胡志上
- 作品数：9 被引量：23H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 随机引物PCR鉴定分枝杆菌的方法学研究被引量：1
- 2005年
- 目的为了建立RAPD-PCR鉴定分枝杆菌的方法,同时了解其影响因素。方法采用不同引物及其浓度、不同DNA提取方法及其他反应条件进行随机引物PCR。结果分枝杆菌DNA提取后,-20℃30天内结果无影响。扩增的退火温度较低,对反应条件高度依赖。在研究中发现,实验条件的变化,可产生缺带现象,此时需要重复2次,如果3次扩增的指纹图谱相同,则可以确定。结论RAPD-PCR扩增条件的优化组合是获得稳定、可靠的分枝杆菌DNA指纹的关键。
- 熊礼宽胡志上
- 关键词：RAPD-PCRPCR分枝杆菌
- 中国广东地区肺结核HLA-DRB1*040101-44易感基因启动子序列研究被引量：3
- 2006年
- 目的分析中国广东地区肺结核患者HLA-DR易感基因启动子序列,以期了解HLA与广东地区人群肺结核发病的关联机制,探寻肺结核的发病机理。方法利用核苷酸数据库检索HLADRB1*040101-44易感基因启动子序列,依据启动子区保守序列,设计特异引物对启动子区序列进行PCR扩增,回收特异的PCR产物条带测序,对比结核病组和正常对照组、上述2组分别与网络核苷酸数据库公布的HLA-DR易感基因启动子序列。结果PCR扩增产物测序发现结核病组和对照组DRB1*040101-44启动子区序列一致,但对照组启动子序列与数据库检索序列相比有Y元件盒的变异:-166位的T被A替代,-150位的C被G替代,-137位的T被G替代,-121位的C被G替代,-98位的T被C替代,-73位的A被G替代;在-93到-88位的TATA框、-130到-125位的CAAT框以及-189到-179位的X元件盒中没有碱基变异。结论HLA-DRB1启动子区存在变异,其核酸变异发生在Y元件盒中,但此变异与中国广东地区人群肺结核发病无关联。
- 许丽杨应周谭卫国胡志上吴清芳张玉华罗育希
- 关键词：启动子HLA-DRB
- 深圳地区肺结核患者HLA-DR、DQ易感基因及其启动子序列研究
- 结核病是由结核分支杆菌所引起的一种传染性疾病,也是现阶段单因致死率最高的感染性疾病.从1953年~1985年,中国结核病发病率呈下降趋势,但上世纪90年代,这种下降趋势己不明显,甚至有些地区呈上升趋势.由于人口的流动以及...
- 胡志上
- 关键词：结核分枝杆菌非结核分枝杆菌随机扩增多态性DNAHLA-DRHLA-DQ易感基因PCR-SSP
- 文献传递
- HLA-DR和HLA-DQ基因型和单倍型在深圳地区结核病发病机制中的作用被引量：5
- 2006年
- 目的探讨HLA-DR和HLA-DQ单倍型在深圳地区结核病发病机制中的作用及机制。方法采用PCR-SSP技术对146例深圳地区肺结核患者及146例健康志愿者的HLA-DR的31个等位基因和HLA-DQ基因的8个等位基因行分型,比较两组间各等位基因频率(GF)和单倍型频率(HF)并计算其优势比(OR)。结果肺结核组DRB1*1601-1605/1607-1608、DRB1*040101-44位点的基因频率显著高于对照组(P均<0.05),其GF比和OR分别为14.39%vs8.59%、19.33%vs10.86%、1.85vs2.08;DR4-DRB4和DR16-DRB5单倍型频率在两组人群间有显著差异,肺结核组明显高于对照组(P均<0.05),其OR分别为2.35,2.97。结论DR4-DRB4和DR16-DRB5单倍型频率在两组人群间的显著差异可能分别是由DRB1*040101-44(DR4)和DRB1*1601-1605/1607-1608(DR16)在两组间的显著差异造成,后两者可能是深圳地区结核病发病的易感基因。
- 许丽杨应周谭卫国胡志上吴清芳张玉华罗育希
- 关键词：肺结核病基因型单倍型HLA-DR
- 钙网蛋白122～180片段基因克隆、表达和活性分析被引量：5
- 2004年
- 钙网蛋白是高等动物细胞中普遍存在的一种钙结合蛋白 ,近年发现它及其N端 1～ 180位氨基酸能抑制内皮细胞生长和血管生成 .为了寻找高效和小分子质量的血管生成抑制因子 ,用PCR技术扩增出钙网蛋白N端12 2～ 180位氨基酸的DNA序列 ,克隆进原核表达载体pET 3c ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导后 ,该片段以包涵体形式表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 35 4 % .包涵体经变性溶解、复性和初步纯化后 ,纯化产物可以抑制人脐静脉内皮细胞的生长 ,鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成和小鼠原位黑色素瘤的生长 .
- 陈宏张添元罗进贤胡志上
- 关键词：钙网蛋白内皮细胞血管血管生成抑制因子抗药性
- RAPD扩增分枝杆菌DNA优化条件及菌型分型的诊断应用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨随机扩增多态性DNA(RandomlyamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)技术在分枝杆菌分型诊断中优化条件及其应用价值。方法优化RAPD技术扩增分枝杆菌DNA的条件,并分别扩增深圳市临床病人分离株DNA,对比RAPD电泳条带特征。结果以条带稳定、丰富、清晰为标准,确定引物1RAPD最佳反应条件为50μl反应体系中,含100ng模板DNA,2.5mmol/LMgCl2,2UDNA聚合酶,引物0.5μmol/L,dATP、dGTP、dCTP和dTTP各250μmol/L,反应40个循环,每个循环为94℃1min,36℃1min,72℃2min。所扩增结核杆菌临床分离株的DNA条带丰富、清晰,各条带差异较明显。结论RAPD技术能较好地鉴别MTB和NTM。
- 许丽杨应周谭卫国林世平胡志上吴清芳张玉华
- 关键词：分枝杆菌结核杆菌RAPD
- 随机引物聚合酶链反应鉴定结核分枝杆菌的方法学研究及其应用
- 随机扩增多态性DNA(RAPD)方法具有高效、快速、简便、对标本要求不高、成本低和多态性信息量大等优点,它以一系列不同的随机排列碱基顺序的寡核苷酸单链(通常是十聚体)为引物,对所研究的基因组DNA进行单引物扩增.扩增DN...
- 熊礼宽胡志上
- 关键词：结核分枝杆菌随机引物聚合酶链反应DNA指纹图谱
- 文献传递
- 人血管能抑素基因的克隆、表达及其表达产物的纯化和生物活性测定被引量：5
- 2003年
- 以人胎盘脐带组织为材料 ,提取组织总RNA ,用net RT PCR方法合成人血管能抑素cDNA基因 ,将该cDNA克隆进pSP72载体获得重组质粒pSP72C ,DNA序列分析结果与预期序列一致。用BamHⅠ和NdeⅠ双酶切 ,切下pSP72C上的血管能抑素cDNA ,插入pET 3c载体的相应位点获得重组表达质粒pETC ,转化E .coliBL2 1 (DE3 ) ,SDS PAGE分析显示 :在IPTG诱导下 ,血管能抑素基因获得了高效表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 7 9% ,主要以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤、裂解、蛋白复性以及SephadexG 75凝胶过滤层析等步骤后 ,获得了纯度达 91 4%的人血管能抑素。CAM实验证明 1 0 μg纯化蛋白就能显著抑制鸡胚新生血管生成。
- 贺国安罗进贤张添元胡志上李瑞芳
- 关键词：蛋白纯化抗血管生成
