索伦
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- CRISPR/Cas9技术的应用性研究被引量：3
- 2016年
- 旨在探索CRISPR/Cas9技术的新应用,本研究通过在小鼠遗传操作(Genetic manipulation)中使用该技术,创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和PCR分析等手段,结果发现,针对DCX基因进行编辑,再现了DCX下调导致神经元迁移障碍的表型,说明该技术能够用于小鼠遗传操作中下调基因表达;其次,该技术还成功应用于Pcdhα基因簇的编辑并研究了基因簇恒定区的功能;最后,通过基因型鉴定发现,胚胎电转中使用CRISPR/Cas9会导致目的基因的敲除、反转和重复事件的发生。综上所述,在小鼠胚胎电转中使用CRISPR/Cas9技术,能够成功编辑目的基因,从而实现活体组织内研究基因的在体功能。
- 舒磊磊甲芝莲吴勇浒索伦贾丽玲
- 关键词：基因敲除基因重复
- 小鼠原钙黏蛋白的多样性分析及其亚型的克隆与表达
- 2014年
- 原钙黏蛋白(protocadherin)是广泛分布于中枢神经系统的一类跨膜蛋白,是钙黏蛋白家族中最大的亚族。成簇Pcdh基因包含3个串联的基因簇——Pcdhα、β、γ,其中Pcdhα和γ分别由14个和22个可变区及各自共同的恒定区组成。这种特殊蛋白结构决定了原钙黏蛋白各亚型在功能上既相似又不完全相同,为了系统研究原钙黏蛋白各个亚型的功能,本研究对原钙黏蛋白家族氨基酸序列保守性进行了系统性分析,并据此设计特异性的引物来完成原钙黏蛋白各个亚型的克隆;并以原钙黏蛋白α1基因为例,通过PCR方法成功将其从小鼠大脑中克隆并构建到带有Myc标签的真核表达载体pc DNA3.1上;利用脂质体转染方法将该基因成功表达于293T细胞。本研究结果将为后续其他亚型的克隆建立技术平台。
- 王武明索伦周雨潇鲁琳吴强
- 关键词：基因克隆小鼠氨基酸序列
- 二代靶向测序在CRISPR/Cas9靶区筛选中的应用性研究被引量：1
- 2019年
- 旨在利用二代靶向测序技术比较不同靶区对CRISPR/Cas9基因编辑结局的影响,为该技术应用过程中的靶区筛选提供技术参考。本研究进行如下试验:1)以小鼠Pyk2基因为研究对象,针对其第一外显子区设计3个靶区,通过打靶质粒构建、细胞转染及转染细胞DNA二代靶向测序等手段发现,不同靶区总体的基因编辑(Indels)效率相差较大(site1:32.0%;site2:7.9%;site3:69.5%),编辑修复的偏好性也存在较大区别;而对于同一靶区,总编辑效率在2组试验重复中较为稳定(site1:31.8%vs 32.3%;site2:7.4%vs 8.4%;site3:71.3%vs 67.8%),编辑的偏好性也相对一致;2)针对上述筛出的最佳靶区site1,通过sgRNA与Cas9体外转录、小鼠胚胎显微注射和移植及子代的基因型鉴定等手段,结果发现,上述靶区的基因编辑偏好性在基因编辑动物生产中也得到证实;3)利用上述得到的site1靶区插入一个碱基的突变小鼠,在原靶区位置设计与site1仅相差一个碱基的sgRNA。通过突变小鼠基因组PCR和Cas9酶体外切割试验发现,靶区切割位点单碱基的插入就对该靶区编辑的效率产生显著影响(49.2%vs 0%)。综上所述,靶区选择对CRISPR/Cas9基因编辑的结局影响显著,通过二代靶向测序可以有效筛选CRISPR-Cas9基因编辑靶区,并在模式动物生产过程中也获得较好的结果。此外,针对靶区切割位点的单个碱基插入对基因编辑效率影响显著。
- 吴海波边雪娇贾丽玲索伦
- 关键词：PYK2
- 一种荧光报告基因元件、基因编辑监测系统及其用途
- 本发明公开了一种荧光报告基因元件、基因编辑监测系统及用途。所述基因元件包括依次连接的第一编码区、第二编码区和第三编码区；所述第一编码区包括第一荧光蛋白报告基因，所述第二编码区包括第二荧光蛋白报告基因，所述第三编码区包括第...
