谭拥军
- 作品数：23 被引量：23H指数：3
- 供职机构：湖南大学生物学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生交通运输工程建筑科学更多>>
- 激活JNK后对神经胶质瘤抑瘤效果的探究
- 2020年
- 本文使用茴香霉素激活神经胶质瘤U251细胞内c-jun氨基末端激酶(JNK)活性,实现激活后的JNK对神经胶质瘤抑瘤效果的探究,并找到受JNK调节的关键转录因子。试验首先利用在线分析网站预测出受JNK调节的相关肿瘤模型,通过使用茴香霉素(JNK激动剂)实现对细胞内磷酸化JNK(P-JNK)水平的有效调节,并通过蛋白质印迹法(Western blot)探究其发挥作用的最适条件;然后通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测、细胞计数、细胞划痕和流式细胞检测等试验,探究激活后的JNK对U251细胞的增殖、迁移能力以及细胞周期的影响;最后通过转录组测序(RNA-seq)技术分析找到受JNK调节的关键转录因子。试验结果表明:生物信息数据分析JNK与神经胶质瘤的发生和发展存在很强的相关性;1.0μg/mL茴香霉素作用于神经胶质瘤U251细胞1.0 h后,可有效激活细胞内源性JNK活性,抑制细胞的增殖和迁移,并导致细胞周期阻滞;RNA-seq分析揭示了JNK可能通过调节P53活性实现抑制神经胶质瘤的生长。本文研究发现,激活JNK后能够对神经胶质瘤产生抑瘤效果,为JNK可作为神经胶质瘤的治疗靶点提供了依据,通过RNA-seq分析找到的转录因子P53为进一步探究JNK影响神经胶质瘤发生发展的机制提供了方向。
- 姜瑞芬谭拥军黄明敏
- 关键词：JNK抑瘤
- E-cadherin启动子的荧光示踪体系的建立及验证
- 2020年
- 为实现对肺癌A549细胞的EMT示踪,构建了E-cadherin基因启动子的慢病毒质粒,并与包装质粒pVSVG、Δ8.91共转染HEK293T细胞,包装成有活性的慢病毒,收取病毒感染A549细胞,利用流式细胞仪和Western blot检测感染成功.进一步用TGF-β诱导感染成功的A549细胞,通过在荧光显微镜下观察荧光变化、荧光定量PCR和Western blot检测GFP和E-cadherin的变化,发现在TGF-β诱导48 h后,A549细胞形态由鹅卵石样变成长梭形.并且荧光显微镜观察到相比较于未诱导的细胞,诱导后的A549细胞绿色荧光明显变暗,同时GFP和E-cadherin的RNA水平和蛋白质表达水平均降低.以E-cadherin基因启动子为基础建立了A549细胞的EMT荧光示踪体系,为进一步研究肺癌的EMT过程提供了材料.
- 谭拥军吴东丽余雳陈燕
- 关键词：启动子E-CADHERIN示踪肺癌细胞
- 四环素诱导表达CARM1在乳腺癌细胞中的生物学效应
- 2021年
- 为了探究共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(CARM1)在乳腺癌细胞中的生物学作用,构建了四环素诱导过表达CARM1的乳腺癌MDA-MB-231细胞株,并应用蛋白质印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)对相关指标进行检测。结果发现,在乳腺癌细胞株中成功诱导CARM1过表达之后,CARM1蛋白水平和mRNA水平均显著升高。此外,利用细胞划痕、平板克隆、细胞增殖试验、流式细胞术等试验方法检测过表达CARM1对细胞迁移、增殖、克隆形成以及细胞周期进程的影响。试验结果显示,诱导CARM1过表达后,细胞迁移能力和克隆形成能力均明显增强,同时细胞增殖试验表明细胞的增殖能力也明显增强。流式细胞术分析发现,诱导表达CARM1后,细胞株S期和G2/M期的细胞比率增加,过表达CARM1能够促进细胞周期的进程。以上研究结果提示,在乳腺癌细胞中过表达CARM1可以促进细胞的增殖、提高细胞的克隆形成及迁移的能力,加快细胞周期进程。该结论为后续CARM1在乳腺癌细胞中的相关研究奠定了基础。
