董伟 作品数:3 被引量:6 H指数:2 供职机构: 遵义医学院 更多>> 发文基金: 贵州省科技厅社会发展攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
壳聚糖-磺酸甜菜碱对人肝癌HepG-2细胞的siRNA递送实验研究 2017年 目的设计合成新型高分子材料壳聚糖-磺酸甜菜碱(CS-DMAAPS)化合物,并考察该材料与siRNA复凝后对人肝癌HepG-2细胞的转染能力。方法采取Michael加成法将含C=C双键的磺酸甜菜碱化合物(DMAAPS)与壳聚糖(CS)偶联接枝;利用核磁共振氢谱进行结构表征;CCK-8检测材料的细胞相容性;荧光显微镜观察siRNA的转染效率;Real-time PCR检测转染siRNA后对Bcl-2 mRNA的沉默效率。结果核磁共振氢谱数据表明:DMAAPS已成功枝接到CS上。荧光显微镜观察结果显示:质量比(m0/mt:CS-DMAAPS/siRNA)为32、16、8、4、2的复合颗粒分别转染人肝癌HepG-2细胞24 h后,转染率分别为33.78%、45.82%、50.98%、69.89%、81.22%。Real-time PCR检测结果显示:质量比为4的CS-DMAAPS/siRNA复合颗粒转染人肝癌HepG-2细胞48 h后,对人肝癌HepG-2细胞的Bcl-2基因沉默效率为26.8%。结论壳聚糖-磺酸甜菜碱(CS-DMAAPS)化合物能实现siRNA对人肝癌HepG-2细胞的转染,且细胞相容性良好,能实现目标基因的部分沉默。 董伟 李大玉 惠景 范芳 李长福 姜念 刘云 朱欣婷关键词:壳聚糖 人肝癌HEPG-2细胞 SIRNA 半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺递送siRNA对肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中MRE11表达的影响 被引量:2 2017年 背景:壳聚糖是一种常用的非病毒载体,具有良好生物相容性、生物可降解性、低毒等优点,但其基因递送能力相对较弱,常需要进行结构衍生修饰。目的:观察半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺(LA-CS-PEI)在肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中递送si RNA的能力及对减数分裂重组蛋白11(MRE11)表达的影响。方法:1将肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu或人肝细胞HL-7702分别与0,10,20,40,80,100 mg/L的LA-CS-PEI或壳聚糖-聚乙烯亚胺共培养24 h,检测细胞存活率;2将LA-CS-PEI与si RNA-FAM分别以0,2,4,8,16,32的质量比混合,制备复合转染颗粒。以复合转染颗粒转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu,48,72,96 h后,以转染效率筛选最佳质量比与转染时间,进行下步实验;3以复合转染颗粒、LA-CS-PEI、si RNA分别转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu 48 h后,以未转染的细胞为空白对照,检测MRE11基因及蛋白的表达。结果与结论:1与壳聚糖-聚乙烯亚胺相比,LA-CS-PEI毒性更低,且当LA-CS-PEI质量浓度高达100 mg/L时,仍表现出很低的细胞毒性;2LA-CS-PEI与si RNA-FAM质量比为4和8时转染效率均达95%以上,入胞效率极高,转染48 h转染效果最好,所以后续实验选择质量比为8,转染时间为48 h的复合转染颗粒;3复合转染颗粒组MRE11基因及蛋白表达低于LA-CS-PEI组、si RNA组、空白对照组(P<0.05);4结果表明,LA-CS-PEI能实现si RNA的有效递送,并能沉默肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中的MRE11基因。 刘云 潘杰 董伟 惠景 李三华 范芳 朱欣婷关键词:壳聚糖 聚乙烯亚胺 去唾液酸糖蛋白受体 应用多功能荧光酶标仪分析盐酸阿霉素含药量 被引量:4 2015年 目的建立应用多功能荧光酶标仪对盐酸阿霉素(多柔比星)含药量直接进行荧光分析的方法。方法在体系为0.050 mol/L氨丁三醇(p H 6.30)条件下设定激发波长和发射波长分别为495、595 nm,应用多功能酶标仪测定盐酸阿霉素荧光值。结果盐酸阿霉素为0.78~25.00μM时荧光强度呈良好线性(R2=0.979),加样回收率达97.97%以上。该法用于测定SD大鼠血样中盐酸阿霉素时回收率为98.30%~98.80%。结论该法具有较好的准确度与灵敏度,适用于盐酸阿霉素含药量测定及在血样中的分析测定。 侯玉群 胡姗姗 宋长伟 董伟 惠景 朱欣婷 范芳 刘云关键词:氨丁三醇 血清