邵蕾
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠降钙素基因相关肽基因重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞的表达
- 2010年
- 目的:利用AdEasy腺病毒载体系统,构建小鼠降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)基因重组腺病毒载体,并验证其在心肌细胞中的表达。方法:采用RT-PCR方法扩增出含有小鼠CGRP全长cDNA的基因片段,并将其插入PUC57载体,经EcoRⅤ和SalⅠ双酶切,将小鼠CGRP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV,形成重组质粒pShuttle-CMV-CGRP。经Pm eⅠ酶切线性化后,在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组产生重组腺病毒质粒AdEasy-pShuttle-CGRP。重组腺病毒质粒在XL-Gold细胞中扩增,经PacⅠ酶切线性化后,转染人胚肾293细胞进行重组腺病毒的包装,并经氯化铯纯化得到重组腺病毒AdEasy-pShuttle-CGRP。用纯化后的重组腺病毒转染原代培养的乳鼠心肌细胞,荧光显微镜下观察转染效果。通过尾静脉导入重组腺病毒7 d后,放免法测定心肌中CGRP的表达量。结果:测序证实PUC57-CGRP重组质粒中含有小鼠CGRP基因的cDNA;重组穿梭质粒pShuttle-CMV-CGRP经双酶切鉴定后可见约7.5 kb和423 bp片段;重组腺病毒质粒AdEasy-pShuttle-CGRP经PacⅠ酶切可见长约3kb与30 kb DNA片断。转染293细胞进行包装,7 d后细胞出现病变效应,回收病毒重复感染293细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。提取病变293细胞中重组腺病毒进行目的基因的PCR鉴定为阳性。构建好的重组腺病毒经纯化后具有很高的滴度,并且成功转染了原代培养的乳鼠心肌细胞。通过放免法证实,该载体可以显著增加小鼠心脏中CGRP的表达。结论:成功构建携带CGRP基因的重组腺病毒载体,该重组腺病毒载体AV-CGRP可以显著增加心脏中CGRP的表达量,为进一步研究CGRP基因治疗奠定了基础。
- 孙智慧韩杰邵蕾王利宏宋俊贤魏钟海郑良荣
- 关键词：降钙素基因相关肽基因疗法
- 糖尿病心脏感觉神经末梢TRPV1受体的改变
- 目的:研究糖尿病心脏感觉神经末梢 TRPV1受体及其神经递质的变化。推测糖尿病时心脏感觉神经末梢 TRPV1受体及其神经递质减少,从而减弱了心脏在心肌缺血时的自我保护机制,引起或者加重心肌梗死。方法:将 C57BL/6J...
- 郑良荣宋俊贤徐超魏钟海邵蕾王利宏
- 文献传递
- CGRP基因重组腺病毒载体的构建
- 目的:利用AdEasy腺病毒载体系统,构建并鉴定小鼠降钙素基因相关肽基因（calcitonin gene-related peptide,CGRP）重组腺病毒载体。方法:采用RT-PCR方法扩增出含有小鼠CGRP全长cD...
- 韩杰邵蕾王利宏陈童宋俊贤魏钟海郑良荣
- 关键词：降钙素基因相关肽基因治疗
- 文献传递
