何小莉
- 作品数：25 被引量：94H指数：6
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 携带分子标记的PCV1-2嵌合病毒的构建及其生物学特性的初步分析被引量：1
- 2018年
- 为构建携带分子标记的PCV1-2嵌合病毒,本研究通过基因工程技术将V5标签引入PCV2的ORF2末端,以ORF2-V5替换PCV1的ORF2后克隆于pcDNA3.1(+)载体中,构建pcDNA-PCV1-2m-V5。为检验pcDNA-PCV1-2m-V5的体外感染性,将其转染PK-15细胞后,采用IPMA、RT-PCR等技术进行检测,结果显示:pcDNA-PCV1-2m-V5具有感染性。采集已注射pcDNA-PCV1-2m-V5质粒的小鼠血清接种于PK-15细胞,应用细胞试验、PCR技术、IFA、western blot及电镜等试验对嵌合病毒进行鉴定。结果显示:在小鼠体内拯救出PCV1-2m-V5嵌合病毒,且V5标签的引入能够很好地区分嵌合病毒和亲本病毒产生的Cap蛋白。本实验可为PCV2的感染性DNA (iDNA)疫苗研发提供素材和参考。
- 徐国代振江曾智勇梁海英汤德元王彬黄涛叶百川张爱琼何小莉咸文
- 关键词：拯救
- 猪伪狂犬病病毒GZYY2015变异株的分离鉴定被引量：1
- 2021年
- 本试验旨在从贵州省贵阳市云岩区某养猪场送检的经检测为猪伪狂犬病(PR)的样品中分离猪伪狂犬病病毒(PRV)。用细胞接毒试验、理化试验和透射电镜观察等方法分离、鉴定病原,测定病原的毒价后进行动物试验和gD、gE基因序列比对分析。结果显示,细胞接毒试验成功分离能致Vero细胞产生典型病变的PRV。理化试验表明,该分离毒株对5-碘脱氧尿核苷(idoxuridine,IUDR)和有机溶剂氯仿敏感,不耐酸和热。在透射电镜下可见近圆形、有囊膜、150~160 nm大小的成熟病毒粒子,在胞核中可见衣壳呈晶格状排列的病毒包涵体,有实心和空心2种形态;动物试验表明,该毒株对兔具有较强的致病性,可导致接种部位奇痒;核酸鉴定结果表明,扩增获得的PRV gD基因开放阅读框(ORF)为1209 bp,gE基因ORF为1740 bp。GenBank比对结果显示,gD基因与PRV JS 2012株(登录号:KP257591)、PRV HNB株(登录号:KM189914.3)核苷酸序列相似性均为99.8%,与疫苗株Bartha-K61(登录号:JF797217.1)相似性为98.7%;gE基因与PRV JS2012株(登录号:KP257591)、PRV HNB株(登录号:KM189914.3)和PRV Qihe547(登录号:KU056477)核苷酸序列相似性均为99.9%。基于gD、gE基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析发现,gD、gE基因与国内变异株均位于同一进化分支,对gE基因的遗传变异性分析结果表明,该分离毒株符合PRV变异株的变异模式。本试验结果表明,成功分离PRV变异株,可为贵州省PRV的流行病学遗传进化分析及免疫防控等提供参考。
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- 关键词：伪狂犬病病毒变异株GE基因GD基因
- 某猪场CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的报道被引量：1
- 2017年
- 贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和(或)产死胎症状,猪场工作人员向笔者实验室送检同窝流产死胎4只。根据流行情况和临床特征,初步判断与病毒感染有关。为筛查具体病原,本实验室将送检死胎组织混合样品分别对CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV六种常见病毒进行病原核酸检测,结果显示该猪场发病猪存在CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。
- 徐国代振江曾智勇叶百川张爱琼咸文何小莉
- 关键词：CSFVPRRSVPCV2PRV
- 一例猪轮状病毒感染引发仔猪腹泻的诊断被引量：5
- 2018年
- 为了查明贵州省黔西县某猪场仔猪持续腹泻、消瘦死亡的病因,试验采用RT-PCR法对送检样品进行猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒检测,并对RT-PCR产物进行测序分析。结果表明：送检仔猪腹泻为猪轮状病毒感染所引起,经序列分析发现该毒株属猪A群轮状病毒,并与G10血清型位于同一遗传进化分支。说明近年来在普遍发生的猪腹泻病例中,除猪流行性腹泻病毒和传染性胃肠炎病毒外,还存在猪轮状病毒感染的情况。
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- 关键词：猪轮状病毒腹泻RT-PCR
