赵佳敏毛伟张双翼刘谕泽吴敬泽刘博
- 关键词：耐受奶牛子宫内膜炎大肠杆菌脂多糖
- NLRP3参与奶牛肌成纤维细胞和M1型巨噬细胞的相互作用
- 2024年
- 在奶牛养殖过程中,物理性致伤、细菌感染等因素作用于机体组织或器官,使皮肤或黏膜组织等完整性被破坏而导致组织损伤和创伤的出现。损伤愈合是一个复杂的过程,需要多种细胞的相互协作以及多种细胞因子的参与。其中,巨噬细胞和肌成纤维细胞的相互作用对于组织修复是不可或缺的。天然免疫系统中的模式识别受体NOD样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)可能对机体组织修复过程具有调控作用。本试验通过体外培养奶牛肌成纤维细胞及M1型骨髓源巨噬细胞,收集细胞培养上清液进行共培养,检测M1型骨髓源巨噬细胞中细胞因子的分泌、肌成纤维细胞生长因子蛋白及mRNA表达。通过使用NLRP3抑制剂MCC950探讨NLRP3在2种细胞相互作用过程中发挥的调控机制。结果显示,本试验成功建立了体外培养奶牛肌成纤维细胞方法。肌成纤维细胞培养上清液(myofibroblast conditioned medium,MFbCM)能够调节M1型巨噬细胞促炎因子分泌活动,M1型巨噬细胞培养上清液(M1macrophage conditioned medium,M1CM)能够调节肌成纤维细胞生长因子表达,且NLRP3参与2种细胞间相互作用。结果表明,NLRP3在肌成纤维细胞和M1型骨髓源巨噬细胞的相互作用过程中具有一定的调控作用。
- 白云洁赵佳敏巩志国包文慧于琢雅王超毛伟张双翼刘博
- 关键词：NLRP3肌成纤维细胞巨噬细胞奶牛