- 张倩陈涛琳余雳黄明敏谭拥军
- 关键词：细胞迁移
- 转录因子FoxM1——癌症治疗新靶点被引量：5
- 2011年
- 转录因子FoxM1是Forkhead Box转录因子家族成员之一,与细胞增殖、胚胎发育、衰老、再生和肿瘤等许多病理生理过程密切相关。目前发现,在人类大多数肿瘤中FoxM1都具有较高的表达水平。并且,FoxM1与多种致瘤信号途径相关。FoxM1在细胞中的特殊功能以及与肿瘤的密切关系,使之成为肿瘤治疗的新靶点。
- 余琪琪孟蕾谭拥军
- 关键词：FOXM1转录因子癌症治疗
- Foxa2调控P19胚胎癌细胞心肌分化过程的分子机制被引量：2
- 2013年
- 目的:研究转录因子forkhead box A2(Foxa2)在P19胚胎癌细胞心肌分化过程中的作用及其分子机制。方法:运用在P19细胞胚胎小体(embryoid bodies,EBs)培养基中加入二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的方法将P19细胞诱导分化成心肌细胞,运用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法检测诱导分化过程中不同时间点细胞样本中胚胎性干细胞多能性相关基因(Nanog)、心肌分化相关基因[Cerberus1(Cer1)和Sonic Hedgehog(Shh)]及Foxa2的mRNA水平,用免疫荧光染色的方法检测分化成熟的心肌细胞。同时分别运用转染真核表达质粒pCMV-rFoxa2(大鼠Foxa2)和构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)-rFoxa2 P19细胞株的方法以提高P19细胞中Foxa2的表达水平,采用RT-PCR和Western印迹的方法检测上述细胞样本中多能性相关基因和心肌分化相关基因的mRNA和蛋白水平,及其EBs分化体系中心肌分化相关基因的mRNA水平。结果:P19细胞经DMSO诱导后分化形成心肌细胞,并伴随有Foxa2的表达激活。转染pCMV-rFoxa2质粒能在P19细胞中瞬时高量表达rFoxa2并激活其下游Cer1的转录。运用稳定表达GFP-rFoxa2的P19细胞株增高Foxa2的表达可以抑制Nanog的表达,并激活Shh的表达,促进P19细胞EBs心肌分化,表达Cer1和心脏α肌动蛋白(actin,alpha cardiac muscle 1,Actc1)。结论:Foxa2参与P19细胞心肌分化过程,Foxa2在DMSO诱导P19细胞心肌分化过程中的作用机制可能为直接抑制Nanog的表达,并激活Cer1和Shh的表达。
- 朱洪张震刘义陈燕谭拥军
- 关键词：P19细胞DMSO心肌分化
- 3D打印技术在干细胞再生领域的发展及应用被引量：2
- 2020年
- 三维(3D)打印技术是一种快速成型技术,能够以多种材料为基础,让目标物体一次成型,而干细胞治疗技术能够突破传统医学所面临的多项瓶颈,具有前瞻性的研究意义。3D生物打印就是两种技术结合的产物,文章将阐述两项技术的主要内容和技术结合后的发展及应用实例,并总结新技术对再生医学领域所带来的突破和成果,展望3D打印技术在干细胞再生领域的未来。
- 庄东林赵明一刘南波何标川黄焕雷朱平谭拥军(审校)
- 关键词：3D打印干细胞器官移植
- 生物素化FOXM1真核表达体系的构建及鉴定
- 2016年
