李慧瑾
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 供职机构：陕西师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划陕西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究被引量：2
- 2007年
- 目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆,然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白(greenfluo-rescent protein,GFP)的小干扰RNA克隆到以上表达载体中,通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果:同目前常用的含polIII的小干扰RNA表达载体相比较,用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论:用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。
- 李慧瑾郑晓晶张伟锋边晔王东阳赵俊丽夏海滨
- 关键词：小干扰RNA基因沉默微小RNA
- 人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备被引量：3
- 2008年
- 目的：利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素（canstatin）重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法：PCR法扩增canstatin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAd5-CMV中,获得穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin.用PacI酶单独酶切穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7~10d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果：测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒（病毒滴度为2.0×1015pt/L）.结论：成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础.
- 齐宗利李慧瑾王东阳赵俊丽边晔冯真真蒋羽清郑晓晶夏海滨
- 关键词：腺病毒载体血管能抑素绿色荧光蛋白质类
- 肿瘤血管生成调节与肿瘤治疗被引量：3
- 2008年
- 肿瘤血管生成是一个非常复杂的过程,涉及到多种因子的调节。针对肿瘤血管生成的治疗对策在目前肿瘤治疗中具有十分重要的意义。本文就影响肿瘤血管生成的各种调节因子、抗血管生成的主要治疗靶标及研发现状作一综述,为肿瘤治疗的抗血管生成新靶标的设计研究提供信息。
- 李慧瑾夏海滨
- 关键词：血管生成肿瘤治疗靶标
- 人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体的构建及其表达被引量：3
- 2009年
- 目的:人endostatin、K5及endostatin-K5基因克隆,重组腺病毒载体的构建及其表达产物体外活性检测。方法:采用PCR方法扩增基因,通过酶切连接方法将3种基因片段克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His中;用磷酸钙沉淀法分别将经PacI酶切的表达人endostatin、K5及endostatin-K5的腺病毒shuttle载体与PacI酶切的腺病毒骨架共转染HEK293细胞;用CsCl密度梯度离心法纯化制备病毒;用重组腺病毒感染HeLa细胞并在不同时间点收获蛋白,Western blot检测24h、48h和72h的蛋白表达量;通过MTT方法检测蛋白对ECV-304生长抑制作用。结果:成功制备表达人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体;Westernblot可以检测到蛋白表达,蛋白表达量随病毒感染HeLa细胞的时间延长而逐渐增高;由重组腺病毒所表达的3种蛋白对ECV304细胞均有明显的生长抑制作用。结论:由含有人en-dostatin、K5及endostatin-K5基因的重组腺病毒载体所表达的蛋白对ECV-304生长具有明显的抑制作用。
- 李慧瑾张伟锋王东阳李荣华齐宗利赵俊丽夏海滨
- 关键词：ENDOSTATINK5腺病毒载体MTT检测肿瘤
