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丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建: 2015年; 目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。; 赵海卫韩佩君姚敏吕欣雷迎峰杨敬乔卿华翁代慧党品香尹文; 关键词：丙型肝炎病毒转基因小鼠模型

HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建: 目的构建表达HCV NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵，制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠；通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6...; 赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文; 关键词：丙型肝炎病毒动物模型

萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用被引量：1: 2015年; 萤光素酶是一类在氧气存在下能催化其底物特异性发光的酶,检出灵敏度高、特异性强。萤光素酶催化底物发光因无须外源光的激发,避免了非特异性干扰,具有其他报告基因不可替代的优势。萤光素酶基因作为报告基因已成为医学科学研究领域的重要标记工具,具有良好的应用前景。我们简要综述了萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用进展。; 赵海卫韩佩君吕欣尹文; 关键词：萤光素酶报告基因病毒

HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建: 目的：构建表达HCV NS3-5B 蛋白的转基因小鼠模型。方法：显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B 载体到小鼠受精卵，制备并传代筛选HCV NS3-5B 转基因小鼠;通过血清ALT、AST 检测和肝脏HE...; 赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文; 关键词：丙型肝炎病毒动物模型

CRISPR/Cas9系统——靶向基因组编辑的新策略被引量：7: 2015年; CRISPR/Cas系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。Ⅱ型CRISPR/Cas系统经人工改造为由Cas9核酸酶和特异的sgRNA构成的新型靶向基因组编辑技术,即CRISPR/Cas9系统。与锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)相比,CRISPR/Cas9系统操作简单,花费低,编辑功能更强。本文综述了CRISPR/Cas9系统的基本结构、作用机制和应用进展,并对其应用前景进行了展望。; 赵海卫吕欣尹文; 关键词：分子靶向治疗

表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定被引量：2: 2014年; 目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。; 乔卿华吕欣雷迎峰杨敬姚敏韩佩君党品香赵海卫翁代慧尹文; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌细胞株慢病毒

实时检测HCV RdRp酶活性的真核表达载体的的构建与功能检测: <正>目的构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-(-)5′UTR-EMCV IRES-DsRed2-rvGLuc-(-)3′UTR并进行功能检测。方法设计含有HCV负链5′UTR序列、负链3′UTR序列、EMCVIRE...; 韩佩君吕欣雷迎峰杨敬姚敏乔卿华翁代慧赵海卫党品香尹文; 文献传递

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赵海卫