- 建立基于生物素AP-tag标签的FOXM1真核表达载体,利用生物素与链霉亲和素的高特异性、高亲和力的结合性质对FOXM1蛋白进行纯化,为后续鉴定其互作分子的研究奠定基础。分别构建真核表达载体pc DNA3.1-AP-FOXM1和大肠杆菌生物素连接酶Bir A真核表达载体pcDNA3.1-Bir A,将pcDNA3.1-AP-FOXM1和pcDNA3.1-BirA共转染人胚肾293T(HEK293T)细胞,用银染及Western印迹检测细胞裂解液,确定相关蛋白表达;用链霉亲和素琼脂糖珠纯化生物素标记的FOXM1,并考察FOXM1的互作蛋白是否可以同时被洗脱下来。研究发现构建的生物素标签真核表达体系能有效表达生物素化的目标蛋白FOXM1;该蛋白在Western印迹、pull-down等实验中可实现无需抗体的一步法应用;该体系可用于FOXM1互作蛋白的鉴定和功能分析。结果表明建立了基于生物素AP-tag标签的FOXM1真核表达体系,为FOXM1互作蛋白与功能的深入研究奠定了技术基础。
- 邹红春谭桂湘谭拥军
- 关键词：293T细胞蛋白印迹
- 基于CRISPR/Cas9系统构建FOXA2表达示踪体系
- 2018年
- 利用CRISPR/Cas9系统在基因FOXA2蛋白质编码区后插入绿色荧光蛋白核酸序列,实现对FOXA2基因开启和关闭的示踪。通过靶向序列选择、Cas9靶向质粒及Donor片段的克隆、细胞转染并进行流式细胞荧光分选、阳性细胞有限稀释、富集培养及单克隆细胞的鉴定和转录翻译水平验证等5个方面,进行实验研究。在编辑的乳腺肿瘤细胞MCF-7中,绿色荧光蛋白有效表达;乳腺癌细胞内绿色荧光蛋白的表达水平同FOXA2蛋白的表达水平正相关,且经肿瘤细胞上皮间质转化进程诱导因子EGF的诱导,绿色荧光蛋白和FOXA2表达水平同步降低。方法学上CRISPR/Cas9靶向FOXA2并利用细胞内同源性定向修复插入绿色荧光蛋白序列成功;利用报告基因蛋白表达水平示踪目的基因的开启、关闭及表达量高低结果准确、方法简单,效果明显。
- 程浩杰张振旺谭桂湘刘昱翔卜会铜谭拥军
- 关键词：示踪乳腺癌MCF-7上皮间质转化
- 人FOXA1蛋白的原核表达、纯化及蛋白互作分析
- 2016年
- 构建FOXA1的原核表达载体,诱导表达并纯化后获得人FOXA1的C端和N端蛋白片段,为寻找FOXA1的互作蛋白提供材料基础.提取人乳腺癌细胞MCF7的总RNA,逆转录成cDNA,设计引物PCR克隆FOXA1的cDNA,再以此为模板扩增FOXA1的C端、N端cDNA片段,分别并克隆进带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒.双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21Rosetta DE3,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定FOXA1蛋白的表达.与MCF7细胞裂解液孵育,进行GST-Pull down试验,检测纯化蛋白与FOXA1已知互作蛋白TLE3的相互作用.成功构建pGEX-4T-1-FOXA1-C和pGEX-4T-1-FOXA1-N的原核表达载体;在大肠杆菌中诱导目的蛋白表达;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,获得了人FOXA1的C端蛋白片段GST-FOXA1-C与N端蛋白片段GSTFOXA1-N;证实GST-FOXA1-C能与FOXA1已知互作蛋白TLE3的相互作用.
- 谭拥军陈竹林陈团辉向勤
- 关键词：原核表达相互作用蛋白
- 肿瘤抗原肽M1-10的抑瘤活性研究被引量：1
- 2022年
- 基于生物信息学分析筛选出一段源于转录因子FOXM1的肿瘤抗原肽M1-10。通过淋巴细胞增殖、干扰素γ释放及细胞杀伤等试验,证实M1-10肽段可在小鼠体内诱导有效的免疫记忆,与HJURP、MELK、VEGFR1、VEGFR2来源的四种抗原肽联用可产生更好的效果。运用小鼠乳腺癌移植瘤模型和MMTV-PyMT原发乳腺癌模型开展M1-10单独或联合四种抗原肽的肿瘤预免疫试验,发现M1-10单独使用可发挥显著的抑瘤效果,联合四种抗原肽的抑瘤效果更强。总之,本研究开发了一种肿瘤抗原肽,该肽免疫原性强,单独或与其他肿瘤抗原肽联用时可实现有效的肿瘤免疫。该结论为FOXM1的抗肿瘤机制提供了进一步的见解。
- 黄文强卜会铜裴超柱黄明敏谭拥军
- 关键词：免疫记忆肿瘤免疫