- 贵州省PCV2流行株的分型及遗传变异分析被引量：3
- 2018年
- 为了解贵州省猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行病学及遗传变异情况,本文收集2012～2016年间16株贵州PCV2流行毒株和NCBI上报道登录的35株PCV2序列作生物信息学分析。分析结果显示,在本次所分析的各PCV2毒株之间核苷酸变异率较大的分别为ORF6(32. 22%)、ORF10(29. 63%)、ORF2(24. 11%)、ORF5(21. 60%)、ORF7(20. 00%);遗传进化表明,贵州省16株PCV2序列中3株为PCV2a型,5株为PCV2b型,8株为PCV2d型;其中PCV2d型已经逐渐过渡成为贵州省的主要流行毒株,且同种基因型之间ORF2所编码的氨基酸序列保守性相对较高。表明PCV2流行毒株之间由于基因型的不同,可能会导致免疫力或致病力的改变。该结果以期为贵州省PCV2的防控、流行病学的研究提供一定的参考。
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- 关键词：基因型ORF生物信息学
- PCV-2 GZ-BJJS2015株感染性克隆质粒的构建被引量：1
- 2018年
- 为了解贵州地区猪圆环病毒2型（PCV-2）的遗传变异情况,丰富贵州省PCV-2的病毒库,试验应用PCR反向遗传操作技术构建感染性克隆质粒,从送检的病毒血症样品中拯救获得1株PCV-2毒株,将其命名为PCV-2 GZ-BJJS2015,并进行测序及比对分析。结果表明：该病毒基因组大小为1 767 bp,属于PCV-2b型;与参考株pmws（AF027217）相比,其ORF5在1 042位缺失1个碱基T,ORF9在第92位发生基因突变,致使ORF9不能编码蛋白;ORF5与病毒毒力有一定关系,其变异可能会影响毒株毒力,ORF9不编码蛋白的意义有待考究。根据强弱毒株特征性氨基酸位点的差异比较结果,可初步推测该毒株为PCV-2强毒株。
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- 关键词：猪圆环病毒2型反向遗传操作技术病毒拯救
- 某猪场PRRSV与PCV2双重感染的诊断被引量：2
- 2017年
- 2017年2月,贵州某猪场发生以仔猪皮炎和持续性腹泻为特征的临床病例。为查明病因,送检发病保育仔猪2头于实验室进行病原诊断。根据流行病学情况、临床症状、病理解剖与PCR/RT-PCR检测,确诊该猪场送检保育猪存在猪蓝耳病病毒与猪圆环病毒2型的双重感染。
- 徐国曾智勇代振江叶百川张爱琼咸文何小莉
- 关键词：PRRSVPCV2
- 波兰猪场中首次检测到猪圆环病毒3型被引量：1
- 2018年
- 猪圆环病毒系圆环病毒科圆环病毒属成员，为二十面体对称结构，无囊膜，单股负链DNA，基因大小约2000bp，是现在已知最小的能自主复制的病毒之一。迄今为止，两种猪圆环病毒（PCV）已被人们广泛研究，PCV1对猪没有致病性，PCV2是PCV相关疾病的主要致病因子。
- 何小莉曾智勇梁海英T.Stadejek
- 关键词：猪圆环病毒猪场PCV2致病因子
- 猪圆环病毒研究进展被引量：25
- 2018年
- 猪圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属,病毒粒子为二十面体对称结构,无囊膜,单股负链DNA,基因大小约2 000 bp,是现在已知最小的动物病毒之一。本文就近年国内外报道的猪圆环病毒(PCV1、PCV2、PCV3)的病原学、分子流行病学、致病机理、临床诊断方法以及防控等方面进行综述,以期为PCV诊断和防治等提供一定参考。
- 何小莉梁海英曾智勇汤德元王彬黄涛徐国叶百川咸文张爱琼陈娟吴好叶
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 贵州省猪圆环病毒3型的分子流行病学调查被引量：14
- 2018年
- 近年来在我国多个省份检测出新型猪圆环病毒3型（porcine circovirus 3,PCV3）,为确定贵州省是否也存在该病毒,本试验对92个规模化养殖场2016—2017年所送检的308份样品采用PCR技术进行PCV3筛查,并对部分阳性样品中的ORF2进行PCR扩增、克隆及测序,将测序结果与GenBank上公布的26株ORF2序列进行遗传进化树构建、核苷酸和氨基酸比对。结果首次证实贵州省PCV3的存在,在15份PCV3阳性病料中有13份存在与其他病原共同感染现象,且多以腹泻为临床表现;株间核苷酸同源性为98.0%～100.0%,与参考毒株同源性为96.3%～99.8%,与参考株氨基酸比对相似性为97.2%～100%,遗传进化关系相对较复杂。本试验为我国PCV3的流行状况研究提供了一定的数据依据。
- 徐国梁海英曾智勇叶百川张爱琼咸文何小莉
- 关键词：ORF2分子流行病学
