戴丹凤
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华侨大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省高校产学合作科技重大项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- NADH氧化酶的产酶条件优化及酶纯化
- 大部分氧化还原酶的催化反应需要烟酸型辅酶NAD(P)和NAD(P)H作为氧化剂或还原剂参与,由于氧化还原酶应用广泛且辅酶价格昂贵,使得辅酶再生逐渐成为研究热点。从短
- 陈巍方柏山林锡煌戴丹凤
- 短乳杆菌产NADH氧化酶的发酵及纯化
- 2010年
- 有氧环境下,利用优化后的发酵培养基,研究短乳杆菌(Lactobacillus brevis)产NADH氧化酶(NOX)的发酵条件.采用8层纱布,在温度为30℃,pH=7.0,转速为150 r.min-1的条件下发酵培养23 h,用pH值为5.8的0.1 mol.L-1磷酸钾缓冲液对细胞进行洗涤悬浮,超声波破碎(功率为400 W,超声2 s,间歇2 s,破碎12 min)后,测得其比活力可达2.317 mkat.g-1.通过DEAE Sepharose Fast Flow,Macro-Prep High Q和Hydroxyapatite-Ⅰ三步纯化后,其纯化倍数为3.11,回收率为8.50%.
- 陈巍林锡煌戴丹凤方柏山
- 关键词：短乳杆菌发酵纯化
- 甘油脱氢酶基因在大肠杆菌中的密码子优化表达被引量：3
- 2011年
- 【目的】利用密码子优化技术,提高甘油脱氢酶基因gldA在大肠杆菌中的表达水平。【方法】针对gldA起始密码子下游区域,优先选择AT含量最高的同义密码子,从而在不改变氨基酸序列的前提下,提高该区域的AT含量。利用大引物PCR的方法对野生型gldA-WT进行定点突变,获得优化型基因gldA-4,与pET-32a(+)连接后,构建表达质粒pET-gldA-4,转入E.coli BL21(DE3),得到工程菌E.coli-4。同时,设定包含gldA-WT的工程菌E.coli-WT作为对照,摇瓶发酵后,以甘油为底物检测比较表达产物的酶活力。【结果】gldA-4相对gldA-WT而言,改变了第2、5、6位密码子中的4个碱基,AT含量从53.3%提高到80.0%。相应地,E.coli-4的粗酶液的酶活力为191.3 U/mL,比E.coli-WT的48.3 U/mL提高了3倍多。【结论】本优化方案简便、快捷,但可明显提高甘油脱氢酶的酶活力,有望成为改善目的基因异源表达水平的一种通用方法。
- 唐龙盘余劲聪戴丹凤方柏山
- 关键词：甘油脱氢酶异源表达密码子优化大肠杆菌