- 索伦吴海波边雪娇张硕吕祁峰匡延平
- 文献传递
- 反复种植失败,或是“种植窗”出错
- 2021年
- 近年来,辅助生殖技术不断发展,但目前单次胚胎移植的临床妊娠率仅为30%~40%,反复种植失败是无数患者的“噩梦”。子宫内膜容受性和胚胎质量是不孕患者必须重视的两个关键环节。随着胚胎实验室技术的发展,胚胎质量已有了保障,越来越多的子宫内膜容受性评估手段逐渐进入大众视野,子宫内膜容受性分析技术(ERA)就是其中之一。
- 索伦
- 关键词：子宫内膜容受性反复种植失败临床妊娠率胚胎质量种植窗不孕患者
- 一种荧光报告基因元件、基因编辑监测系统及其用途
- 本发明公开了一种荧光报告基因元件、基因编辑监测系统及用途。所述基因元件包括依次连接的第一编码区、第二编码区和第三编码区；所述第一编码区包括第一荧光蛋白报告基因，所述第二编码区包括第二荧光蛋白报告基因，所述第三编码区包括第...
- 索伦吴海波边雪娇张硕吕祁峰匡延平
- 长效CRISPR/Cas9基因编辑结局的动态追踪研究
- 2023年
- 旨在通过构建体外细胞模型研究在长效CRISPR系统作用下基因编辑的动态结局,为在体生殖系长效编辑提供研究支持。本研究以FANCF和VEGFA基因为例,通过慢病毒随机整合的方式构建了一套长效表达CRISPR/Cas9的细胞模型,并以该模型为对象研究长效CRISPR系统作用下,基因编辑效率和修复的动态结局。在FANCF和VEGFA基因外源靶点区域,随着Doxycycline诱导时间的增加,CRISPR/Cas9的编辑效率逐渐升高,并分别于第4天(FANCF)、第3天(VEGFA)编辑效率达到峰值;其次,对应上述靶区的内源靶点的达到峰值的时间点与外源靶点基本一致,但内源靶点的编辑效率显著高于外源靶点(P<0.0001);再次,对靶点编辑产物序列分析发现,在编辑的第4~7天,各靶点编辑产物的删除、插入及其它类型呈稳定状态,内、外源各位点编辑结局中删除、插入以及其它类型的占比趋势一致;最后,对FANCF靶点潜在的6个脱靶位点进行检测,均未发现任何脱靶现象。长效CRISPR/Cas9技术的编辑效率在第3或第4天达到峰值,各基因编辑结局类型占比趋势一致,且在FANCF位点上不会增加脱靶风险。
- 张硕周雨潇吴海波索伦
- 关键词：动物育种
- PCDHα在髓鞘形成和少突胶质细胞发育中的作用被引量：4
- 2012年
- 该文通过免疫组化及蛋白免疫印迹的方法分别对Pcdhα基因敲除和对照组小鼠的中枢神经系统内的髓鞘碱性蛋白表达以及少突胶质细胞的发育进行了测定。结果表明:1)Pcdhα基因缺失小鼠中枢神经系统中的髓鞘碱性蛋白较对照组小鼠明显减少;2)Pcdhα基因敲除可导致少突胶质细胞发育异常:在小脑中,处于成熟期的少突胶质细胞减少,而处于前体细胞阶段的少突胶质细胞增多。上述结果提示Pcdhα可以通过调控少突胶质细胞的成熟过程进而影响髓鞘的形成。
- 于钰索伦吴强
- 关键词：髓鞘少突胶质细胞发育
